Vyhláška, kterou se mění vyhláška Ministerstva zemědělství č. 124/2001 Sb., kterou se stanoví požadavky na odběr vzorků a principy metod laboratorního zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů a způsob uchovávání vzorků, 497/2004 Sb., vyhlášené znění

Předchozí stránka

Vzorek je extrahován methanolickým roztokem Tween 80. Extrakt se dekantuje nebo odstředí a potom vhodně naředí. Jeho antibiotická aktivita se stanovuje měřením difúze virginiamycinu v agaru, do něhož byl naočkován mikroorganismus Kocuria rhizophila (CCM 552). Difúze se projevuje vytvořením inhibičních zón. Průměr těchto zón se považuje za přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika v rozsahu použitých koncentrací.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu virginiamycinu:

Opakovatelnost
do 10 mg/kg	2 mg/kg
od 10 do 25 mg/kg	20 % relat. z vyššího výsledku
od 25 do 50 mg/kg	5 mg/kg
nad 50 mg/kg	10 % relat. z vyššího výsledku

Reprodukovatelnost

Nestanovena.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti 2 mg/kg.

2. Antikokcidika

2.1. Stanovení obsahu amprolia

Účel, rozsah a princip

Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu amprolia v krmivech a premixech. Mez detekce je 1 mg/kg.

Vzorek se extrahuje směsí methanol - voda. Po zředění extraktu mobilní fází a membránové filtraci se obsah amprolia stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s výměnou kationtů a s UV detekcí.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu amprolia:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
od 25 do 500 mg/kg	15 % relat. z vyššího výsledku
od 500 do 1 000 mg/kg	75 mg/kg
nad 1 000 mg/kg	7,5 % relat. z vyššího výsledku

Reprodukovatelnost

Je uvedena u metody.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 25 mg/kg.

2.2. Stanovení obsahu maduramicinu

Účel, rozsah a princip

Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu maduramicinu v premixech.

Obsah maduramicinu se stanoví po extrakci vzorku extrakční směsí, následném přečištění na pevné fázi a postkolonové derivatizaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s použitím UV detekce při vlnové délce 598 nm

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu maduramicinu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
do 5 mg/kg	10 % relat.
od 800 do 1200 mg/kg	5 % relat.

Reprodukovatelnost

Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu maduramicinu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost
do 10 mg/kg	30 % relat.
od 10 do 30 mg/kg	3 mg/kg.
nad 30 mg/kg	10 % relat.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 0,9 mg/kg.

2.3. Stanovení obsahu methylbenzochátu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu methylbenzochátu v krmivech a premixech.
Obsah methylbenzochátu se stanoví po extrakci vzorku methanolovým roztokem methansulfonové kyseliny, po přečištění extrakcí dichlormethanem je izolován na chromatografickém ionexovém sloupci a znovu extrahován dichlormethanem, nakonec stanoven vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu methylbenzochátu od 4,0 do 20 mg/kg hodnotu 10 % relat. z vyššího výsledku.
Reprodukovatelnost
Je uvedena u metody.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.

2.4. Stanovení obsahu narasinu

Účel, rozsah a princip

Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu narasinu v krmivech a premixech.

Obsah narasinu se stanoví po extrakci směsným rozpouštědlem, extrakt je přečištěn na pevné fázi a takto přečištěný extrakt je rozpuštěn v definovaném objemu mobilní fáze. Narasin se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi a po postkolonové derivatizaci s p-dimethylaminobenzaldehydem při 90 °C je detekován UV-detektorem při vlnové délce 600 nm.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu narasinu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
do 25 mg/kg	20 % relat.
od 25 do 50 mg/kg	5 mg/kg
od 50 do 100 mg/kg	10 % relat.
od 100 do 200 mg/kg	10 mg/kg
nad 200 mg/kg	5 % relat.

Reprodukovatelnost

Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu narasinu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost
do 25 mg/kg	40 % relat.
od 25 do 50 mg/kg	10 mg/kg
od 50 do 100 mg/kg	20 % relat.
od 100 do 200 mg/kg	20 mg/kg
nad 200 mg/kg	10 %relat.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 1,4 mg/kg.

2.5. Stanovení obsahu nikarbazinu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení nikarbazinu v krmivech a premixech.
Nikarbazin se stanoví po extrakci ze vzorku extrakčním roztokem acetonitril - voda naředěním mobilní fází vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s isokratickou elucí na koloně C18 s UV detekcí při vlnové délce 351 nm.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.

2.6. Stanovení obsahu robenidinu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení robenidinu v krmivech.
Vzorek se extrahuje okyseleným methanolem. Extrakt se vysuší a jeho alikvotní část se přečistí na koloně s oxidem hlinitým. Robenidin se eluuje z kolony methanolem, koncentruje se a na vhodný objem se upraví pomocí mobilní fáze. Obsah robenidinu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi pomocí UV detektoru.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu robenidinu nad 15 mg/kg překročit 10 % relat. vyššího výsledku.
Reprodukovatelnost
Je uvedena u metody
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 5 mg/kg.

2.7. Stanovení obsahu meticlorpindolu

Účel, rozsah a princip

Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu meticlorpindolu v krmivech a premixech.

Obsah meticlorpindolu se stanoví po extrakci vzorku směsným rozpouštědlem methanolamoniak a po jeho převedení do mobilní fáze vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 265 nm.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu meticlorpindolu.

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
do 100 mg/kg	5 % relat.
od 100 do 200 mg/kg	5 mg/kg

Reprodukovatelnost

Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu meticlorpindolu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost
od 50 do 200 mg/kg	15 % relat.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 3,6 mg/kg.

2.8. Stanovení obsahu salinomycinu
Metoda stanovení obsahu salinomycinu je uveden v příloze č. 10, část 1.

2.9. Stanovení obsahu monensinu
Metoda stanovení obsahu monensinu je uveden v příloze č. 10, část 1.

2.10. Stanovení obsahu halofuginonu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu halofuginonu v krmivech a premixech.
Obsah halofuginonu se stanoví jako volná base po extrakci horkou vodou do ethylacetátu a následně se rozdělí jako hydrochlorid do vodného kyselého roztoku. Extrakt se přečistí na ionexové chromatografické koloně. Obsah halofuginonu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV-detekcí.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu halofuginonu do 3 mg/kg hodnotu 0,5 mg/kg.
Reprodukovatelnost
Je uvedena u metody.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.

2.11. Stanovení obsahu ethopabátu

Účel, rozsah a princip

Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu ethopabátu v krmivech a premixech. Obsah ethopabátu se stanoví po extrakci vzorku methanolem a přečištění chromatografií na pevné fázi vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s fluorescenční detekcí.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu ethopabátu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
do 1 mg/kg	40 % relat.
od 1 do 4 mg/kg	0,4 mg/kg
od 4 do 20 mg/kg	10 % relat.
od 20 do 1 000 mg/kg	nestanovena
nad 1 000 mg/kg	5 % relat.

Reprodukovatelnost

Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu ethopabátu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost
do 1 mg/kg	nestanovena
od 1 do 20 mg/kg	20 % relat.
od 20 do 1 000 mg/kg	nestanovena
nad 1 000 mg/kg	15 % relat.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 0,03 mg/kg.

2.12. Stanovení obsahu semduramicinu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech a premixech.
Obsah semduramicinu se stanoví po extrakci vzorku extrakční směsí, následném přečištění na pevné fázi a postkolonové derivatizaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s použitím UV detekce při vlnové délce 598 nm.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.

2.13. Stanovení obsahu diclazurilu

Účel, rozsah a princip

Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu diclazurilu v krmivech a premixech. Mez detekce je 0,1 mg/kg.

Vzorek se po přidání interního standardu extrahuje okyseleným methanolem. U krmiv se alikvotní část extraktu přečistí na SPE patroně C18. Diclazuril se z patronky eluuje směsí okyseleného methanolu a vody. Po odpaření se zbytek rozpustí ve směsi dimethylformamidu a vody. U premixů se extrakt odpaří a zbytek se rozpustí ve směsi dimethylformamidu a vody. Obsah diclazurilu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s ternárním gradientem a UV-detekcí.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu diclazurilu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
do 2,5 mg/kg	30 % relat. z vyššího výsledku
od 2,5 do 5 mg/kg	0,75 mg/kg
nad 5 mg/kg	15 % relat. z vyššího výsledku

Reprodukovatelnost

Je uvedena u metody.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 0,5 mg/kg.

2.14 Stanovení obsahu carbadoxu
Účel, rozsah a princip
Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu carbadoxu v krmivech, premixech a doplňkových látkách. Mez detekce je 1 mg/kg.
Vzorek se zvlhčí vodou a extrahuje směsí methanol - acetonitril. Alikvotní podíl extraktu krmiva se po filtraci přečistí na koloně s oxidem hlinitým. Extrakt z premixů a doplňkových látek se přímo ředí na vhodnou koncentraci směsí voda - methanol - acetonitril. Obsah carbadoxu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi s UV detekcí.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu carbadoxu 10 mg/kg a vyšším 15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku.
Reprodukovatelnost
Je uvedena u metody.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 10 mg/kg.

2.15. Stanovení obsahu olachindoxu
Metoda stanovení obsahu olachindoxu je uveden v příloze č. 10, část 1.

2.16. Stanovení obsahu lasalocidu

Účel, rozsah a princip

Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu sodné soli lasalocidu v krmivech, premixech a doplňkových látkách. Mez detekce je 5 mg/kg.

Lasalocid sodný se extrahuje ze vzorku okyseleným methanolem a stanoví se vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s fluorescenční detekcí.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu lasalocidu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
do 100 mg/kg	15 % relat. z vyššího výsledku
od 100 do 200 mg/kg	15 mg/kg
nad 200 mg/kg	7,5 % relat. z vyššího výsledku

Reprodukovatelnost

Je uvedena u metody.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 30 mg/kg.

3. Chemoterapeutika

3.1. Stanovení obsahu dimetridazolu

Účel, rozsah a princip

Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dimetridazolu v krmivech a premixech.

Obsah dimetridazolu se stanoví po extrakci vzorku 90 % methanolem. Následně se přečistí na pevné fázi a stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 309 nm.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost
od 3 do 30 mg/kg	15 % relat.
od 30 do 100 mg/kg	5 mg/kg
nad 100 mg/kg	5 % relat.

Reprodukovatelnost

Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost
od 3 do 25 mg/kg	20 % relat.
od 25 do 50 mg/kg	5 mg/kg
nad 50 mg/kg	10 % relat.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 3 mg/kg.

4. Vitaminy
1. 4.1. Stanovení obsahu cholinu
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu cholinu v krmivech a premixech.
  Obsah cholinu se stanoví po hydrolýze vzorku hydroxidem barnatým a přečištění hydrolyzátu na ionexu na základě vzniku komplexu s reineckátem amonným v prostředí roztoku fosforečnanu sodného spektrofotometricky po rozpuštění komplexu v acetonu při vlnové délce 525 nm. Alternativně je možno provádět stanovení cholinu metodou ITP.
  Opakovatelnost
  Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit 10 % relat.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Mez stanovitelnosti je 20 mg/kg.
1. 4.2. Stanovení obsahu pantothenanu vápenatého
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu pantothenanu vápenatého v premixech.
  Obsah pantothenanu vápenatého se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Saccharomyces carlsbergensis CCM 4288 (ATCC 9080) difúzním plotnovým Metodaem.
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.
1. 4.3. Stanovení vitaminů B1, B2, B6
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminů B1, B2, B6 v krmných směsích.
  Vitaminy B1 (thiamin), B2 (riboflavin) a B6 (pyridoxin) se extrahují ze vzorku krmiva vodou a po hydrolýze kyselinou chloristou se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) s využitím iontových párů na reverzní fázi. Detekce vitaminu B2, a B6 se provádí přímo fluorescenční detekcí, zatímco vitamin B1 se před detekcí nejprve oxiduje derivatizačním činidlem v reakční smyčce postkolonové derivatizace.
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.
1. 4.4. Stanovení obsahu vitaminu B2
  Účel, rozsah a princip
  Používají se dvě metody stanovení obsahu vitaminu B2 v premixech - metoda fluorometrická a metoda difúzně plotnová.
  Obsah vitaminu B2 se stanoví fluorometricky v mírně okyseleném prostředí na základě fluorescence při vlnové délce 440 nm nebo difúzně plotnovou metodou na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Lactobacillus rhamnosus CCM 1825 (ATCC 7469).
  Opakovatelnost
  Pro metodu fluorometrickou nestanovena.
  Pro metodu difuzní plotnovou:
  Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu vitaminu B2 500 000 mg/kg překročit hodnotu 40 500 mg/kg.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.
1. 4.5. Stanovení obsahu vitaminu B6
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu B6 v premixech.
  Vitamin B6 ve všech jeho formách se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu kvasinky Saccharomyces carlsbergensis CCM 4228 (ATCC 9080) difúzním plotnovým způsobem.
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.
1. 4.6. Stanovení obsahu vitaminu A
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A v krmivech a premixech. Vitamin A zahrnuje all-trans retinol a jeho cis izomery, které se touto metodou stanoví. Obsah vitaminu A se vyjadřuje v mezinárodních jednotkách (IU) na kg. Mezinárodní jednotka odpovídá aktivitě 0,3 μg all-trans vitaminu A (alkohol) nebo 0,344 ug all-trans vitamin A (acetát) nebo 0,550 μg all-trans vitaminu A (palmitát).
  Vzorek se hydrolyzuje ethanolickým roztokem hydroxidu draselného a vitamin A se extrahuje petroletherem. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v methanolu a pokud je to nutné, naředí se na vhodnou koncentraci. Obsah vitaminu A se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s UV nebo fluorescenční detekcí. Chromatografické parametry jsou vybrány tak, aby nedocházelo k separaci all-trans vitaminu A (alkohol) a jeho cis izomerů.
  Opakovatelnost
  Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku.
  Reprodukovatelnost
  Je uvedena u metody.
  Mez stanovitelnosti
  Mez stanovitelnosti je 2000 m.j./kg
1. 4.7. Stanovení obsahu vitaminu E
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu E v krmivech a premixech. Obsah vitaminu E se vyjadřuje jako mg DL-α-tokoferol acetátu na kg. 1 mg DL-α-tokoferol acetátu odpovídá 0,91 mg DL-α-tokoferolu (vitamin E).
  Vzorek se hydrolyzuje ethanolickým roztokem hydroxidu draselného a vitamin E se extrahuje petroletherem. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v methanolu a pokud je to nutné, naředí se na vhodnou koncentraci. Obsah vitaminu E se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s UV nebo fluorescenční detekcí.
  Opakovatelnost
  Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 15 % relat. z vyššího výsledku.
  Reprodukovatelnost
  Je uvedena u metody.
  Mez stanovitelnosti
  Mez stanovitelnosti je 2 mg/kg.
1. 4.8. Stanovení obsahu vitaminu D
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu D v krmivech.
  Vitamin D se stanoví po alkalické hydrolýze vzorku hydroxidem draselným za studena, následné extrakci do hexanu, přečištění na semipreparativní koloně Silica metodou HPLC. Frakce vitaminu D se zachytí, odpaří se k suchu a odparek se rozpustí v methanolu. V extraktu se stanoví obsah vitaminu D vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na analytické koloně s reverzní fází C18 s UV detekcí při 265 nm.
  Opakovatelnost
  Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 20 % relat.
  Reprodukovatelnost
  Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit 30 % relat.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.

5. Mikroprvky
1. 5.1. Stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku
  Metoda stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku je uveden v příloze č. 9, část 8.
1. 5.2. Stanovení obsahu kobaltu
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu kobaltu v krmivech.
  Obsah kobaltu se stanoví po mineralizaci vzorku v chloridovém výluhu metodou atomové absorpční spektrometrie (AAS).
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.
1. 5.3. Stanovení obsahu selenu.
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení selenu v krmivech.
  Ve vzorku se po rozkladu kyselinou dusičnou v uzavřeném systému stanoví obsah selenu metodou atomové absorpční spektrometrie (AAS).
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.

6. Výpočty
1. 6.1. Vyhodnocování a výpočet výsledků stanovení obsahu doplňkových látek pro difúzně plotnové metody
  Účel, rozsah a princip
  Metoda uvádí a specifikuje uzančně závazný způsob pro vyhodnocování a výpočet výsledků při stanovení obsahu doplňkových látek v krmivech a premixech pro difúzně plotnové metody.
  Průměry inhibičních resp. stimulačních zón, vzniklých při stanovení doplňkových látek difusně plotnovou metodou, se měří s přesností nejméně na 0,1 mm. Ze souboru takto získaných hodnot se vypočítá aritmetický průměr pro každou koncentraci zkoušeného vzorku i standardu.

7. Barviva
1. 7.1. Stanovení β-karotenu spektrofotometrickou metodou
  Účel, rozsah a princip
  β-karoten je přírodní barvivo chemicky patřící do skupiny tetraterpenoidů a je provitaminem vitaminu A.
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu β-karotenu v krmivech.
  Stanoví se po enzymatické hydrolýze směsí enzymů pepsin - trypsin (1:1) v alkalickém prostředí, rozpuštěním v acetonu a následnou extrakcí do hexanu, spektrofotometricky při vlnové délce 451 nm.
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
  Mez stanovitelnosti
  Nestanovena.

8. Mikrobiotika
1. 8.1. Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Enterococcus
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků rodu Streptococcus skupiny D (Enterococcus) v krmivech a premixech.
  Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Enterococcus se provádí na selektivních půdách podle Slanetze a Bartleye. Jako referenční půda se při stanovení používá další selektivní půda (např. KF agar) nebo u premixů vhodná neselektivní půda. Naočkované půdy jsou kultivovány při 37 °C ± 1 °C. Růst a počty kolonií se vyhodnocují po dvou a čtyřdenní kultivaci.
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.
1. 8.2. Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Bacillus
  Účel, rozsah a princip
  Metoda specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků rodu Bacillus v krmivech.
  Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Bacillus se provádí anaerobní kultivací na krevním agaru při 37 °C. Počty kolonií, charakteristické pro dané mikroorganismy, se vyhodnocují po 18 - 24 hodinách.
  Opakovatelnost
  Nestanovena.
  Reprodukovatelnost
  Nestanovena.“.

21. V příloze č. 11 se pod nadpisem „Seznam postupů fyzikálního zkoušení krmiv“ slova „Název postupu“, „Označení postupu“ a písmeno „A“ zrušují.
22. V příloze č. 12 se pod nadpisem „Seznam postupů smyslového zkoušení krmiv“ slova „Název postupu“, „Označení postupu“ a písmeno „A“ zrušují.
23. V příloze č. 13 se pod nadpisem „Seznam postupů speciálního zkoušení krmiv“ slova „Název postupu“, „Označení postupu“ a písmeno „A“ zrušují.
24. V příloze č. 13 body 5 a 6 znějí:
1. „5. Stanovení botanické čistoty, nečistot a škodlivých nečistot u krmných surovin.
  Princip
  Mechanicky nebo ručně se z poměrné části konečného vzorku oddělí botanické nečistoty (přirozené neškodné nečistoty a škodlivé nečistoty a škodlivá olejnatá semena, tj. semena a plody plevelů uvedené v příloze č. 3 vyhlášky č. 451/2000 Sb., kterou se provádí zákon č. 91/1996 Sb., o krmivech, ve znění zákona č. 244/2000 Sb., ve znění pozdějších předpisů) a cizí předměty a vyjadřují se jako procentní podíl.
1. 6. Podmínky pro mikroskopické stanovení, identifikaci nebo určování složek živočišného původu v krmivech.
  Účel, rozsah a princip
  Tato metoda je určena pro stanovení složek živočišného původu (definovaných jako produkty zpracování těl nebo částí těl savců, ptáků a ryb) v krmivech, prováděné pomocí mikroskopického zkoušení v rámci systému koordinovaného inspekčního programu v oblasti výživy zvířat v souladu s § 16 zákona č. 91/1996 Sb., o krmivech, ve znění pozdějších předpisů.
  Stanovení prováděná podle této metody jsou používána k provádění odborného dozoru a zkoušení krmiv. Ke zlepšení určování určitých typů živočišných konstituentů nebo určení původu živočišné složky mohou být použity v další zkoušce upravené nebo alternativní metody. Při zkoušení určitých specifických živočišných konstituentů jako např. plasma nebo kosti v tuku (viz také bod 9) mohou být také použity další metody za předpokladu, že tyto zkoušky budou provedeny jako doplněk ke zkouškám uváděným v koordinačním inspekčním programu.
  Citlivost stanovení v krmivech může být v závislosti na původu složek živočišného původu velmi nízká – 0,01 %.
  K identifikaci se použije vhodně upravený reprezentativní vzorek, odebraný podle postupu uvedeného v § 1 až 6. Dále uvedená metoda je vhodná pro krmiva s nízkým obsahem vlhkosti. Krmiva s vyšším obsahem vlhkosti než 14 % musí být předem předsušena. Zejména některá krmiva a krmné suroviny (např. tuky a oleje) vyžadují uvedenou úpravu. Složky živočišného původu jsou identifikovány na základě typických, mikroskopicky identifikovatelných charakteristik (např. svalových vláken nebo jiných částí masa, chrupavek, kostí, rohů, chlupů, štětin, krve, peří, vaječných skořápek, rybích kostí, šupin).
  Identifikace musí být provedena jak v sítové frakci, tak v koncentrovaném sedimentu vzorku.“.

25. V příloze č. 16 se v bodu 2. slova „dimetridazol nebo“ zrušují.
26. V příloze č. 16 se v bodu 8. slova „a pro lasalocid pod bodem 2.16. a pro dimetridazol pod bodem 3.1.“ nahrazují slovy „pro lasalocid pod bodem 2.16.“.
27. V příloze č. 16 se v bodu 8. slova „Pro doplňkové látky dimetridazol a lasalocid, které jsou ustanoveny“ nahrazují slovy „Pro doplňkovou látku lasalocid, která je ustanovena“.

28. V příloze č. 16 tabulka zní:

Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Mez stanovitelnosti Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Účel, rozsah a princip Opakovatelnost Reprodukovatelnost Princip Účel, rozsah a princip
„Doplňková látka	Obsah mg/kg	Opakovatelnost
Lasalocid	od 0,5 do 15	10 % relat.
	od 50 do 150	5 % relat.“.

29. V příloze č. 16 se v bodu 11. slovo „F_0,05“ nahrazuje slovem „F_0,1“.
30. Příloha č. 17 zní:
„Příloha č. 17 k vyhlášce č. 124/2001 Sb.
Způsob hodnocení krmiv a premixů při křížové kontaminaci doplňkovými látkami
1. 1. Při ověřování křížové kontaminace premixů doplňkovými látkami se údaje zjištěných hodnot považují za ještě vyhovující, pokud nepřekračují toleranci desetinásobku hodnoty meze stanovitelnosti uvedené v příloze č. 9 a 10.
2. 2. Při ověřování křížové kontaminace krmiv doplňkovými látkami se údaje zjištěných hodnot považují za ještě vyhovující, pokud nepřekračují toleranci ve výši meze stanovitelnosti uvedené v příloze č. 9 a 10.“.

31. Příloha č. 18 zní:
„Příloha č. 18 k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Následující stránka