Obsah halofuginonu se stanoví jako volná base po extrakci horkou vodou do ethylacetátu a následně se rozdělí jako hydrochlorid do vodného kyselého roztoku. Extrakt se přečistí na ionexové chromatografické koloně. Obsah halofuginonu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV-detekcí.

Opakovatelnost

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu halofuginonu do 3 mg/kg hodnotu 0,5 mg/kg.

Reprodukovatelnost

Je uvedena u metody.

Mez stanovitelnosti

Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.

  1. 2.11. Stanovení obsahu ethopabátu

    Účel, rozsah a princip

    Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu ethopabátu v krmivech a premixech.

    Obsah ethopabátu se stanoví po extrakci vzorku methanolem a přečištění chromatografií na pevné fázi vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s fluorescenční detekcí.

    Opakovatelnost

    1. Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu ethopabátu:
    do 1 mg/kg40 % relat.
    od 1 do 4 mg/kg0,4 mg/kg
    od 4 do 20 mg/kg10 % relat.
    od 20 do 1000 mg/kgnestanovena
    nad 1 000 mg/kg5 % relat.

    Reprodukovatelnost

    1. Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu ethopabátu:
    do 1 mg/kgnestanovena
    od 1 do 20 mg/kg20 % relat.
    od 20 do 1000 mg/kgnestanovena
    nad 1 000 mg/kg15 % relat.

    Mez stanovitelnosti

    Mez stanovitelnosti je 0,03 mg/kg.

  1. 2.12. Stanovení obsahu semduramicinu

    Účel, rozsah a princip

    Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech a premixech.

    Obsah semduramicinu se stanoví po extrakci vzorku extrakční směsí, následném přečištění na pevné fázi a postkolonové derivatizaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s použitím UV detekce při vlnové délce 598 nm.

    Opakovatelnost

    Nestanovena.

    Reprodukovatelnost

    Nestanovena.

    Mez stanovitelnosti

    Nestanovena.

  1. 2.13. Stanovení obsahu diclazurilu

    Účel, rozsah a princip

    Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu diclazurilu v krmivech a premixech. Mez detekce je 0,1 mg/kg.

    Vzorek se po přidání interního standardu extrahuje okyseleným methanolem. U krmiv se alikvotní část extraktu přečistí na SPE patroně C18. Diclazuril se z patronky eluuje směsí okyseleného methanolu a vody. Po odpaření se zbytek rozpustí ve směsi dimethylformamidu a vody. U premixů se extrakt odpaří a zbytek se rozpustí ve směsi dimethylformamidu a vody. Obsah diclazurilu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s ternárním gradientem a UV-detekcí.

    Opakovatelnost

    1. Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu diclazurilu:
    do 2,5 mg/kg30 % relat. z vyššího výsledku
    od 2,5 do 5 mg/kg0,75 mg/kg
    nad 5 mg/kg15 % relat. z vyššího výsledku

    Reprodukovatelnost

    Je uvedena u metody.

    Mez stanovitelnosti

    Mez stanovitelnosti je 0,5 mg/kg.

  1. 2.14 Stanovení obsahu carbadoxu

    Účel, rozsah a princip

    Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu carbadoxu v krmivech, premixech a doplňkových látkách. Mez detekce je 1 mg/kg.

    Vzorek se zvlhčí vodou a extrahuje směsí methanol - acetonitril. Alikvotní podíl extraktu krmiva se po filtraci přečistí na koloně s oxidem hlinitým. Extrakt z premixů a doplňkových látek se přímo ředí na vhodnou koncentraci směsí voda - methanol - acetonitril. Obsah carbadoxu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi s UV detekcí.

    Opakovatelnost

    Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu carbadoxu 10 mg/kg a vyšším 15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku.

    Reprodukovatelnost

    Je uvedena u metody.

    Mez stanovitelnosti

    Mez stanovitelnosti je 10 mg/kg.

  1. 2.15. Stanovení obsahu olachindoxu

    Metoda stanovení obsahu olachindoxu je uveden v příloze 10, část 1.

  1. 2.16. Stanovení obsahu lasalocidu

    Účel, rozsah a princip

    Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu sodné soli lasalocidu v krmivech, premixech a doplňkových látkách. Mez detekce je 5 mg/kg.

    Lasalocid sodný se extrahuje ze vzorku okyseleným methanolem a stanoví se vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s fluorescenční detekcí.

    Opakovatelnost

    1. Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu lasalocidu:
    do 100 mg/kg15 % relat. z vyššího výsledku
    od 100 do 200 mg/kg15 mg/kg
    nad 200 mg/kg7,5 % relat. z vyššího výsledku

    Reprodukovatelnost

    Je uvedena u metody.

    Mez stanovitelnosti

    Mez stanovitelnosti je 30 mg/kg.

  1. 3. Chemoterapeutika
    1. 3.1. Stanovení obsahu dimetridazolu

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dimetridazolu v krmivech a premixech.

      Obsah dimetridazolu se stanoví po extrakci vzorku 90 % methanolem. Následně se přečistí na pevné fázi a stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 309 nm.

      Opakovatelnost

      1. Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
        od 3 do 30 mg/kg15 % relat.
        od 30 do 100 mg/kg5 mg/kg
        nad 100 mg/kg5 % relat.

      Reprodukovatelnost

      1. Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
        od 3 do 25 mg/kg20 % relat.
        od 25 do 50 mg/kg5 mg/kg
        nad 50 mg/kg10 % relat.

      Mez stanovitelnosti

      Mez stanovitelnosti je 3 mg/kg.

  1. 4. Vitaminy
    1. 4.1. Stanovení obsahu cholinu

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu cholinu v krmivech a premixech.

      Obsah cholinu se stanoví po hydrolýze vzorku hydroxidem barnatým a přečištění hydrolyzátu na ionexu na základě vzniku komplexu s reineckátem amonným v prostředí roztoku fosforečnanu sodného spektrofotometricky po rozpuštění komplexu v acetonu při vlnové délce 525 nm. Alternativně je možno provádět stanovení cholinu metodou ITP.

      Opakovatelnost

      Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit 10 % relat.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Mez stanovitelnosti je 20 mg/kg.

    1. 4.2. Stanovení obsahu pantothenanu vápenatého

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu pantothenanu vápenatého v premixech.

      Obsah pantothenanu vápenatého se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Saccharomyces carlsbergensis CCM 4288 (ATCC 9080) difúzním plotnovým Metodaem.

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

    1. 4.3. Stanovení vitaminů B1, B2, B6

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminů B1, B2, B6 v krmných směsích.

      Vitaminy B1 (thiamin), B2 (riboflavin) a B6 (pyridoxin) se extrahují ze vzorku krmiva vodou a po hydrolýze kyselinou chloristou se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) s využitím iontových párů na reverzní fázi. Detekce vitaminu B2, a B6 se provádí přímo fluorescenční detekcí, zatímco vitamin B1 se před detekcí nejprve oxiduje derivatizačním činidlem v reakční smyčce postkolonové derivatizace.

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

    1. 4.4. Stanovení obsahu vitaminu B2

      Účel, rozsah a princip

      Používají se dvě metody stanovení obsahu vitaminu B2 v premixech - metoda fluorometrická a metoda difúzně plotnová.

      Obsah vitaminu B2 se stanoví fluorometricky v mírně okyseleném prostředí na základě fluorescence při vlnové délce 440 nm nebo difúzně plotnovou metodou na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Lactobacillus rhamnosus CCM 1825 (ATCC 7469).

      Opakovatelnost

      Pro metodu fluorometrickou nestanovena.

      Pro metodu difuzní plotnovou:

      Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu vitaminu B2 500 000 mg/kg překročit hodnotu 40 500 mg/kg.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

    1. 4.5. Stanovení obsahu vitaminu B6

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu B6 v premixech.

      Vitamin B6 ve všech jeho formách se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu kvasinky Saccharomyces carlsbergensis CCM 4228 (ATCC 9080) difúzním plotnovým způsobem.

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

    1. 4.6. Stanovení obsahu vitaminu A

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A v krmivech a premixech. Vitamin A zahrnuje all-trans retinol a jeho cis izomery, které se touto metodou stanoví. Obsah vitaminu A se vyjadřuje v mezinárodních jednotkách (IU) na kg. Mezinárodní jednotka odpovídá aktivitě 0,3 μg all-trans vitaminu A (alkohol) nebo 0,344 μg all-trans vitamin A (acetát) nebo 0,550 μg all-trans vitaminu A (palmitát).

      Vzorek se hydrolyzuje ethanolickým roztokem hydroxidu draselného a vitamin A se extrahuje petroletherem. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v methanolu a pokud je to nutné, naředí se na vhodnou koncentraci. Obsah vitaminu A se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s UV nebo fluorescenční detekcí. Chromatografické parametry jsou vybrány tak, aby nedocházelo k separaci all-trans vitaminu A (alkohol) a jeho cis izomerů.

      Opakovatelnost

      Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku.

      Reprodukovatelnost

      Je uvedena u metody.

      Mez stanovitelnosti

      Mez stanovitelnosti je 2000 m.j./kg

    1. 4.7. Stanovení obsahu vitaminu E

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu E v krmivech a premixech. Obsah vitaminu E se vyjadřuje jako mg DL-α-tokoferol acetátu na kg. 1 mg DL-α-tokoferol acetátu odpovídá 0,91 mg DL-α-tokoferolu (vitamin E).

      Vzorek se hydrolyzuje ethanolickým roztokem hydroxidu draselného a vitamin E se extrahuje petroletherem. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v methanolu a pokud je to nutné, naředí se na vhodnou koncentraci. Obsah vitaminu E se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s UV nebo fluorescenční detekcí.

      Opakovatelnost

      Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 15 % relat. z vyššího výsledku.

      Reprodukovatelnost

      Je uvedena u metody.

      Mez stanovitelnosti

      Mez stanovitelnosti je 2 mg/kg.

    1. 4.8. Stanovení obsahu vitaminu D

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu D v krmivech.

      Vitamin D se stanoví po alkalické hydrolýze vzorku hydroxidem draselným za studena, následné extrakci do hexanu, přečištění na semipreparativní koloně Silica metodou HPLC. Frakce vitaminu D se zachytí, odpaří se k suchu a odparek se rozpustí v methanolu. V extraktu se stanoví obsah vitaminu D vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na analytické koloně s reverzní fází C18 s UV detekcí při 265 nm.

      Opakovatelnost

      Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 20 % relat.

      Reprodukovatelnost

      Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit 30 % relat.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

  1. 5. Mikroprvky
    1. 5.1. Stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku

      Metoda stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku je uveden v příloze č. 9, část 8.

    1. 5.2. Stanovení obsahu kobaltu

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu kobaltu v krmivech.

      Obsah kobaltu se stanoví po mineralizaci vzorku v chloridovém výluhu metodou atomové absorpční spektrometrie (AAS).

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

    1. 5.3. Stanovení obsahu selenu.

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení selenu v krmivech.

      Ve vzorku se po rozkladu kyselinou dusičnou v uzavřeném systému stanoví obsah selenu metodou atomové absorpční spektrometrie (AAS).

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

  1. 6. Výpočty
    1. 6.1. Vyhodnocování a výpočet výsledků stanovení obsahu doplňkových látek pro difúzně plotnové metody

      Účel, rozsah a princip

      Metoda uvádí a specifikuje uzančně závazný způsob pro vyhodnocování a výpočet výsledků při stanovení obsahu doplňkových látek v krmivech a premixech pro difúzně plotnové metody.

      Průměry inhibičních resp. stimulačních zón, vzniklých při stanovení doplňkových látek difusně plotnovou metodou, se měří s přesností nejméně na 0,1 mm. Ze souboru takto získaných hodnot se vypočítá aritmetický průměr pro každou koncentraci zkoušeného vzorku i standardu.

  1. 7. Barviva
    1. 7.1. Stanovení β-karotenu spektrofotometrickou metodou

      Účel, rozsah a princip

      β-karoten je přírodní barvivo chemicky patřící do skupiny tetraterpenoidů a je provitaminem vitaminu A.

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu β-karotenu v krmivech.

      Stanoví se po enzymatické hydrolýze směsí enzymů pepsin - trypsin (1:1) v alkalickém prostředí, rozpuštěním v acetonu a následnou extrakcí do hexanu, spektrofotometricky při vlnové délce 451 nm.

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

      Mez stanovitelnosti

      Nestanovena.

  1. 8. Mikrobiotika
    1. 8.1. Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Enterococcus

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků rodu Streptococcus skupiny D (Enterococcus) v krmivech a premixech.

      Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Enterococcus se provádí na selektivních půdách podle Slanetze a Bartleye. Jako referenční půda se při stanovení používá další selektivní půda (např. KF agar) nebo u premixů vhodná neselektivní půda. Naočkované půdy jsou kultivovány při 37 °C ± 1 °C. Růst a počty kolonií se vyhodnocují po dvou a čtyřdenní kultivaci.

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

    1. 8.2. Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Bacillus

      Účel, rozsah a princip

      Metoda specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků rodu Bacillus v krmivech.

      Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Bacillus se provádí anaerobní kultivací na krevním agaru při 37 °C. Počty kolonií, charakteristické pro dané mikroorganismy, se vyhodnocují po 18 - 24 hodinách.

      Opakovatelnost

      Nestanovena.

      Reprodukovatelnost

      Nestanovena.

Příloha č. 11

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Laboratorní zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů

Seznam postupů fyzikálního zkoušení krmiv

Příloha č. 11 Laboratorní zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů Seznam postupů fyzikálního zkoušení krmiv
1. Stanovení odrolu lisovaných krmiv
2. Stanovení zrnitosti
3. Stanovení ferromagnetických příměsí
  1. 1. Stanovení odrolu lisovaných krmiv

    Účel, rozsah a princip

    Postup specifikuje podmínky pro stanovení odrolu u granulovaných krmiv. Postup je použitelný pro všechny druhy krmiv a premixů. Odrol se stanoví vážkově jako sypký podíl po oddělení granulí na předepsaném sítu.

  1. 2. Stanovení zrnitosti

    Účel, rozsah a princip

    Postup specifikuje podmínky pro stanovení zrnitosti sypkých krmiv. Postup je použitelný pro všechny druhy krmiv a premixů. Zrnitost se stanoví vážkově jako hmotnostní podíly částic různých velikostí prosévací zkouškou konečného vzorku na předepsaných sítech.

  1. 3. Stanovení ferromagnetických příměsí

    Účel, rozsah a princip

    Postup specifikuje podmínky pro stanovení ferromagnetických příměsí. Postup je použitelný pro všechny druhy krmiv a premixů. Ferromagnetické příměsi se stanoví vážkově na základě svých magnetických vlastností po separaci ze vzorku krmiva magnetem.

Příloha č. 12

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Laboratorní zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů

Seznam postupů smyslového zkoušení krmiv

Příloha č. 12 Laboratorní zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů Seznam postupů smyslového zkoušení krmiv
1. Posuzování barvy, struktury a konzistence
2. Posuzování pachu
  1. 1. Posuzování barvy, struktury a konzistence

    Princip

    Posuzují se a stanoví odchylky od barvy typické pro dané krmivo, u struktury a konzistence kvalita opracování krmných surovin, případné porušení původního stavu krmiva, u lisovaných krmiv velikost granulí.

  1. 2. Posuzování pachu

    Princip

    Posuzuje se druh a intenzita pachu v původním stavu a po zahřátí a odchylky od pachu, který je pro dané krmivo typický.

Příloha č. 13

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Laboratorní zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů

Seznam postupů speciálního zkoušení krmiv

Příloha č. 13 Laboratorní zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů Seznam postupů speciálního zkoušení krmiv
1. Mikroskopie krmiv
2. Stanovení škůdců v obilovinách, luštěninách a olejninách
3. Stanovení škůdců v krmných směsích
4. Stanovení snětivosti pšenice
5. Stanovení druhové čistoty, nečistot a škodlivých nečistot u obilovin, luštěnin a olejnin
6. Mikroskopická identifikace a určování složek živočišného původu
  1. 1. Mikroskopie krmiv

    Slouží k identifikaci jednotlivých druhů krmiv a k určení přítomnosti semen a plodů, uvedených jako nežádoucí látky ve vyhlášce Ministerstva zemědělství č.194/1996 Sb., ve znění pozdějších předpisů, kterou se provádí zákon o krmivech. Buněčné struktury se posuzují mikroskopicky porovnáním s preparáty připravenými z jednotlivých druhů krmiv, zbavených všech cizích příměsí.

  1. 2. Stanovení škůdců v obilovinách, luštěninách a olejninách

    Princip

    Živí škůdci se zjišťují po prosátí vzorku v propadu, popř. v podílu na sítě buď pouhým okem, popř. pomocí lupy nebo stereoskopickým mikroskopem. Seznam škůdců je uveden v příloze č.2 vyhlášky Ministerstva zemědělství č. 194/1996 Sb., ve znění pozdějších předpisů, kterou se provádí zákon o krmivech.

  1. 3. Stanovení škůdců v krmných směsích

    Princip

    Živí škůdci se zjišťují po prosátí vzorku v propadu, popř. v podílu na sítě buď pouhým okem, popř. pomocí lupy nebo stereoskopickým mikroskopem. Seznam škůdců je uveden v příloze č. 2 vyhlášky Ministerstva zemědělství č. 194/1996 Sb., ve znění pozdějších předpisů, kterou se provádí zákon o krmivech.

  1. 4. Stanovení snětivosti pšenice

    Princip

    Za snětivou se považuje pšenice, která obsahuje zrna napadená snětí, snětivé kuličky, případně vykazuje pach po sněti. Konečný vzorek se vysype na světlou podložku a smyslově se posuzuje zamazání zrn sporami sněti, výskyt snětivých kuliček a pachu po sněti. Jestliže vzorek vykazuje kterýkoliv z uvedených znaků, označí se pšenice za snětivou.

  1. 5. Stanovení botanické čistoty, nečistot a škodlivých nečistot u krmných surovin.

    Princip

    Mechanicky nebo ručně se z poměrné části konečného vzorku oddělí botanické nečistoty (přirozené neškodné nečistoty a škodlivé nečistoty a škodlivá olejnatá semena, tj. semena a plody plevelů uvedené v příloze č. 3 vyhlášky č. 451/2000 Sb., kterou se provádí zákon č. 91/1996 Sb., o krmivech, ve znění zákona č. 244/2000 Sb., ve znění pozdějších předpisů) a cizí předměty a vyjadřují se jako procentní podíl.

  1. 6. Podmínky pro mikroskopické stanovení, identifikaci nebo určování složek živočišného původu v krmivech.

    Účel, rozsah a princip

    Tato metoda je určena pro stanovení složek živočišného původu (definovaných jako produkty zpracování těl nebo částí těl savců, ptáků a ryb) v krmivech, prováděné pomocí mikroskopického zkoušení v rámci systému koordinovaného inspekčního programu v oblasti výživy zvířat v souladu s § 16 zákona č. 91/1996 Sb., o krmivech, ve znění pozdějších předpisů.

    Stanovení prováděná podle této metody jsou používána k provádění odborného dozoru a zkoušení krmiv. Ke zlepšení určování určitých typů živočišných konstituentů nebo určení původu živočišné složky mohou být použity v další zkoušce upravené nebo alternativní metody. Při zkoušení určitých specifických živočišných konstituentů jako např. plasma nebo kosti v tuku (viz také bod 9) mohou být také použity další metody za předpokladu, že tyto zkoušky budou provedeny jako doplněk ke zkouškám uváděným v koordinačním inspekčním programu.

    Citlivost stanovení v krmivech může být v závislosti na původu složek živočišného původu velmi nízká – 0,01 %.

    K identifikaci se použije vhodně upravený reprezentativní vzorek, odebraný podle postupu uvedeného v § 1 až 6. Dále uvedená metoda je vhodná pro krmiva s nízkým obsahem vlhkosti. Krmiva s vyšším obsahem vlhkosti než 14 % musí být předem předsušena. Zejména některá krmiva a krmné suroviny (např. tuky a oleje) vyžadují uvedenou úpravu. Složky živočišného původu jsou identifikovány na základě typických, mikroskopicky identifikovatelných charakteristik (např. svalových vláken nebo jiných částí masa, chrupavek, kostí, rohů, chlupů, štětin, krve, peří, vaječných skořápek, rybích kostí, šupin).

    Identifikace musí být provedena jak v sítové frakci, tak v koncentrovaném sedimentu vzorku.

Příloha č. 14

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Zkoušení homogenity

  1. 1. Homogenita premixů a krmiv s použitím premixů

    Zkoušení homogenity se uskutečňuje pomocí doplňkové látky nebo přidané aminokyseliny, dávkované do premixu nebo do krmiv s použitím premixu. Tato doplňková látka nebo aminokyselina musí být stanovitelná metodami zkoušení, které jsou uvedené v přílohách č. 7 až 10. Homogenita se zkouší v rámci jedné partie.

  1. 2. Zkoušení homogenity partie

    Pro test homogenity partie se vybere nj, obalů nebo u volně ložených krmiv nj hypotetických částí partie a z každé z nich se odebere jediný dílčí vzorek, který se samostatně upraví a tím se získá nj, zkušebních vzorků. Z výsledků zkoušek x1, x2, x3....xnj se stanoví analýza s2.

  1. 3. Stanovení celkového rozptylu
    1. Pro stanovení celkového rozptylu použijeme výraz:
      1. kde:
        1. k je celkový počet odebraných dílčích vzorků (počet úrovní)
        2. je průměr uvnitř úrovně
        3. je průměr ze všech analytických stanovení (celkový průměr), uvedených ve sloupci 3 protokolu o zkouškách
  1. 4. Stanovení rozptylu metody
    1. Pro stanovení rozptylu zkušební metody použijeme výraz:
      1. kde:
        1. n je počet paralelních opakování pro ověření metody (ověřovací série)
        2. xi je i-té stanovení na vzorku, který je použit k ověření metody (ověřovací série),
        3. je průměr stanovení u vzorku, který je použit k ověření metody (ověřovací série), uvedených ve sloupci 7 protokolu o zkouškách
  1. 5. Partie krmiva nebo premixu se považuje za homogenní pouze tehdy, když platí:
  1. 6. Počet vzorkovaných obalů nebo hypotetických částí je následující:
    Příloha č. 14 Zkoušení homogenity
    Počet obalů v partiiVzorkovaná hmotnost volně
    ložené partie - t
    Počet vzorkovaných obalů -
    částí (díl. vzorků)
    do 25do 1,505
    26 – 50od 1,51 – 2506
    51 – 100od 2,51 – 5,007
    101 – 200od 5,01 – 10,009
    201 – 300od 10,01 – 15,0011
    301 – 500od 15,01 – 25,0013
    501 – 800od 25,01 – 40,0016
    801 – 1 300od 40,01 – 65,0020

Příloha č. 15

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Obecné podmínky pro použití zkušební metody

  1. 1. Pracovní postup
    1. Pracovní postup obsahuje dostatečně přesné a podrobné instrukce k provádění zkušební metody:
      1. 1.1. princip postupu, chemické reakce a případné interakce stanovovaného znaku, popis matrice a rozmezí stanovovaného znaku
      2. 1.2. použité chemikálie včetně chemické čistoty, příprava roztoků s uvedením koncentrace a stability
      3. 1.3 podrobný postup zkoušky, údaje o kalibraci, měření, výpočet
  1. 2. Shodnost metody

    Shodnost metody označuje těsnost shody mezi nezávislými výsledky zkoušek získanými za předem specifikovaných podmínek. Míra shodnosti se počítá jako směrodatná odchylka výsledků zkoušek sx.

    Odhad hodnoty sx se počítá pomocí rozpětí R, které je definováno jako rozdíl mezi nejmenší a největší hodnotou paralelního stanovení.

    1. Provádí-li se dvě paralelní stanovení na m vzorcích, je směrodatná odchylka vyjádřena
      1. kde Rj = | xj1 - x j2 | je rozpětí, tj. rozdíl dvo u paralelních stanovení, provedených na j-tém vzorku. Z vypočtené směrodatné odchylky sx se vypočte ukazatel opakovatelnosti (r) analytické metody v dané analytické laboratoři. Pro opakovatelnost /r/ platí (při dvou paralelních opakování a hladinu významnosti P (0,95)): r = 2,8.sx. Směrodatná odchylka sx resp. opakovatelnost se určuje z dostatečně velkého počtu vzorků téhož druhu materiálu (p ≥ 20). Směrodatná odchylka sx se neurčuje z jedné ověřovací série, ale z dlouhodobého měření v dané laboratoři na vzorcích téhož druhu materiálu.
  1. 3. Správnost metody

    Správnost metody určuje těsnost shody mezi průměrnou hodnotou získanou z velké řady výsledků zkoušek a přijatou referenční hodnotou. Referenční hodnota se odvodí jako

    1. a) teoretická nebo stanovená hodnota založená na vědeckých podkladech
    2. b) přiřazená nebo certifikovaná hodnota založená na experimentálních pracích národních nebo mezinárodních organizací
    3. c) odsouhlasená nebo certifikovaná hodnota založená na spolupráci pod patronací vědeckých nebo technických skupin
    4. d) jestliže není k dispozici očekávaná hodnota veličiny uvedená v bodech a) až c), uvede se střední hodnota specifikovaného souboru měření (medián, průměr).
  1. 4. Linearita metody

    Linearitou metody se označuje přímková závislost mezi odezvou detekce a koncentrací analytu. Linearita se ověřuje metodami matematické statistiky. V případě zkušebních metod nevykazujících lineární závislost mezi odezvou detekce a koncentrací analytu, postupuje se metodami matematické statistiky, které nejsou založeny na předpokladu většinou normálního rozdělení a nepoužívají odhadu žádných parametrů.

  1. 5. Citlivost metody

    Citlivost metody určuje nejmenší rozdíl koncentrace stanovovaného znaku, jež odpovídá nejmenšímu zjistitelnému rozdílu, jenž může být zjištěn vhodnou odezvou signálu metody.

  1. 6. Mez stanovitelnosti metody

    Mezí stanovitelnosti metody se rozumí nejnižší koncentrace stanovovaného znaku, kdy je dosažena statisticky přijatelná správnost a přesnost. Většinou se jako mez stanovitelnosti bere první bod kalibrační křivky.

  1. 7. Selektivita metody

    Selektivita metody udává přehled o použitelnosti zkušební metody vzhledem ke koncentraci rušivých prvků. Zpravidla se udává, jaká koncentrace určitého znaku v matrici vzorku nemá statisticky významný vliv na správnost výsledků.

  1. 8. Výpočet opakovatelnosti a reprodukovatelnosti

    Opakovatelnost vyjadřuje shodnost za podmínek opakovatelnosti a reprodukovatelnost shodnost za podmínek reprodukovatelnosti. Pro mez opakovatelnosti (r) a reprodukovatelnosti (R) platí

    1. r = 2,8 × sr resp. r = 2,8.sx (viz čl. 2 přílohy 15); R = 2,8 × s R, kde odhad rozptylu reprodukovatelnosti s R2 je dán součtem odhadu rozptylu opakovatelnosti sr2 a mezilaboratorního rozptylu s L2 a platí:
    2. s R2 = s r2 + s L2
    1. Hodnoty s r2 a s L2 se určí podle následujících rovnic:
      1. kde
        1. kde ni je počet výsledků a yi, je jeden takovýto výsledek, p je počet laboratoří, které poskytly alespoň jeden výsledek.
    1. Ve speciálním případě, kdy pro všechna ni platí ni=n=2, se použije rozpětí wi=2si, čímž se získají vztahy:

Příloha č. 16

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Způsob posouzení pracovní přesnosti míchacího zařízení

  1. 1. Zkoušení pracovní přesnosti se uskutečňuje u všech míchacích zařízení, která slouží pro finální výrobu premixů a krmiv s použitím premixů.
  2. 2. Ke zkoušení se používá výhradně jako indikační doplňková látka lasalocid, u které je před zkouškou ověřen obsah účinné látky a látka je upravena tak, aby veškeré částice propadaly drátěným sítem o velikosti strany oka 0,5 mm. Pro zkoušku pracovní přesnosti 1 : 10 000 se odvažuje 100 g jako 100 % látky na 1 tunu míchaného substrátu, k ověření pracovní přesnosti 1 : 100 000 se odvažuje 10 g jako 100 % látky. Před použitím látky je přípustné její předmíchání do 1 kg použitého nosiče.
  3. 3. Ke zkoušce se používá jako nosič pro míchací zařízení sloužící k výrobě premixů s minerálním nosičem nebo pro výrobu doplňkových minerálních krmiv, krmný vápenec jemně nebo velmi jemně mletý. V ostatních případech se používá ke zkoušce jako nosič pšeničná mouka krmná. Velikost částic míchaného substrátu má být menší jak než 1 mm.
  4. 4. Míchací zařízení, u kterého se uskutečňuje zkouška, nesmí propouštět míchaný substrát, míchací element musí být úplný, nepoškozený, zbavený zbytků a zcela vyprázdněný. Pokud se jedná o typové míchací zařízení, porovná se technické provedení míchacího zařízení s technickými podmínkami jeho výrobce a o porovnání se vyhotovuje protokol o shodě.
  5. 5. Protokol o shodě obsahuje tyto náležitosti:
    1. a) o jaké zařízení se jedná a kdo je jeho výrobcem,
    2. b) typ míchacího zařízení,
    3. c) výrobní číslo (pokud je uvedeno),
    4. d) rok výroby,
    5. e) provozovatel (pokud se nejedná o zkoušky u výrobce zařízení),
    6. f) posouzení shody výrobku s technickými podmínkami:
      1. - technické parametry (pohon, pracovní část - míchací element, vyprazdňovací zařízení)
      2. - funkční parametry (opotřebení mechanických částí, změny tvaru dílů, těsnost stroje po naplnění),
      3. - souhrnné vyjádření a případná doporučení,
      4. - kdo provedl posouzení shody (popis, případně razítko),
      5. - za provozovatele (výrobce) podpis, případně razítko,
      6. - datum vyhotovení protokolu.
  1. 6. Vlastní postup zkoušky

    Míchací zařízení se naplní míchaným nosičem (pšeničnou moukou krmnou, krmným vápencem), který se odváží s přesností ± 1 % z celkové jeho navážky. Odvažuje se takové množství, aby zaplnilo nejméně dvě třetiny objemu míchacího prostoru, který je udán výrobcem. Po kontrole těsnosti míchacího zařízení, která se uskutečňuje za jeho chodu, se za klidu míchacího elementu vpraví na povrch nosiče odvážené množství (s přesností 0,01 g) indikační doplňkové látky a míchací zařízení se uvede do chodu na dobu stanovenou výrobcem v technických podmínkách (pokud není stanovena na dobu udanou provozovatelem). Po ukončení stanovené doby se přikročí k odběru vzorků.

  1. 7. Odběr vzorků se uskutečňuje podle technického provedení míchacího zařízení buď za jeho klidu přímo z míchacího prostoru, nebo při jeho vyprazdňování za chodu míchacího zařízení. Odběr dílčích vzorků se uskutečňuje pomocí dvouplášťového vertikálního vzorkovače nebo pomocí vzorkovací krabice pro odběr vzorků z celého průřezu toku materiálu. Pokud nelze použít k odběru vzorků při vyprazdňování žádnou z uvedených vzorkovacích pomůcek, lze výjimečně použít vhodnou vzorkovací lopatku. Za dílčí vzorek se považuje jeden vpich vzorkovače nebo jeden náběr vzorkovací krabicí. Takto odebrané dílčí vzorky se neupravují a přímo vkládají do obalů.
  2. 8. Úprava a zkoušení vzorků

    Úpravu vzorků pro zkoušení stanovuje příloha č. 7, bod 1.7. Pro zkoušení se používají výhradně postupy uvedené v příloze č. 10, pro lasalocid pod bodem 2.16.

    1. Pro doplňkovou látku lasalocid, která je ustanovena k ověření přesnosti míchacích zařízení, platí následující hodnoty opakovatelnosti:
      Příloha č. 16 Způsob posouzení pracovní přesnosti míchacího zařízení
      Doplňková látkaObsah mg/kgOpakovatelnost
      Lasalocidod 0,5 do 1510 % relat.
      od 50 do 1505 % relat.

    Z každého upraveného dílčího vzorku vždy po samostatné úpravě mícháním se oddělí dva zkušební vzorky pro 2 paralelní stanovení indikační doplňkové látky a u jednoho náhodně vybraného dílčího vzorku se oddělí čtyři zkušební vzorky pro 4 paralelní stanovení. Provedené paralelní stanovení u každého dílčího vzorku se nesmí od sebe odchylovat o více než je stanovená opakovatelnost pro danou metodu zkoušení. Z dvou paralelních stanovení u každého dílčího vzorku se vypočítá pro každý vzorek průměrná hodnota obsahu doplňkové látky, která slouží pro stanovení celkového rozptylu.

  1. 9. Stanovení celkového rozptylu

    Pro zpracování celkového rozptylu se použije jednotlivá paralelní stanovení u dílčích vzorků, z kterých se vypočte průměrná hodnota pro každý dílčí vzorek. Do výpočtu se dosadí průměrné hodnoty (x) dílčích vzorků.

    1. Pro stanovení celkového rozptylu (s2) platí:
      1. kde: k je celkový počet odebraných dílčích vzorků (počet úrovní)
      2. je průměr uvnitř úrovně
      3. je průměr ze všech analytických stanovení (celkový průměr)
  1. 10. Stanovení rozptylu zkušební metody
    1. Pro stanovení rozptylu zkušební metody platí:
      1. kde: n je počet paralelních opakování pro ověření metody (ověřovací sérii)
      2. xi je i-té stanovení na vzorku, který je použit k ověření metody (ověřovací sérii),
      3. je průměr stanovení u vzorku, který je použit k ověření metody (ověřovací sérii),
  1. 11. Pracovní přesnost míchacího zařízení se považuje za vyhovující, pokud zkoušený substrát vykazuje homogenitu použité doplňkové látky a pro uvedené platí vztah: kdy
  1. 12. Ze zkoušení pracovní přesnosti míchacího zařízení se vystavuje protokol o zkouškách, který obsahuje:
    1. a) typ míchacího zařízení, o které se jedná a pro jakou pracovní přesnost bylo zkoušeno (§ 7 odst. 3 písmeno b) zákona č. 91/1996 Sb.),
    2. b) kdo je výrobcem míchacího zařízení,
    3. c) jaká indikační doplňková látka byla použita a v jakém obsahu na kg zkoušeného substrátu (teorie),
    4. d) vlastní výsledky jednotlivých zkoušek obsahující číslo vzorku, pod kterým byl zařazen do zkoušek, pořadové číslo paralelního stanovení, prokázaný obsah doplňkové látky v paralelním stanovení, průměrný obsah doplňkové látky v dílčím vzorku, celkový průměr ze všech paralelních stanovení použitých k výpočtu celkového rozptylu, celkový rozptyl, rozptyl metody, f-test vypočítaný, f-test tabelovaný pro úroveň 0,1,
    5. e) závěrečné hodnocení,
    6. f) datum vyhotovení protokolu,
    7. g) razítko a podpis osoby provádějící zkoušky

    Protokol o zkoušení pracovní přesnosti je přenosný na stejné typy míchacích zařízení za předpokladu, že míchací zařízení bylo posouzeno a vystaven protokol o shodě mezi typem míchacího zařízení, které již vyhovělo požadavkům pro pracovní přesnost a míchacím zařízením, které je posuzováno, zda je shodné.

  1. 13. Vzor protokolu o zkouškách.

    Protokol o zkouškách č.

    Obrázek

Příloha č. 17

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Způsob hodnocení krmiv a premixů při křížové kontaminaci doplňkovými látkami

  1. 1. Při ověřování křížové kontaminace premixů doplňkovými látkami se údaje zjištěných hodnot považují za ještě vyhovující, pokud nepřekračují toleranci desetinásobku hodnoty meze stanovitelnosti uvedené v příloze č. 9 a 10.
  2. 2. Při ověřování křížové kontaminace krmiv doplňkovými látkami se údaje zjištěných hodnot považují za ještě vyhovující, pokud nepřekračují toleranci ve výši meze stanovitelnosti uvedené v příloze č. 9 a 10.

Příloha č. 18

k vyhlášce č. 124/2001 Sb.

Metody odběru vzorků pro odborný dozor a zkoušení obsahu dioxinů (PCDD/PCDF) a určování dioxinům podobných PCB v některých krmivechČást 1:

  1. 1. Účel a oblast působnosti

    Vzorky určené k provádění odborného dozoru a zkoušení obsahu dioxinů (PCDD/PCDF), jakož i obsahu dioxinům podobných polychlorovaných bifenylů (Tabulka Světové zdravotnické organizace) v krmivech se odebírají v souladu s § 1 až 6 vyhlášky č. 124/2001 Sb. Takto získané souhrnné vzorky se považují za reprezentativní pro vzorkovanou partii a subpartii, z nichž byly odebrány. Dodržení maximálních povolených hodnot se posuzuje na základě obsahů stanovených v laboratorních vzorcích.

  1. 2. Shoda partie nebo subpartie s povolenými hodnotami

    Pokud je výsledek prvního stanovení o méně než 20 % vyšší nebo nižší než je povolená maximální hodnota, musí kontrolní laboratoř pro potvrzení výsledku provést v laboratorním vzorku opakované stanovení a vypočítat průměr z obou výsledků. Partie se uznává, jestliže je výsledek prvního stanovení o více než 20 % nižší než maximální povolená hodnota a nebo pokud bylo nutno provést opakované stanovení, jestliže průměr vypočtený z obou stanovení odpovídá maximální povolené hodnotě stanovené v příloze č. 3 vyhlášky č. 451/2000 Sb.

    Tabulka Světové zdravotnické organizace (WHO) pro hodnocení nebezpečnosti dioxinů a dioxinům podobných polychlorovaných bifenylů pro člověka vyjářených pomocí TEF (Toxic Equivalency Factors), vycházející ze závěrů kongresu WHO ve Stockholmu, Švédsko, 15. až 18. června 1997 (Van den Berg a jiní, (1998) Toxic Equivalency Factors (TEFs) for PCBs, PCDDs, PCDFs for Humans and for Wildlife. Environmental Health Perspectives, 106(12), 775.

    Příloha č. 18 Metody odběru vzorků pro odborný dozor a zkoušení obsahu dioxinů (PCDD/PCDF) a určování dioxinům podobných PCB v některých krmivech
    KongenerHodnota TEFKongenerHodnota TEF
    Dibenzo-p-dioxiny (PCDD)„Dioxinům podobné“ PCB:
    non-ortho PCB + mono-ortho PCB
    2,3,7,8-TCDD1Non-ortho PCB
    1,2,3,7,8-PeCDD1PCB 770,0001
    1,2,3,4,7,8-HxCDD0,1PCB 810,0001
    1,2,3,6,7,8-HxCDD0,1PCB 1260,1
    1,2,3,7,8,9-HxCDD0,1PCB 1690,01
    1,2,3,4,6,7,8-HpCDD0,01
    OCDD0,0001
    Dibenzofurany (PCDF)Mono-ortho PCB
    2,3,7,8-TCDF0,1PCB 1050,0001
    1,2,3,7,8-PeCDF0,05PCB 1140,0005
    2,3,4,7,8-PeCDF0,5PCB 1180,0001
    1,2,3,4,7,8-HxCDF0,1PCB 1230,0001
    1,2,3,6,7,8-HxCDF0,1PCB 1560,0005
    1,2,3,7,8,9-HxCDF0,1PCB 1570,0005
    2,3,4,6,7,8-HxCDF0,1PCB 1670,00001
    1,2,3,4,6,7,8-HpCDF0,01PCB 1890,0001
    1,2,3,4,7,8,9-HpCDF0,01
    OCDF0,0001
    Použité zkratky: T = tetra; Pe = penta; Hx = hexa; Hp = hepta; O = okta;
    CDD = chlorodibenzo-p-dioxin; CDF = chlorodibenzofuran; CB = chlorobifenyl.