Vyhláška Ministerstva zdravotnictví, kterou se mění vyhláška Ministerstva zdravotnictví č. 1/1998 Sb., kterou se stanoví požadavky na jakost, postup při přípravě, zkoušení, uchovávání a dávkování léčiv (Český lékopis 1997)

1. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 276 nm.

účinné od 1. 1. 2000Ustalování kolony. Před použitím nové kolony pro chromatografickou analýzu se ustaluje rovnováha opakovaným nástřikem roztoku insulinu obsahujícího vysokomolekulární bílkoviny. Nejméně třikrát se nastříkne roztok pro rozlišení. Kolona je ustálená, když výsledky dvou po sobě následujících nástřiků jsou opakovatelné.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 100 μl roztoku pro rozlišení. Při zaznamenání chromatogramu za předepsaných podmínek retenční časy jsou: polymerní komplex insulinu 13 min až 17 min, kovalentní dimer insulinu asi 17,5 min, monomerní insulin asi 20 min, soli asi 22 min. Zkoušku lze hodnotit, jestliže rozlišení, definované poměrem výšky píku dimeru k výšce minima mezi píky monomeru a dimeru, je nejméně 2,0.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 100 μl zkoušeného roztoku. Chromatogram se zaznamenává asi 35 min. Na získaném chromatogramu součet ploch píku s retenčním časem kratším než retenční čas hlavního píku není větší než 1,0 % celkové plochy píků. Nepřihlíží se k píku s retenčním časem delším než retenční čas píku insulinu.

účinné od 1. 1. 2000Příbuzné bílkoviny. Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29) způsobem popsaným ve zkoušce Stanovení obsahu, s elučními podmínkami popsanými v následující tabulce:

účinné od 1. 1. 2000Roztoky se udržují při 2 °C až 10 °C a použijí se do 24 h. Zkontroluje se způsobilost systému (rozlišení, linearita) způsobem popsaným ve zkoušce Stanovení obsahu. Pokud je třeba, upraví se relativní poměry mobilních fází tak, aby se zajistila úplná eluce prasečího A21 deamidoinsulinu před začátkem gradientu. Profil gradientu může být upraven tak, aby se zajistila eluce všech příbuzných nečistot insulinu.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku (a), 20 μl porovnávacího roztoku (b), 20 μl porovnávacího roztoku (c) a 20 μl zkoušeného roztoku. Je-li třeba, upraví se nastřikovaný objem na objem mezi 10 μl a 20 μl v souladu s výsledky získanými pro zkoušku linearity popsanou ve Stanovení obsahu. Chromatogramy se zaznamenávají asi 50 min. Na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) se objeví lidský A21 deamidoinsulin jako malý pík za hlavním píkem s relativním retenčním časem asi 1,3 vzhledem k hlavnímu píku. Na chromatogramu zkoušeného roztoku plocha píku lidského A21 deamidoinsulinu není větší než 2,0 % z celkové plochy píků; součet ploch všech píků, kromě lidského insulinu a lidského A21 deamidoinsulinu, není větší než 2,0 % z celkové plochy píků. Pouze pro semisyntetický lidský insulin: na chromatogramu zkoušeného roztoku plocha píku odpovídající hlavnímu píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) není větší než plocha odpovídajícího píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (c) (1,0 % prasečího insulinu v lidském insulinu).

účinné od 1. 1. 2000Imunoreaktivita proinsulinu (PLI). Nejvýše 10 μg/g; počítáno na vysušenou látku. Imunoreaktivita proinsulinu se zkouší vhodnou imunochemickou, dostatečně citlivou metodou (2.7.1), např. radioimunoanalýza. Pro lidský insulin vyráběný enzymatickou přeměnou prasečího insulinu se ke kalibraci metody použije mezinárodní referenční látka pro prasečí proinsulin. Pro lidský insulin vyráběný rDNA technologií se ke kalibraci metody použije mezinárodní referenční látka pro lidský proinsulin.

účinné od 1. 1. 2000Zinek. Nejvýše 1,0 %, počítáno na vysušenou látku; stanoví se atomovou absorpční spektrometrií (2.2.23, Metoda I).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 50,0 mg se rozpustí v kyselině chlorovodíkové 0,01 mol/l RS a zředí se jí na 25,0 ml. Je-li třeba, zředí se kyselinou chlorovodíkovou 0,01 mol/l RS na koncentraci např. 0,4 μg Zn/ml až 1,6 μg Zn/ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztoky. Připraví se roztoky obsahující 0,40 μg Zn/ml, 0,80 μg Zn/ml, 1,00 μg Zn/ml, 1,20 μg Zn/ml, 1,60 μg Zn/ml za použití čerstvě připraveného základního roztoku zinku (5 mg Zn/ml) zředěním kyselinou chlorovodíkovou 0,01 mol/l RS.

účinné od 1. 1. 2000Měří se absorbance při 213,9 nm za použití zinkové lampy s dutou katodou jako zdroje záření a plamene vzduch-acetylen vhodného složení (např. 1 1 vzduchu/min a 2 1 acetylenu/min).

účinné od 1. 1. 2000Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 10,0 %; 0,200 g se suší 24 h v sušárně při 100 °C až 105 °C.

účinné od 1. 1. 2000Síranový popel (2.4.14). Nejvýše 2,5%, počítáno na vysušenou látku; stanoví se s 0,200 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Bakteriální endotoxiny (2.6.14). Pokud je látka určena k výrobě parenterálních přípravků bez dalšího postupu odstraňujícího bakteriální endotoxiny, vyhovuje zkoušce na bakteriální endotoxiny, obsahujeli nejvýše 10 m.j. endotoxinu v miligramu.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 2000Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 40,0 mg se rozpustí v kyselině chlorovodíkové 0,01 mol/l RS a zředí se jí na 10,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). Obsah lahvičky lidského insulinu CRL se rozpustí v kyselině chlorovodíkové 0,01 mol/l RS a zředí se jí tak, aby výsledný roztok obsahoval 4,0 mg/ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). Obsah lahvičky prasečího insulinu CRL se rozpustí v kyselině chlorovodíkové 0,01 mol/l RS a zředí se jí tak, aby výsledný roztok obsahoval 4,0 mg/ml. Porovnávací roztok (c). 1,0 ml porovnávacího roztoku (b) se zředí kyselinou chlorovodíkovou 0,01 mol/l RS na 50,0 ml. K 1,0 ml tohoto roztoku se přidá 1,0 ml porovnávacího roztoku (a). Porovnávací roztok (d). 1,0 ml porovnávacího roztoku (a) se zředí kyselinou chlorovodíkovou 0,01 mol/l RS na 10,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Roztok pro rozlišení. 1,0 ml porovnávacího roztoku (a) se smíchá s 1,0 ml porovnávacího roztoku (b).

účinné od 1. 1. 2000Roztoky se udržují při teplotě 2 °C až 10 °C a použijí se do 48 h. Při použití automatického dávkovače se jeho teplota nastaví na 2 °C až 10 °C.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- ocelové nerezové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro chromatografii R (5 lim);
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze, kterou jsou následující roztoky připravené a uchovávané při teplotě nejméně 20 °C, průtoková rychlost je 1 ml/min;
   1. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze A - 28,4 g síranu sodného bezvodého R se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 1000 ml. Přidá se 2,7 ml kyseliny fosforečné R a, je-li třeba, upraví se pH na hodnotu 2,3 ethanolaminem R, zfiltruje se a roztok se odplyní;
   2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze B - 550 ml mobilní fáze A se smíchá s 450 ml acetonitrilu R. Roztok se zahřeje na teplotu nejméně 20 °C, aby se předešlo srážení (smíchání mobilní fáze A s acetonitrilem je endotermická reakce). Zfiltruje se a roztok se odplyní;

1. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 214 nm.

účinné od 1. 1. 2000Teplota kolony se udržuje na 40 °C.

účinné od 1. 1. 2000Kolona se promývá směsí objemových dílů mobilní fáze A a mobilní fáze B (42 + 58). V případě potřeby se upraví složení mobilní fáze.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 20 μl roztoku pro rozlišení a 20 μl porovnávacího roztoku (b). Zaznamená se chromatogram roztoku pro rozlišení až pík odpovídající hlavnímu píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) je zřetelně viditelný. Na chromatogramu roztoku pro rozlišení se určí totožnost píku prasečího insulinu a lidského insulinu. Zkoušku lze hodnotit, jestliže rozlišení mezi píky odpovídající lidskému insulinu a prasečímu insulinu je nejméně 1,2. Je-li třeba, upraví se koncentrace acetonitrilu v mobilní fázi tak, aby bylo dosaženo předepsaného rozlišení.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 20 μl zkoušeného roztoku, 20 μl porovnávacího roztoku (a) a 20 μl porovnávacího roztoku (d). Zkoušku lze hodnotit, jestliže plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) je (10 ± 0,5)násobekem plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (d). Pokud je tato zkouška neúspěšná, upraví se nastřikovaný objem na 10 μl až 20 μl, aby byl lineární rozsah detektoru.

účinné od 1. 1. 2000Vypočítá se obsah lidského insulinu C₂₅₇H₃₈₃N₆₅O₇₇S₆ a lidského A21 deamidoinsulinu z plochy hlavního píku a plochy píku lidského A21 deamidoinsulinu na chromatogramu zkoušeného roztoku a porovnávacího roztoku (a) a deklarovaného obsahu lidského insulinu a lidského A21 deamidoinsulinu v lidském insulinu CRL.

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000Ve vzduchotěsných obalech, chráněn před světlem, při –20 °C do uvolnění pro výrobu. Po rozpuštění se insulin uchovává při (5 ± 3) °C po krátkou dobu, než bude použit pro výrobu přípravku. Při vážení je třeba insulin chránit před vzdušnou vlhkostí, insulin musí míti pokojovou teplotu.

účinné od 1. 1. 2000Separandum.

účinné od 1. 1. 2000Označování

účinné od 1. 1. 2000V označení na obalu se uvede:

1. účinné od 1. 1. 2000- zda byla látka vyrobena enzymatickou přeměnou prasečího insulinu nebo rDNK technologií,
2. účinné od 1. 1. 2000- zda je látka prostá bakteriálních endotoxinů.

účinné od 1. 1. 2000† Iohexolum

účinné od 1. 1. 2000Johexol

účinné od 1. 1. 2000

účinné od 1. 1. 2000Je to 5-[N-(2,3-dihydroxypropyl)acetamido]-N,N'-bis(2,3-dihydroxypropyl)-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid. Počítáno na bezvodou látku, obsahuje 98,0% až 101,0% sloučeniny C₁₉H₂₆I₃N₃O₉.

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Bílý nebo šedobílý hygroskopický prášek. Je velmi snadno rozpustný ve vodě, snadno rozpustný v methanolu, prakticky nerozpustný v etheru a v dichlormethanu. Látka je směsí diastereoizomerů a atropizomerů.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

1. účinné od 1. 1. 2000A. Infračervené absorpční spektrum (2.2.24) tablety zkoušené látky se shoduje se spektrem tablety johexolu CRL. Tablety se připraví za použití bromidu draselného R.
2. účinné od 1. 1. 2000B. Hodnotí se chromatogramy ze zkoušky A Příbuzné látky, viz Zkoušky na čistotu. Retenční čas a velikost hlavních píků na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) jsou přibližně stejné jako retenční čas a velikost píků odpovídajících johexolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (a).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Roztok S. 5,0 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Vzhled roztoku. Roztok S je čirý (2.2.1) a není zbarven intenzivněji než porovnávací barevný roztok Ž₇ (2.2.2, Metoda II).

účinné od 1. 1. 2000Příbuzné látky.

1. účinné od 1. 1. 2000A. Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).
2. účinné od 1. 1. 2000Poznámka: Vzhledem k endo-exoizomerii jsou na chromatogramu dva nerozdělené píky johexolu. Kromě toho se na počátku prvního hlavního píku obvykle objevuje malý pík náležící rovněž johexolu. Retenční čas tohoto malého píku je asi o 1,2 min menší než retenční čas prvního hlavního píku.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 0,150 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 15,0 mg johexolu CRL a 15,0 mg johexolu nečistoty A CRL se rozpustí ve směsi jedné až dvou kapek hydroxidu sodného zředěného RS a 10 ml vody R a zředí se vodou R na 100,0 ml. 1,0 ml tohoto roztoku se zředí vodou R na 10,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 1,0 ml zkoušeného roztoku se zředí vodou R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Chromatograflcký postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné vhodným silikagelem oktadecylsilanisovaným pro chromatografii R (5 μm),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze, která je směsí objemových dílů acetonitrilu R a vody R (1 + 99) na počátku eluce a (13 + 87) na konci eluce, při průtokové rychlosti 1 ml/min a lineární gradientově eluci 60 min,
3. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 254 nm.

účinné od 1. 1. 2000Kolona se promývá mobilní fází o počátečním složení do ustavení rovnováhy po dobu nejméně 10 min. Nastaví se citlivost detektoru tak, aby výška hlavního píku po nástřiku 10 μl porovnávacího roztoku (b) byla nejméně 50 % celé stupnice zapisovače.

účinné od 1. 1. 2000Odděleně se nastříkne 10 μl vody R jako kontrolního roztoku a 10 μl porovnávacího roztoku (a). Při zaznamenání chromatogramu za předepsaných podmínek jsou retenční časy johexolu nečistoty A asi 17 min a obou píku johexolu (odpovídajích endo/exoizomerním formám) asi 20 min. Zkoušku lze hodnotit, jestliže rozlišení mezi píkem odpovídajícím johexolu nečistotě A a druhým větším píkem odpovídajícím johexolu je nejméně 5. V případě potřeby se upraví konečná koncentrace acetonitrilu v mobilní fázi nebo se upraví program lineární gradientové eluce.

účinné od 1. 1. 2000Odděleně se nastříkne po 10 μl zkoušeného roztoku a porovnávacího roztoku (b). Na chromatogramu zkoušeného roztoku není plocha žádného píku, kromě píků johexolu (viz výše), větší než polovina plochy hlavních píků johexolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (0,5 %) a součet ploch všech píků, kromě hlavních píků johexolu (viz výše), není větší než 1,5násobek plochy hlavních píků na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (1,5%). Nepřihlíží se k žádnému píku odpovídajícímu kontrolnímu roztoku.

1. účinné od 1. 1. 2000B. Provede se tenkovrstvá chromatografie (2.2.27) za použití vrstvy silikagelu GF₂s4 R.

   účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 1,0 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 10,0 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 50 mg johexolu nečistoty J CRL a 50 mg johexolu CRL se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 10,0 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 1,0 ml zkoušeného roztoku se zředí vodou R na 10,0 ml. 1,0 ml tohoto roztoku se zředí stejným rozpouštědlem na 50,0 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Vrstva se promyje mobilní fází, která je směsí objemových dílů amoniaku 26% R, methanolu R, 2-propanolu R a acetonu R (20 + 20 + 35 + 50), suší se 30 min při pokojové teplotě a pak 1 h při 90 °C.

   účinné od 1. 1. 2000Na vrstvu se odděleně nanese po 10 μl každého roztoku a vyvíjí se výše uvedenou směsí po dráze 10 cm. Vrstva se pozoruje v ultrafialovém světle při 254 nm. Na chromatogramu zkoušenéμho roztoku není žádná skvrna, kromě hlavní skvrny, intenzivnější než skvrna na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (0,2 %). Zkoušku lze hodnotit, jestliže na chromatogramu porovnávaμcího roztoku (a) jsou dvě zřetelně oddělené skvrny.

   účinné od 1. 1. 20003-Chlorpropan-1,2-diol. Nejvýše 100 μg/g. Stanoví se plynovou chromatografií (2.2.28). Zkoušený roztok. 1,0 g se rozpustí ve 2,0 ml vody R. Tento roztok se postupně čtyřikrát protřepe vždy 2 ml methylacetatu R. Spojené horní vrstvy se vysuší síranem sodným bezvodým R, zfiltrují se a zahustí na 2 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok. 0,50 g 3-chlorpropan-1,2-diolu R se rozpustí ve 100,0 ml methylacetatu R. 1,0 ml tohoto roztoku se zředí stejným rozpouštědlem na 100,0 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

   1. účinné od 1. 1. 2000- křemenné kolony délky 25 m a vnitřního průměru 0,33 mm s vnitřním povrchem potaženým po- lyfenylmethylsiloxanem R (tlouštka filmu 1 μm),
   2. účinné od 1. 1. 2000- helia pro chromatografií R jako nosného plynu při průtokové rychlosti 1 ml/min,
   3. účinné od 1. 1. 2000- plamenoionizačního detektoru.

   účinné od 1. 1. 2000Teplota kolony se udržuje 2 min na 80 °C, pak se zvyšuje rychlostí 15 °C/min až na 170 °C, při níž se udržuje 2 min. Teplota nástřikového prostoru je 230 °C a detektoru 250 °C.

   účinné od 1. 1. 2000Odděleně se nastříkne po 2 μl každého roztoku (bez děliče se nastřikuje po dobu 30 s). Při zaznamenání chromatogramů za předepsaných podmínek je retenční čas 3-chlorpropan-1,2-diolu asi 8 min.

   účinné od 1. 1. 2000Vypočte se obsah 3-chlorpropan-1,2-diolu.

účinné od 1. 1. 2000Methanol, methoxyethanol a 2-propanol. Nejvýše 50 μg/g methanolu a nejvýše po 100 μg/g methoxyethanolu a 2-propanolu. Stanoví se plynovou chromatografií (2.2.28) head-space metodou a metodou standardního přídavku za použití 2-butanolu R jako vnitřního standardu.

účinné od 1. 1. 2000Roztok vnitřního standardu. 0,50 g 2-butanolu R se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 500,0 ml. 5,0 ml tohoto roztoku se zředí vodou R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (a). 6,25 g se rozpustí ve vodě R, přidá se 5,0 ml roztoku vnitřního standardu a zředí se vodou R na 25,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (b). 5,0 ml zkoušeného roztoku (a) a 1,0 ml vody R se převedou do 1,0 ml lahvičky a lahvička se ihned uzavře.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok c). 5,0 ml zkoušeného roztoku (a) a 1,0 ml porovnávacího roztoku (b) se převedou do 10ml lahvičky a lahvička se ihned uzavře (odpovídá standardnímu přídavku 10 μg methanolu R, 20 μg 2-propanolu R a 20 μg methoxyethanolu R na 1 g zkoušené látky).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (d). 5,0 ml zkoušeného roztoku (a) a 1,0 ml porovnávacího roztoku (c) se převedou do 10 ml lahvičky a lahvička se ihned uzavře (odpovídá standardnímu přídavku 25 μg methanolu R, 50 μg 2-propanolu R a 50 μg methoxyethanolu R na 1 g zkoušené látky).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (e). 5,0 ml zkoušeného roztoku (a) a 1,0 ml porovnávacího roztoku (d) se převedou do 10ml lahvičky a lahvička se ihned uzavře (odpovídá standardnímu přídavku 50 μg methanolu R, 100 μg 2-propanolu R a 100 μg methoxyethanolu R na 1 g zkoušené látky).

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 0,625 g methanolu R, 1,250 g 2-propanolu R a 1,250 g methoxyethanolu R se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 1000,0 ml. Mezi přídavky jednotlivých složek se vždy směs přiměřeně naředí vodou R.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 10,0 ml porovnávacího roztoku (a) se zředí vodou R na 50,0 ml. 10,0 ml tohoto roztoku se zředí stejným rozpouštědlem na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (c). 5,0 ml porovnávacího roztoku (a) se zředí vodou R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (d). 10,0 ml porovnávacího roztoku (a) se zředí vodou R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (e). 10,0 ml porovnávacího roztoku (d) se přidá k 10,0 ml roztoku vnitřního standardu a zředí se vodou R na 50,0 ml. 6,0 ml tohoto roztoku se převede do 10ml lahvičky a lahvička se ihned uzavře.

účinné od 1. 1. 2000Postup head-space metodou se obvykle provádí za podmínek:

1. účinné od 1. 1. 2000- teploty 95 °C v komoře s řízenou teplotou,
2. účinné od 1. 1. 2000- doby ustavování rovnováhy 15 min,
3. účinné od 1. 1. 2000- teploty spojovacího vedení 140 °C,
4. účinné od 1. 1. 2000- doby tlakování 30 s,
5. účinné od 1. 1. 2000- doby plnění smyčky 10 s,
6. účinné od 1. 1. 2000- doby nástřiku 10 s.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- křemenné kolony délky 30 m a vnitřního průměru 0,54 mm s vnitřním povrchem potaženým zesítěným póly[(kyanopropyl)(methyl)][(fenyl)methyl)siloxanem R o tloušťce filmu 3 μm,
2. účinné od 1. 1. 2000- helia pro chromatografií R jako nosného plynu při průtokové rychlosti asi 14 ml/min,
3. účinné od 1. 1. 2000- plamenoionizačního detektoru.

účinné od 1. 1. 2000Teplota kolony se udržuje 5 min na 40 °C, pak se zvyšuje rychlostí 10 °C/min na 100 °C, při níž se udržuje 1 min. Teplota nástřikového prostoru je 140 °C a teplota detektoru 250 °C.

účinné od 1. 1. 2000Zaznamenají se chromatogramy zkoušených roztoků (b), (c), (d) a(e) a porovnávacího roztoku (e). Při zaznamenání chromatogramů za předepsaných podmínek jsou retenční časy methanolu asi 1,2 min, 2-propanolu asi 1,8 min, 2-butanolu asi 3,5 min a methoxyethanolu asi 4,5 min. Zkoušku lze hodnotit, jestliže rozlišení mezi píky methanolu a 2-propanolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (e) je nejméně 2,5.

účinné od 1. 1. 2000Z chromatogramů zkoušených roztoků se vypočte poměr plochy píku k ploše píku vnitřního standardu pro každou stanovovanou látku, zjištěné hodnoty se zpracují lineární regresní analýzou a vypočtou se koncentrace stanovovaných složek ve zkoušené látce.

účinné od 1. 1. 2000Alternativní možnost. Poměry ploch píku se vynesou proti přidanému množství dané stanovované látky na 1 g zkoušené látky. Křivka spojující jednotlivé body se extrapoluje až k průsečíku s osou koncentrace. Délka úsečky mezi tímto průsečíkem a průsečíkem obou os je hledanou koncentrací stanovované látky ve zkoušené látce (v μg/g).

účinné od 1. 1. 2000Volné aromatické aminy. Nejvýše 0,05 %; stanoví se absorpční spektrofotometru (2.2.25).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 0,200 g se v 25ml odměrné baňce rozpustí v 15,0 ml vody R.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok. 10,0 ml roztoku obsahujícího 10 μg/ml johexolu nečistoty J CRL se převede do 25ml odměrné baňky, přidá se 5,0 ml vody R a promíchá se.

účinné od 1. 1. 2000Kontrolní roztok. 15,0 ml vody R se převede do 25ml odměrné baňky.

účinné od 1. 1. 2000V průběhu dalšího postupu jsou baňky umístěny ve vodě s ledem a pracuje se za ochrany před světlem pokud možno až do okamžiku, kdy jsou přidána všechna zkoumadla.

účinné od 1. 1. 2000Baňky obsahující zkoušený roztok, porovnávací roztok a kontrolní roztok se umístí do vody s ledem a ponechají se za ochrany před světlem 5 min. Pak se přidá po 1,5 ml kyseliny chlorovodíkové RS, promíchá se, přidá se po 1,0 ml roztoku dusitanu sodného R (20 g/l), promíchá se a nechá se stát 4 min. Přidá se po 1,0 ml roztoku kyseliny amidosírové R (40 g/l) a mírně se promíchává až do ukončení vývinu plynů a nechá se stát 1 min. (Upozornění: v baňkách vzniká přetlak). Pak se přidá 1,0 ml čerstvě připraveného roztoku naftylethylendiamoniumdichíóridu R (3 g/l) ve směsi objemových dílů vody R a propylenglykolu R (30 + 70) a promíchá se. Baňky se vyjmou z vody s ledem, zředí se vodou R na 25 ml, promíchá se a nechá se 5 min stát. Absorbance zkoušeného roztoku a porovnávacího roztoku se změří souběžně při vlnové délce 495 nm v tlouštce vrstvy 5 cm proti kontrolnímu roztoku.

účinné od 1. 1. 2000Vypočte se obsah volných aromatických aminů.

účinné od 1. 1. 2000Jodidy. Nejvýše 20 μg/g. Provede se potenciometrická titrace (2.2.20). 6,000 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 20 ml. Přidají se 2,0 ml jodidu draselného 0,001 mol/l VS a titruje se dusičnanem stříbrným 0,001 mol/l VS za použití stříbrné elektrody jako indikační a vhodné referenční elektrody.

účinné od 1. 1. 2000Provede se slepá zkouška; 2,0 ml jodidu draselného 0,001 mol/l VS se zředí vodou R na 20 ml. Z rozdílu spotřeb se vypočte obsah jodidů.

účinné od 1. 1. 20001 ml dusičnanu stříbrného 0,001 mol/l VS odpovídá 126,9 μg jodidu.

účinné od 1. 1. 2000Iontové sloučeniny. Nejvýše 0,05 %, počítáno jako chlorid sodný. Provede se stanovení měrné vodivosti (2.2.38).

účinné od 1. 1. 2000Veškeré potřebné laboratorní sklo se před použitím pětkrát promyje vodou destilovanou R. Zkoušený roztok. 1,0 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok. 10,0 mg chloridu sodného R se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 100,0 ml. 10,0 ml tohoto roztoku se zředí vodou R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Na vhodném konduktometru se změří měrná vodivost zkoušeného roztoku a porovnávacího roztoku. Měrná vodivost zkoušeného roztoku není větší než měrná vodivost porovnávacího roztoku.

účinné od 1. 1. 2000Těžké kovy (2.4.8). 12 ml roztoku S vyhovuje limitní zkoušce A na těžké kovy (10 μg/g). Porovnávací roztok se připraví za použití základního roztoku olova (1 μg Pb/ml).

účinné od 1. 1. 2000Voda, semimikrostanovení (2.5.12). Nejvýše 4,0 %; stanoví se s 1,000 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 20000,500 g se v 250ml baňce s kulovitým dnem smíchá s 25 ml hydroxidu sodného koncentrovaného RS, 20 ml vody R, 1 g zinku práškového R a přidá se několik skleněných varných kuliček. Vaří se pod zpětným chladičem 30 min. Pak se nechá vychladnout a chladič se promyje 20 ml vody R, které se přidají do baňky. Obsah baňky se zfiltruje přes filtr ze slinutého skla, filtr se promyje několika podíly vody R, které se spojí s filtrátem. Přidá se 5 ml kyseliny octové ledové R a ihned se titruje dusičnanem stříbrným 0,1 mol/l VS za potenciometrické indikace (2.2.20) bodu ekvivalence. Vhodným elektrodovým systémem je použití stříbrné a merkurosulfátové elektrody.

účinné od 1. 1. 20001 ml dusičnanu stříbrného 0,1 mol/l VS odpovídá 27,37 mg C₉H₂₆I₃N₃O₉.

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000Ve vzduchotěsných obalech, chráněn před světlem a vlhkostí.

účinné od 1. 1. 2000Separandum.

účinné od 1. 1. 2000Nečistoty

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000A. 5-acetylamino-N,N՛-bis(2,3-dihydroxypropyl)-2,4,6-trijodbenzen-1,3-clikarboxamid,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000B. 5-[N-(2,6,7-trihydroxy-4-oxaheptyl)acetamido]-N,N՛-bis(2,3-clihydroxypropyl)-2,4,6-trijod-benzen-1,3-dikarboxamid,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000C. N,N-bis(2,3-dihydroxypropyl)-5-[N-(5,6-dihydroxy-2-hydroxymethyl-3-oxahexyl)acetamido]-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000D. 5-[N-(2,3-dihydroxypropyl)acetamido]-N-(2,3-dihydroxypropyl)-N՛-(2,6,7-trihydroxy-4-oxaheptyl)-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000E. 5-[N-(2,3-dihydroxypropyl)acetamido]-N-(5,6-dihydroxy-2-hydroxymethyl-3-oxahexyl)-N՛-(2,3-dihydroxypropyl)-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid,
2. účinné od 1. 1. 2000F. 5-amino-N,N՛-bis(2,3-dihydroxypropyl)dijodbenzen-1,3-dikarboxamid,
3. účinné od 1. 1. 2000G. 5-acetamido-N,N՛-bis(2,3-dihydroxypropyl)dijodbenzen-1,3-dikarboxamid,
4. účinné od 1. 1. 2000H. 5-[N-(2,3-dihydroxypropyl)acetamido]-N,N՛-bis(2,3-dihydroxypropyl)dijodbenzen-1,3-dikar-boxamid,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000I. 2-hydroxymethyl-N,N՛-bis(2,3-dihydroxypropyl)-5,7-dijod-2,3-dihydro-4H-1,4-benzoxazin-6,8-dikarboxamid,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000J. 5-amino-N,N՛-bis(2,3-dihydroxypropyl)-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxarnid.

účinné od 1. 1. 2000† Iopamidolum

účinné od 1. 1. 2000Jopamidol

účinné od 1. 1. 2000

účinné od 1. 1. 2000Je to (S)-N,Nˈ-bis[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethyl]-5-(2-hydroxypropionamido)-2,4,6-trijod- benzen-1,3-dikarboxamid. Počítáno na vysušenou látku, obsahuje 98,0 % až 101,0 % sloučeniny C₁₇H₂₂I₃N₃O₈.

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Bílý nebo téměř bílý prášek. Je snadno rozpustný ve vodě, velmi těžce rozpustný v methanolu, prakticky nerozpustný v lihu 96 % a dichlormethanu.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

1. účinné od 1. 1. 2000A. Infračervené absorbční spektrum (2.2.24) zkoušené látky se shoduje se spektrem jopamidolu CRL.
2. účinné od 1. 1. 2000B. Zkouška Ztráta sušením, viz Zkoušky na čistotu, je zároveň zkouškou totožnosti.
3. účinné od 1. 1. 2000C. Zkouška Specifická optická otáčivost, viz Zkoušky na čistotu, je zároveň zkouškou totožnosti.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Vzhled roztoku. 1 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 50 ml. Roztok je čirý (2.2.1) a bezbarvý (2.2.2, Metoda II).

účinné od 1. 1. 2000Kysele nebo zásaditě reagující látky. 10,0 g se rozpustí ve vodě prosté oxidu uhličitého R a zředí se jí na 100 ml. K dosažení hodnoty pH7,0 (2.2.3) se spotřebuje nejvýše 0,75 ml kyseliny chlorovodíkové 0,01 mol/l VS nebo 1,4 ml hydroxidu sodného 0,01 mol/l VS.

účinné od 1. 1. 2000Specifická optická otáčivost (2.2.7). –4,6° až –5,2°, počítáno na vysušenou látku. Měří se při 436 nm. Tento roztok: 10,0 g se rozpustí ve vodě R, je-li třeba zahřátím, a zředí se stejným rozpouštědlem na 25,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Příbuzné látky. Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 0,50 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 1,0 ml zkoušeného roztoku se zředí vodou R na 20,0 ml. 1,0 ml tohoto roztoku se zředí vodou R na 20,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 25 mg jopamidolu nečistoty B CRL se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 100 ml. 0,5 ml tohoto roztoku se zředí porovnávacím roztokem (a) na 5 ml.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanisovaným pro chromatografii R (5 pm),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze, která je směsí vody R (mobilní fáze A) a roztoku methanolu R 25% (V/V) (mobilní fáze B), s průtokovou rychlostí 1,5 ml/min a s gradientovou elucí podle níže uvedené tabulky:
   účinné od 1. 1. 2000

   Stanovení obsahu Uchovávání Označování † Iohexolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Příbuzné látky. Stanovení obsahu Uchovávání Nečistoty † Iopamidolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu

   Čas (min)	Mobilní fáze A %(V/V)	Mobilní fáze B %(V/V)
   0	92,5	7,5
   6	92,5	7,5
   18	65	35
   30	8	92
   34	8	92
   36	92,5	7,5

1. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 240 nm.

účinné od 1. 1. 2000Teplota kolony se udržuje na 35 °C.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku (b). Nastaví se citlivost detektoru tak, aby výšky obou píků na chromatogramu byly nejméně 50 % celé stupnice zapisovače. Zkoušku lze hodnotit, jestliže na získaném chromatogramu rozlišení mezi píkem jopamidolu nečistoty B a jopamidolu je nejméně 5,0.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se odděleně 20 μl zkoušeného roztoku a 20 μ porovnávacího roztoku (a). Na chromatogramu zkoušeného roztoku není součet ploch všech píků, kromě hlavního píku, větší než je plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,25 %). Nepřihlíží se k žádnému píku, jehož plocha je menší než 0,02násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a).

účinné od 1. 1. 2000Volné aromatické aminy. V průběhu zkoušky jsou roztoky a zkoumadla umístěny ve vodě s ledem, pracuje se za ochrany před světlem.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 0,500 g se v 25ml odměrné baňce rozpustí v 20,0 ml vody R.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok. 4,0 ml roztoku jopamidolu nečistoty A CRL (25,0 mg/l) se smíchá ve 25ml odměrné baňce se 16,0 ml vody R.

účinné od 1. 1. 2000Kontrolní roztok. 20,0 ml vody R se převede do 25ml odměrné baňky.

účinné od 1. 1. 2000Všechny tři baňky se umístí do vody s ledem a ponechají se 5 min za ochrany před světlem. Pak se přidá po 1,0 ml kyseliny chlorovodíkové R, obsahy baněk se promíchají a ponechá se 5 min stát. Přidá se po 1,0 ml roztoku dusitanu sodného R (20 g/l) připraveného těsně před použitím, promíchá se a opět se ponechá 5 min stát. Přidá se po 1,0 ml roztoku amidosíranu amonného R (120 g/l), mírně se promíchává, dokud unikají plyny. (Upozornění: v baňkách vzniká přetlak). Po 5 min se přidá po 1,0 ml čerstvě připraveného roztoku naftylethylendiamoniumdichloridu R (1 g/l) a promíchá se. Baňky se vyjmou z vody s ledem a nechají se stát 10 min. Pak se obsahy zředí vodou R na 25,0 ml, promíchá se a ihned se měří absorbance (2.2.25) zkoušeného a porovnávacího roztoku proti kontrolnímu roztoku při 500 nm.

účinné od 1. 1. 2000Absorbance zkoušeného roztoku není větší než absorbance porovnávacího roztoku (200 pg/g).

účinné od 1. 1. 2000Volný jod. Do kyvety pro odstřeďování opatřené zátkou se naváží 2,0 g a rozpustí se v 25 ml vody R. Přidá se 5 ml toluenu R a 5 ml kyseliny sírové zředěné RS. Obsah se protřepe a pak odstředí. V horní vrstvě nevznikne červené zbarvení.

účinné od 1. 1. 2000Jodidy. Nejvýše 10 μg/g. Stanoví se potenciometrickou titrací (2.2.20). 6,000 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 20 ml. Přidají se 2,0 ml jodidu draselného 0,001 mol/l VS a titruje se dusičnanem stříbrným 0,001 mol/l VS za použití stříbrné elektrody jako indikační a vhodné referenční elektrody. Provede se slepá zkouška za použití 20 ml vody R a 2,0 ml jodidu draselného 0,001 mol/l VS a z rozdílu spotřeb odměrného roztoku se vypočte obsah jodidů.

účinné od 1. 1. 20001 ml dusičnanu stříbrného 0,001 mol/l VS odpovídá 126,9 μg jodidu.

účinné od 1. 1. 2000Těžké kovy (2.4.8). 2,0 g vyhovují limitní zkoušce C na těžké kovy (10 μg/g). Porovnávací roztok se připraví za použití 2 ml základního roztoku olova (10 μg Pb/ml).

účinné od 1. 1. 2000Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 0,5 %; 1,000 g se suší v sušárně při 100 °C až 105 °C.

účinné od 1. 1. 2000Síranový popel (2.4.14). Nejvýše 0,1 %; stanoví se s 1,00 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Sterilita (2.6.1). Pokud je látka určena k výrobě parenterálních přípravků bez dalšího vhodného sterilizačního postupu, vyhovuje zkoušce na sterilitu.

účinné od 1. 1. 2000Bakteriální endotoxiny (2.6.14). Pokud je látka určena k výrobě parenterálních přípravků bez dalšího postupu odstraňujícího bakteriální endotoxiny, vyhovuje zkoušce na bakteriální endotoxiny, obsahuje-li nejvýše 1,4 m.j. endotoxinu v gramu.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 20000,300 g v 250ml baňce s kulatým dnem se smíchá s 5 ml hydroxidu sodného koncentrovaného RS, 20 ml vody R, 1 g zinku práškovaného R a přidá se několik skleněných varných kuliček. Vaří se 30 min pod zpětným chladičem. Pak se nechá vychladnout, chladič se promyje 20 ml vody R a promývací kapalina se přidá do baňky.

účinné od 1. 1. 2000Obsah baňky se zfiltruje filtrem ze slinutého skla, který se promyje několika podíly vody R. Filtrát se spojí s promývací tekutinou, přidá se 5 ml kyseliny octové ledové R a ihned se titruje dusičnanenm stříbrným 0,1 mol/l VS za potenciometrické indikace (2.2.20) bodu ekvivalence a za použití vhodného elektrodového systému jakým je stříbrná a merkurosulfátová elektroda.

účinné od 1. 1. 20001 ml dusičnanu stříbrného 0,1 mol/l VS odpovídá 25,90 mg C₁₇H₂₂I₃N₃O₈.

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000V dobře uzavřených obalech, chráněn před světlem. Pokud je látka sterilní, uchovává se ve sterilních vzduchotěsných zabezpečených obalech.

účinné od 1. 1. 2000Separandum.

účinné od 1. 1. 2000Označování

účinné od 1. 1. 2000V označení na obalu se uvede:

1. účinné od 1. 1. 2000- zda je látka sterilní,
2. účinné od 1. 1. 2000- zda je látka prostá bakteriálních endotoxinů.

účinné od 1. 1. 2000Nečistoty

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000A. R¹ = NHCH(CH₂OH)₂; R² = H: 5-amino-A,A’-bis[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethyl]-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid,
2. účinné od 1. 1. 2000B. R¹ = NHCH(CH₂OH)₂; R² = COCH₂OH: N,N’-bis[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethyl]-5-(2-hydroxyacetamido)-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid,
3. účinné od 1. 1. 2000C. R¹ = NHCH(CH₂OH)₂; R² = COCH₃: N,N’-bis[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethyl]-5-acetamido-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid,
4. účinné od 1. 1. 2000D. R¹ = OH; R²= COCHOHCH₃: kyselina 3-{N-[2-hydroxy-l-(hydroxymethyl)ethyl]karbamoyl}-5-(2-hydroxypropionamido)-2,4,6-trijodbenzoová,
5. účinné od 1. 1. 2000E. R¹ = NHCH(CH₂OH)₂; R²= COCH(CH₃)OCOCH₃: 5-(2-acetoxypropionamido)-N,N’-bis[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethyl]-2,4,6-trijodbenzen-1,3-dikarboxamid,
6. účinné od 1. 1. 2000F. R¹ = N(CH₃)₂; R²= COCHOHCH3: N-[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethyl]-5-(2-hydroxypropionamido)-N’-dimethy 1-2,4,6-trij odbenzen-1,3-dikarboxamid,
7. účinné od 1. 1. 2000G. R¹ = NHCH₂-CHOH-CH₂OH; R² = COCHOHCH₃: 5-(2-hydroxypropionamido)-N-[2-hydroxy-1-(hydroxymelhyl)ethyl]-N’-(2,3-dihydroxypropyl-2,4,6-trijodbenzcn-1,3-dikarboxamid.

účinné od 1. 1. 2000Isoleucinum¹)

účinné od 1. 1. 2000Isoleucin

účinné od 1. 1. 2000Synonymum. L-Isoleucinum

účinné od 1. 1. 2000

účinné od 1. 1. 2000Je to kyselina (2S,3S)-2-amino-3-methylvalerová. Počítáno na vysušenou látku, obsahuje 98,5 % až 101,0 % sloučeniny C₆H₁₃NO₂.

účinné od 1. 1. 2000Výroba

účinné od 1. 1. 2000Je-li vyráběn fermentací, vyhovuje požadavkům článku Producta fermentationis.

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Bílý nebo téměř bílý krystalický prášek nebo vločky. Je mírně rozpustný ve vodě, těžce rozpustný v lihu 96%, prakticky nerozpustný v etheru. Rozpouští se ve zředěných minerálních kyselinách a ve zředěných roztocích alkalických hydroxidů.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

účinné od 1. 1. 2000Základní sestava zkoušek: A a C.

účinné od 1. 1. 2000Alternativní sestava zkoušek: A, B a D, viz Obecné zásady (1.2).

1. účinné od 1. 1. 2000A. Zkouška Specifická optická otáčivost, viz Zkoušky na čistotu, je zároveň zkouškou totožnosti.
2. účinné od 1. 1. 2000B. 0,5 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 25 ml; roztok je pravotočivý.
3. účinné od 1. 1. 2000C. Infračervené absorpční spektrum (2.2.24) tablety zkoušené látky se shoduje se spektrem tablety isoleucinu CRL.
4. účinné od 1. 1. 2000D. Hodnotí se chromatogramy získané ve zkoušce Látky reagující s ninhydrinem, viz Zkoušky na čistotu. Hlavní skvrna na chromatogramu zkoušeného roztoku (b) odpovídá polohou, zbarvením a velikostí hlavní skvrně na chromatogramu porovnávacího roztoku (a).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Vzhled roztoku. 0,5 g se rozpustí v kyselině chlorovodíkové 1 mol/RS RS a zředí se jí na 10 ml. Roztok je čirý (2.2.1) a není zbarven intenzivněji než porovnávací barevný roztok HŽ₆ (2.2.2, Metoda II).

účinné od 1. 1. 2000Specifická optická otáčivost (2.2.7). +39,0° až +42,0°, počítáno na vysušenou látku; měří se roztok připravený rozpuštěním 1,00 g v kyselině chlorovodíkové RS a zředěním stejnou kyselinou na 25,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Látky reagující s ninhydrinem. Provede se tenkovrstvá chromatografie (2.2.27) za použití desky s vrstvou silikagelu pro TLC R.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (a). 0,10 g se rozpustí v kyselině chlorovodíkové 0,1 mol/l RS a zředí se jí na 10 ml. Zkoušený roztok (b). 1 ml zkoušeného roztoku (a) se zředí vodou R na 50 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 10 mg isoleucinu CRL se rozpustí v kyselině chlorovodíkové 0,1 mol/l RS a zředí se jí na 50 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 5 ml zkoušeného roztoku (b) se zředí vodou R na 20 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (c). 10 mg isoleucinu CRL a 10 mg valinu CRL se rozpustí v kyselině chlorovodíkové OJ mol/l RS a zředí se jí na 25 ml.

účinné od 1. 1. 2000Na vrstvu se odděleně nanese po 5 μl každého roztoku a vyvíjí se směsí objemových dílů kyseliny octové ledové R, vody R a 1-butanolu R (20 + 20 + 60) po dráze 15 cm. Vrstva se usuší na vzduchu a postříká se ninhydrinem RS a zahřívá se 15 min při 100 °C až 105 °C. Žádná skvrna na chromatogramu zkoušeného roztoku (a), kromě hlavní skvrny, není intenzivnější než skvrna na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (0,5 %). Zkoušku lze hodnotit, jestliže na chromatogramu porovnávacího roztoku (c) jsou dvě zřetelně oddělené skvrny.

účinné od 1. 1. 2000Chloridy (2.4.4). 0,25 g se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 15 ml. Tento roztok vyhovuje limitní zkoušce na chloridy (200 μg/g).

účinné od 1. 1. 2000Sírany (2.4.13). 0,5 g se rozpustí ve 3 ml kyseliny chlorovodíkové zředěné RS a zředí se vodou destilovanou R na 15 ml. Tento roztok vyhovuje limitní zkoušce na sírany (300 μ/g).

účinné od 1. 1. 2000Amonium. Připraví se dvě hodinová sklíčka o průměru 60 mm a umístí se těsně vedle sebe. Na vnitřní stěnu horního sklíčka se přilepí čtvereček papíru lakmusového červeného R o velikosti strany 5 mm a zvlhčí se několika kapkami vody R. 50 mg upráškované zkoušené látky se umístí na spodní sklíčko a rozpustí se nebo suspenduje v 0,5 ml vody R. K roztoku nebo suspenzi se přidá 0,30 g oxidu horečnatého těžkého R a rychle se promíchá skleněnou tyčinkou. Sklíčko s papírem lakmusovým se ihned překlopí na sklíčko se zkoušenou látkou a vzniklá komůrka se zahřívá 15 min při 40 °C. Lakmusový papír není zbarven intenzivněji modře než lakmusový papír u porovnávacího vzorku připraveného současně stejným způsobem za použití 0,1 ml základního roztoku amonia (100 μg NH₄/ml), 0,5 ml vody R a 0,30 g oxidu hořečnatého těžkého R (200 μg/g).

účinné od 1. 1. 2000Železo (2.4.9). 1,0 g se rozpustí v dělicí nálevce v 10 ml kyseliny chlorovodíkové zředěné RS a vytřepává se třikrát 3 min vždy s 10 ml isobutylmethylketonu R1. Ke spojeným organickým vrstvám se přidá 10 ml vody R a třepe se 3 min. Vodná vrstva vyhovuje limitní zkoušce na železo (10 μg/g).

účinné od 1. 1. 2000Těžké kovy (2.4.8). 2,0 g vyhovují limitní zkoušce D na těžké kovy (10 μg/g). Porovnávací roztok se připraví za použití základního roztoku olova (10 μg Pb/ml).

účinné od 1. 1. 2000Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 0,5 %; 1,000 g se suší v sušárně při 100 °C až 105 °C.

účinné od 1. 1. 2000Síranový popel (2.4.14). Nejvýše 0,1 %; stanoví se s 1,00 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 20000,100 g se rozpustí ve 3 ml kyseliny mravenčí bezvodé R, přidá se 30 ml kyseliny octové bezvodé R a titruje se kyselinou chloristou 0,1 mol/l VS za použití 0,1 ml naftolbenzeinu RS jako indikátoru do změny hnědožlutého zbarvení na zelené.

účinné od 1. 1. 20001 ml kyseliny chloristé 0,1 mol/l VS odpovídá 13,12 mg C₆H₁₃NO₂.

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000V dobře uzavřených obalech, chráněn před světlem.

účinné od 1. 1. 2000† Isoprenalini hydrochloridum

účinné od 1. 1. 2000Isoprenaliniumchlorid

účinné od 1. 1. 2000

účinné od 1. 1. 2000Je to (RS)-N-isopropyl-[2-hydroxy-2-(3,4-dihydroxyfenyl)ethyl]amoniumchlorid. Počítáno na vysušenou látku, obsahuje 98,0 % až 101,5 % sloučeniny C₁₁H₁₈CINO₃

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Bílý nebo téměř bílý krystalický prášek. Je snadno rozpustný ve vodě, mírně rozpustný v lihu 96%, prakticky nerozpustný v dichlormethanu.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

účinné od 1. 1. 2000Základní sestava zkoušek: B, C, E.

účinné od 1. 1. 2000Alternativní sestava zkoušek: A, C, D a E, viz Obecné zásady (1.2).

1. účinné od 1. 1. 2000A. Teplota tání (2.2.14). 166 °C až 170 °C.
2. účinné od 1. 1. 2000B. Infračervené absorpční spektrum (2.2.24) tablety zkoušené látky se shoduje se spektrem tablety isoprenaliniumchloridu CRL.
3. účinné od 1. 1. 2000C. Zkouška Optická otáčivost, viz Zkoušky na čistotu, je zároveň zkouškou totožnosti.
4. účinné od 1. 1. 2000D. K 0,1 ml roztoku S, viz Zkoušky na čistotu, se přidá 0,05 ml chloridu železitého RS1 a 0,9 ml vody R; vznikne zelené zbarvení. Po kapkách se přidá hydrogenuhličitan sodný RS; vznikne nejprve modré, potom červené zbarvení.
5. účinné od 1. 1. 2000E. K 0,5 ml roztoku S se přidá 1,5 ml vody R. Roztok vyhovuje zkoušce (a) na chloridy (2.3.1).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Roztoky se připraví bezprostředně před použitím.

účinné od 1. 1. 2000Roztok S. 2,5 g se rozpustí ve vodě prosté oxidu uhličitého R a zředí se jí na 25,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Vzhled roztoku. Roztok S je čirý (2.2.1) a není intenzivněji zbarven než porovnávací barevný roztok H₇ nebo HŽ₇ (2.2.2, Metoda II).

účinné od 1. 1. 2000Hodnota pH (2.2.3). 4,3 až 5,5; měří se směs 5 ml roztoku S a 5 ml vody prosté oxidu uhličitého R.

účinné od 1. 1. 2000Optická otáčivost (2.2.7). -0,10° až +0,10°; měří se roztok S.

účinné od 1. 1. 2000Příbuzné látky. Stanoví se kapalinovou chromatografií (2.2.29).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (a). 50,0 mg se rozpustí v mobilní fázi a zředí se jí na 10,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (b). 0,5 ml zkoušeného roztoku (a) se zředí mobilní fází na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 2,5 mg isoprenaliniumchloridu CRL se rozpustí v mobilní fázi a zředí se jí na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 2,5 mg orciprenaliniumsulfatu CRL se rozpustí v mobilní fázi a zředí se jí na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (c). K 1,0 ml zkoušeného roztoku (b) se přidá 1,0 ml porovnávacího roztoku (b) a zředí se mobilní fází na 20,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,125 m a vnitřního průměru 4,0 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro chromatografii R (5 jim),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze, která je směsí objemových dílů methanolu R a roztoku kyseliny fosforečné R (11,5 g/l) (5 + 95), průtoková rychlost je 1,0 ml/min,
3. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 280 nm,
4. účinné od 1. 1. 2000- injektorové smyčky.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku (a) a citlivost systému se nastaví tak, aby výška hlavního píku na chromatogramu byla nejméně 50 % celé stupnice zapisovače. Upraví se koncentrace methanolu v mobilní fázi tak, aby retenční čas hlavního píku byl asi 3 min. Nastříkne se 20 μl zkoušeného roztoku (a) a 20 μl porovnávacího roztoku (c). Chromatogram zkoušeného roztoku (a) se zaznamenává po dobu odpovídající sedminásobku retenčního času isoprenalinu. Zkoušku lze hodnotit, jestliže na chromatogramu porovnávacího roztoku (c) je rozlišení mezi dvěma hlavními píky nejméně 3 a poměr signálu k šumu píku isoprenalinu je nejméně 3.

účinné od 1. 1. 2000Na chromatogramu zkoušeného roztoku (a) není plocha žádného píku, kromě hlavního píku, větší než plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,5 %) a součet ploch takových píků není větší než dvojnásobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (1 %). Nepřihlíží se k pikům, jejichž plocha je menší než 0,05násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a).

účinné od 1. 1. 2000Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 1,0%. 1,000 g se suší 4h ve vakuové sušárně při 15 °C až 25 °C.

účinné od 1. 1. 2000Síranový popel (2.4.14). Nejvýše 0,1 %; stanoví se s 1,00 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 2000Aby se zabránilo přehřátí reakčního prostředí, důkladně se míchá a titrace se ukončí ihned po dosažení bodu ekvivalence.

účinné od 1. 1. 20000,150 g se rozpustí v 10 ml kyseliny mravenčí bezvodé R a přidá se 50 ml acetanhydridu R. Titruje se kyselinou chloristou 0,1 mol/l VS za potenciometrické indikace bodu ekvivalence (2.2.20).

účinné od 1. 1. 20001 ml kyseliny chloristé 0,1 mol/l VS odpovídá 24,77 mg C₁₁H₁₈ClNO₃.

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000Ve vzduchotěsném obalu, chráněn před světlem.

účinné od 1. 1. 2000Separandum.

účinné od 1. 1. 2000Nečistoty

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000A. (3,4-dihydroxyfenyl)isopropylaminomethylketon.

účinné od 1. 1. 2000† Itraconazolum

účinné od 1. 1. 2000Itrakonazol

účinné od 1. 1. 2000

účinné od 1. 1. 2000Je to 4-{4-[4-[4-[[cis-2-(2,4-dichlorfenyl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]-methoxy]fenyl]piperazin4-yl]fenyl}-2-[(1RS)-1-methylpropyl]-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on. Počítáno na vysušenou látku, obsahuje 98,5 % až 101,5 % sloučeniny C₃₅H₃₈CI₂N₈O₄.

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Bílý nebo téměř bílý prášek. Je prakticky nerozpustný ve vodě, snadno rozpustný v dichlormethanu, mírně rozpustný v tetrahydrofuranu, velmi těžce rozpustný v lihu 96%.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

účinné od 1. 1. 2000Základní sestava zkoušek: B.

účinné od 1. 1. 2000Alternativní sestava zkoušek: A, C, D, viz Obecné zásady (1.2).

1. účinné od 1. 1. 2000A. Teplota tání (2.2.14): 166 °C až 170 °C.
2. účinné od 1. 1. 2000B. Infračervené absorpční spektrum (2.2.24) tablety zkoušené látky se shoduje se spektrem tablety itrakonazolu CRL.
3. účinné od 1. 1. 2000C. Provede se tenkovrstvá chromatografie (2.2.27) za použití vrstvy vhodného silikagelu oktadecylsilanizovaného.

   účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 30 mg se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů methanolu R a dichlormethanu R a zředí se stejnou směsí na 5 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 30 mg itrakonazolu CRL se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů methanolu R a dichlormethanu R a zředí se stejnou směsí na 5 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 30 mg itrakonazolu CRL a 30 mg ketokonazolu CRL se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů methanolu R a dichlormethanu R a zředí se stejnou směsí na 5 ml.

   účinné od 1. 1. 2000Na vrstvu se odděleně nanese po 5 μl každého roztoku a vyvíjí se v nenasycené komoře směsí objemových dílů octanu amonného RS, dioxanu R a methanolu R (20 + 40 + 40) po dráze 10 cm. Vrstva se 15 min suší v proudu horkého vzduchu a vystaví se působení par jodu, dokud se neobjeví skvrny. Pozoruje se v denním světle. Hlavní skvrna na chromatogramu zkoušeného roztoku odpovídá polohou, barvou a velikostí hlavní skvrně na chromatogramu porovnávacího roztoku (a). Zkoušku lze hodnotit, pokud na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) jsou dvě zřetelně oddělené skvrny.

1. účinné od 1. 1. 2000D. Ke 30 mg se v porcelánovém kelímku přidá 0,3 g uhličitanu sodného bezvodého R. Zahřívá se 10 min nad plamenem. Po ochlazení se zbytek rozpustí v 5 ml kyseliny dusičné zředěné RS a zfiltruje se. K 1 ml filtrátu se přidá 1 ml vody R. Roztok vyhovuje zkoušce (a) na chloridy (2.3.1).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Roztok S. 2,0 g se rozpustí v dichlormethanu R a zředí se jím na 20,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Vzhled roztoku. Roztok S je čirý (2.2.1) a není zbarven intenzivněji než porovnávací barevný roztok HŽ₆ (2.2.2, Metoda II).

účinné od 1. 1. 2000Optická otáčivost (2.2.7). –0,10° až +0,10°. Měří se roztok S.

účinné od 1. 1. 2000Příbuzné látky. Stanoví se kapalinovou chromatografií (2.2.29).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 0,100 g se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů methanolu R a tetrahydrofuranu R a zředí se stejnou směsí na 10,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 5,0 mg itrakonazolu CRL a 5,0 mg mikonazolu CRL se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů methanolu R a tetrahydrofuranu R a zředí se stejnou směsí na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 1,0 ml zkoušeného roztoku se zředí směsí stejných objemových dílů methanolu R a tetrahydrofuranu R na 100,0 ml. 5,0 ml tohoto roztoku se zředí stejnou směsí na 10,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,1 m a vnitřního průměru 4,0 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným deaktivovaným pro chromatografií bazických látek R (3 μm),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze s průtokovou rychlostí 1,5 ml/min a gradientovým programem za následujících podmínek:
   1. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze A - roztok tetrabutylamoniumhydrogensulfatu R (27,2 g/1),
   2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze B - acetonitril R,
   účinné od 1. 1. 2000

   Stanovení obsahu Uchovávání Označování † Iohexolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Příbuzné látky. Stanovení obsahu Uchovávání Nečistoty † Iopamidolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Stanovení obsahu Uchovávání Označování Nečistoty Isoleucinum1) Výroba Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Stanovení obsahu Uchovávání † Isoprenalini hydrochloridum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Stanovení obsahu Uchovávání Nečistoty † Itraconazolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu

   Čas (min)	Mobilní fáze A % (V/V)	Mobilní fáze B % (V/V)	Poznámky
   0 - 20	80 →50	20 → 50	lineární gradient
   20 - 25	50	50	izokratická eluce
   25 - 30	80	20	přepnutí na počáteční složení eluentu
   30 = 0	80	20	začátek dalšího gradientu

1. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 225 nm.

účinné od 1. 1. 2000Kolona se ustaluje nejméně 30 min acetonitrilem R při průtokové rychlosti 1,5 ml/min a pak nejméně 5 min eluentem o počátečním složení.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 10 μl porovnávacího roztoku (b). Citlivost systému se nastaví tak, aby výška hlavního píku byla nejméně 50 % celé stupnice zapisovače.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 10 μl porovnávacího roztoku (a). Při zaznamenání chromatogramu za předepsaných podmínek jsou retenční časy mikonazolu asi 10,5 min a itrakonazolu asi 11 min. Zkoušku lze hodnotit, jestliže rozlišení mezi píky mikonazolu a itrakonazolu je nejméně 2,0. Je-li třeba, upraví se koncentrace acetonitrilu v mobilní fázi nebo se upraví časový program lineární gradientově eluce.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se odděleně 10 pl směsi stejných objemových dílů methanolu R a tetrahydrofuranu R jako slepá zkouška, 10 μl zkoušeného roztoku a 10 μl porovnávacího roztoku (b). Na chromatogramu zkoušeného roztoku není plocha žádného píku, kromě hlavního píku, větší než plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (0,5 %) a součet ploch všech píků, kromě hlavního píku, není větší než 2,5násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (1,25 %). Nepřihlíží se k pikům získaným ve slepé zkoušce a k pikům s plochou menší než 0,1 násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b).

účinné od 1. 1. 2000Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 0,5%. 1,000 g se suší 4h v sušárně při teplotě 100 °C až 105 °C.

účinné od 1. 1. 2000Síranový popel (2.4.14). Nejvýše 0,1 %, stanoví se s 1,00 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 20000,300 g se rozpustí v 70 ml směsi objemových dílů kyseliny octové ledové R a 2-butanonu R (1+7). Titruje se kyselinou chloristou 0,1 mol/lVS za potenciometrické indikace do druhého inflexního bodu (2.2.20).

účinné od 1. 1. 20001 ml kyseliny chloristé 0,1 mol/l VS odpovídá 35,3 mg C₃₅H₃₈CI₂N₈O₄.

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000V dobře uzavřených obalech, chráněn před světlem.

účinné od 1. 1. 2000Separandum.

účinné od 1. 1. 2000Nečistoty

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000A. 4-{4-[4-(4-methoxyfenyl)piperazin-1-yl]fenyl}-2-[(lRS)-1-methylpropyl]-2,4-dihydro-3 -1,2,4-triazol-3-on,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000B. 4-{4-[4-[4-[[cis-2-(2,4-dichlorfenyl)-2-(4H-1,2,4-triazol-4-ylmethyl)-1,3dioxolan-4-yl]methoxy]fenyl]piperazin-1-yl]fenyl}-2-[(1RS)-1-methylpropyl]-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000C. 4-{4-[4-[4-[[cis-2-(2,4-dichlorfenyl)-2-(1H-l,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]met- hoxy]fenyl]piperazin-1-yl]fenyl}-2-(l-propyl)-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000D. 4-{4-[4-[4-[[cis-2-(2,4-dichlorfenyl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]met- hoxy]fenyl]piperazin1l-yl]fenyl}-2-isopropyl-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000E. 4-{444-[4-[[tams-2-(2,4-dichlorfenyl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy] feny 1] piperazin-1-yl] fenyl }-2-[(1RS)-1-methylpropyl]-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000F. 2-butyl-4-{4-[4-[4-[[cis-2-(2,4-dichlorfenyl)-2-(1H-l,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]fenyl]piperazin-1-yl]fenyl}-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000G. 4-{4-[4-[4-[[cis-2-(2,4-dichlorfenyl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy] fenyl] piperazin-1-yl] fenyl}-2-{[cis-2-(2,4-dichlorfeny l)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methyl}-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazol-3-on.

účinné od 1. 1. 2000† Ivermectinum

účinné od 1. 1. 2000Ivermektin

účinné od 1. 1. 2000Je to směs (2aE,4Es,8E)-(5՛5,6S,6՛R,7S,11R,13R,15S,17aR,20R,20aR, 20bS)-20,20b-dihydroxy-5՛,6,8,19-tetramethyl-7-{[(3-O-methyl-4-O-(3-O-methyl-2,6-dideoxy-α-L-arabino-hexopyranosyl)-2,6-dideoxy-α-L-arabino-hexopyranosyl]oxy}-6՛-[(1S)-1-methylpropyl]-3՛,4՛,5՛,6,6՛,7,10,-11,14,15,17a,20,20a,20b-tetradekahydrospiro[11,15-methano-2H,13H,17H-furo[4,3,2-pq7][2,6]-benzodioxacyklooktadecen-13,2՛-[2H]pyran]-17-on (nebo 5-O-demethyl-22,23-dihydroavermektin A_1a) (složka H₂B_1a) a (2aE,4E,8E)-(5՛S,6S,6՛R,7S,11R,13R,15S,17aR,20R,20aR,20b5)-20,20b-dihydroxy-5՛,6,8,19-tetramethyl-6՛-isopropyl-7-{[(3-O-methyl-4-O-(3-O-methyl-2,6-dideoxy-α-L-arabino-hexopyranosyl)-2,6-dideoxy-α-L-arabino-hexopyranosyl]oxy}-3՛,4՛,5՛,6,6՛,7,10,11,14,15,17a,20,20a,20b-tetradekahydrospiro[11,15-methano-2H,13H,17H-furo[4,3,2-pq][2,6]benzodioxacyklooktadecen-13,2՛-[2H]pyran]-17-on (nebo 25-(isopropyl)-5-O-demethyl-25-de(1-methylpropyl)-22,23-dihydroavermektin A_1a) (složka H₂B_1b). Obsahuje nejméně 90,0 % sloučeniny C₄₈H₇₄O₁₄ (složka H₂B_1a) a součet obsahů složek H₂B_1a a H₂B_1b je 95,0 % až 100,5 %, oboje počítáno na bezvodou a rozpouštědel prostou látku.

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Bílý nebo žlutobílý krystalický prášek, mírně hygroskopický. Je prakticky nerozpustný ve vodě, snadno rozpustný v dichlormethanu, dobře rozpustný v lihu 96%.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

1. účinné od 1. 1. 2000A. Infračervené absorpční spektrum (2.2.24) zkoušené látky se shoduje se spektrem ivermektinu CRL.
2. účinné od 1. 1. 2000B. Hodnotí se chromatogramy získané při zkoušce Stanovení obsahu. Retenční časy a velikosti dvou hlavních píků na chromatogramu zkoušeného roztoku odpovídají dvěma hlavním pikům na chromatogramu porovnávacího roztoku (a).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Vzhled roztoku. 1,0 g se rozpustí v 50 ml toluenu R. Roztok je čirý (2.2.1) a není zbarven intenzivněji než porovnávací barevný roztok HŽ₇ (2.2.2, Metoda II).

účinné od 1. 1. 2000Specifická optická otáčivost (2.2.7). –17° až –20°, počítáno na bezvodou a rozpouštědel prostor látku. Měří se roztok připravený rozpuštěním 0,250 g v methanolu R a zředěním stejným rozpouštědlem na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Příbuzné látky. Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29) způsobem uvedeným ve Stanovení obsahu.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 20 μl zkoušeného roztoku. Chromatogram se zaznamenává po dobu odpovídající dvojnásobku retenčního času ivermektinu. Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku (b) a 20 μl porovnávacího roztoku (c). Na chromatogramu zkoušeného roztoku plocha píku s relativním retenčním časem 1,3 až 1,5 vztaženo k hlavnímu píku není větší než 2,5násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (2,5 %); plocha žádného dalšího píku, kromě dvou hlavních píků, není větší než plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (1 %); součet ploch všech píků, kromě dvou hlavních píků, není větší než pětinásobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) (5 %). Nepřihlíží se k pikům s plochou menší než plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (c).

účinné od 1. 1. 2000Ethanol a formamid. Nejvýše 5,0 % ethanolu a nejvýše 3,0 % formamidu. Provede se plynová chromatografie (2.2.28) s použitím 2-propanolu R jako vnitřního standardu.

účinné od 1. 1. 2000Roztok vnitřního standardu. 0,5 ml 2-propanolu R se zředí vodou R na 100 ml.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 0,120 g se rozpustí v odstřeďovací zkumavce ve 2,0 ml m-xylenuR (v případě potřeby se zahřeje na vodní lázni na 40 °C až 50 °C). Přidají se 2,0 ml vody R, dobře se promíchá a odstředí se. Horní vrstva se odstraní a extrahuje se 2,0 ml vody R. Opět se odstraní horní vrstva a vodné vrstvy se spojí. Přidá se 1,0 ml roztoku vnitřního standardu. Odstředí se a odstraní se zbývající m-xylen.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 3,0 g ethanolu R se zředí vodou R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 1,0 gformamidu R se zředí vodou R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (c). 5,0 ml porovnávacího roztoku (a) a 5,0 ml porovnávacího roztoku (b) se zředí vodou R na 50,0 ml. Ke 2,0 ml tohoto roztoku v odstřeďovací zkumavce se přidají 2,0 ml m-xylenu R, dobře se promíchá a odstředí se. Horní vrstva se odstraní a extrahuje se 2,0 ml vody R. Opět se odstraní horní vrstva a vodné vrstvy se spojí. Přidá se 1,0 ml roztoku vnitřního standardu Odstředí se a odstraní se zbývající m-xylen.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (d). 10,0 ml porovnávacího roztoku (a) a 10,0 ml porovnávacího roztoku (b) se zředí vodou R na 50,0 ml. Dále se postupuje jako u porovnávacího roztoku (c) (od „Ke 2,0 ml tohoto roztoku v odstřeďovací zkumavce…“).

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- křemenné kapilární kolony délky 30 m a vnitřního průměru 0,32 mm nebo 0,53 mm s vnitřní stěnou pokrytou vrstvou poly[{kyanopropyl)(fenyl)][dimethylJsiloxanem R (tloušťka filmu 1,8 μm nebo 3 μm),
2. účinné od 1. 1. 2000- helia pro chromatografii R jako nosného plynu s dělicím poměrem 1 : 5a lineární rychlostí asi 35 cm/s,
3. účinné od 1. 1. 2000- plamenoionizačního detektoru,

   účinné od 1. 1. 2000s následujícím teplotním programem:

   účinné od 1. 1. 2000

   Stanovení obsahu Uchovávání Označování † Iohexolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Příbuzné látky. Stanovení obsahu Uchovávání Nečistoty † Iopamidolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Stanovení obsahu Uchovávání Označování Nečistoty Isoleucinum1) Výroba Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Stanovení obsahu Uchovávání † Isoprenalini hydrochloridum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Stanovení obsahu Uchovávání Nečistoty † Itraconazolum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu Stanovení obsahu Uchovávání Nečistoty † Ivermectinum Vlastnosti Zkoušky totožnosti Zkoušky na čistotu

   	Čas (min)	Teplota (°C)	Rychlost (°C/min)	Poznámka
   Kolona	0 - 5	40		izotermicky lineární gradient izotermicky
   	5 - 12	40 → 180	20
   	12 - 14	180
   Nástřikový prostor		140
   Detektor		250

účinné od 1. 1. 2000Nastřikuje se zkoušený roztok, porovnávací roztok (c) a porovnávací roztok (d).

účinné od 1. 1. 2000Těžké kovy (2.4.8). 1,0 g vyhovuje limitní zkoušce C na těžké kovy (20 μg/g). Porovnávací roztok se připraví s použitím 2 ml základního roztoku olova (10 μg Pb/ml).

účinné od 1. 1. 2000Voda, semimikrostanovení (2.5.12). Nejvýše 1,0 %; stanoví se s 0,50 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Síranový popel (2.4.14). Nejvýše 0,1 %; stanoví se s 1,00 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 2000Stanoví se kapalinovou chromatografií (2.2.29).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 40,0 mg se rozpustí v methanolu R a zředí se jím na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 40,0 mg ivermektinu CRL se rozpustí v methanolu R a zředí se jím na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). 1,0 ml porovnávacího roztoku (a) se zředí methanolem R na 100,0 ml. Porovnávací roztok (c). 5,0 ml porovnávacího roztoku (b) se zředí methanolem R na 100,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro chromatografii R (5 μm),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze o průtokové rychlosti 1,0 ml/min:
3. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze A - voda R,
4. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze B - směs objemových dílů methanolu R a acetonitrilu R (35 + 53),
5. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 254 nm.

účinné od 1. 1. 2000Kolona se ustaluje mobilní fází o poměru A : B 15 : 85.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku (a). Zkoušku lze hodnotit, jestliže rozlišení mezi prvním píkem (složka H₂B_1b) a druhým píkem (složka H₂B_1a) je nejméně 3,0 (je-li třeba upraví se poměr mobilní fáze A : B) a faktor symetrie hlavního píku je nejvýše 2,5. Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku (c). Citlivost systému se nastaví tak, aby byl poměr signálu k šumu hlavního píku nejméně deset. Porovnávací roztok (a) se nastříkne šestkrát. Zkoušku lze hodnotit, jestliže je relativní směrodatná odchylka ploch píku složky H₂B_1a nejvýše 1,0%. Střídavě se nastřikuje zkoušený roztok a porovnávací roztok (a). Vypočítá se obsah složky H₂B_1a a ivermektinu (součet složek H₂B_1a a H₂B_1b) v procentech.

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000Ve vzduchotěsných obalech.

účinné od 1. 1. 2000Separandum.

účinné od 1. 1. 2000Nečistoty

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000A. R = CH₂-CH₃: 5-O-demethylavermektin A_1a (avermektin B_1a),
2. účinné od 1. 1. 2000B. R = CH₃: 25-isopropyl-5-O-demethyl-25-de(1-methylpropyl)avermektin A_1a (avermektin B_1b),

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000C. R¹ = H₂, R²= OH: (23S)-23-hydroxy-5-O-demethyl-22,23-dihydroavermektin A_1a (avermektin B_2a),
2. účinné od 1. 1. 2000D. R¹ = O, R² = H: 28-oxo-5-O-demethyl-22,23-dihydroavermektin A_1a (28-oxo H₂B_1a),

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000E. R = CH₂-CH₃: (2S)-5-O-demethyl-22,23-dihydroavermektin A_1a (2-epimer H₂ B_1a),
2. účinné od 1. 1. 2000F. R = CH₃: (2S)-25-isopropyl-5-O-demethyl-25-de(l-methylpropyl)-22,23-dihydroavermektin-A_1a (2-epimer H₂B_1b),

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000G. R¹ = H: aglykon 5-O-demethyl-22,23-dihydroavermektinu A_1a (aglykon H₂ B_1a),
2. účinné od 1. 1. 2000H. R¹ = osyl: 4՛-O-de(2,6-dideoxy-3-O-α-L-arabino-hexopyranosyl)-5-O-demethyl-22,23-dihydroavermektin A_1a,

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000I. R = CH₂-CH₃: 2,3-didehydro-5-O-demethyl-3,4,22,23-tetrahydroavermektin A_1a (Δ^2,3 H₂ B_1a),
2. účinné od 1. 1. 2000J. R = CH₃: 25-isopropyl-2,7,-didehydro-5-O-demethyl-25-de(l-methylpropyl)-3,4,22,23-tetrahydroavermektin A_1a (Δ^2,3 H2B_1b),

účinné od 1. 1. 2000

1. účinné od 1. 1. 2000K. (4R)- a (4S)-5-O-demethyl-3,4,22,23-tetrahydroavermektin A_1a (H₄B_1a izomery).

účinné od 1. 1. 2000Jecoris aselli oleum (typus A)

účinné od 1. 1. 2000Rybí olej (typ A)

účinné od 1. 1. 2000Je to čištěný olej získaný z čerstvých jater druhu Gadus morhua L. a z jiných druhů čeledi Gadidae, pevné látky jsou odstraněny ochlazením a filtrací. Obsahuje 600 m.j. (180 μg) až 2500 m.j. (750 μg) vitaminu A a 60 m.j. (1,5 μg) až 250 m.j. (6,25 μg) vitaminu D₃ v gramu.

účinné od 1. 1. 2000Oprávněná autorita může povolit přísadu přípustných antioxidantů v předepsaném množství.

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Čirá nažloutlá viskózní tekutina. Je prakticky nerozpustný ve vodě, těžce rozpustný v lihu 96%, mísitelný s etherem petrolejovým.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

účinné od 1. 1. 2000Základní sestava zkoušek: A, B a C.

účinné od 1. 1. 2000Alternativní sestava zkoušek: C a D, viz Obecné zásady (1.2).

1. účinné od 1. 1. 2000A. Zkouška Vitamin A, metoda A, viz Stanovení obsahu, je zároveň zkouškou totožnosti. Zkoušený roztok (2.2.25) vykazuje maximum při (325 ± 2) nm.

účinné od 1. 1. 2000Zkouška Vitamin A, metoda B, viz Stanovení obsahu, je zároveň zkouškou totožnosti. Na chromatogramu zkoušeného roztoku je pík odpovídající píku all-trans-retinolu na chromatogramu porovnávacího roztoku.

1. účinné od 1. 1. 2000B. Zkouška Vitamin D₃, viz Stanovení obsahuje zároveň zkouškou totožnosti. Na chromatogramu zkoušeného roztoku (a) je pík odpovídající píku cholekalciferolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b).
2. účinné od 1. 1. 2000C. Zkouška Podíl mastných kyselin, viz Zkoušky na čistotu, je zároveň zkouškou totožnosti.
3. účinné od 1. 1. 2000D. K 0,1 g se přidá 0,5 ml chloroformu R a 1 ml chloridu antimonitého RS a protřepe se; do asi 10 s vznikne tmavě modré zbarvení.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Barva. Zkoušená látka není zbarvena intenzivněji (2.2.2, Metoda II) než porovnávací roztok připravený takto: ke 3,0 ml základního červeného roztoku se přidá 25,0 ml základního žlutého roztoku a zředí se roztokem kyseliny chlorovodíkové R (10 g/l) na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Relativní hustota (2.2.5). 0,917 až 0,930.

účinné od 1. 1. 2000Index lomu (2.2.6). 1,477 až 1,484.

účinné od 1. 1. 2000Číslo kyselosti (2.5.1). Nejvýše 2,0; stanoví se s 5,0 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Číslo anisidinové. Nejvýše 30,0.

účinné od 1. 1. 2000Anisidinové číslo je definováno jako stonásobek absorbance roztoku obsahujícího 1 g zkoušené látky ve 100 ml směsi rozpouštědel a zkoumadel při tloušťce vrstvy 10 mm, viz níže uvedený postup.

účinné od 1. 1. 2000Zkouška se provádí co nejrychleji, za ochrany před aktinickým světlem.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (a). 0,500 g se rozpustí v trimethylpentanu R a zředí se jím na 25,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (b). 5,0 ml zkoušeného roztoku (a) se smíchá s 1,0 ml roztoku p-anisidinuR (2,5 g/l) v kyselině octové ledové R; roztok se protřepe a nechá se stát chráněn před světlem. Porovnávací roztok. 5,0 ml trimethylpentanu R se smíchá s 1,0 ml roztoku p-anisidinu R (2,5 g/l) v kyselině octové ledové R roztok se protřepe a nechá se stát chráněn před světlem.

účinné od 1. 1. 2000Měří se absorbance (2.2.25) zkoušeného roztoku (a) při 350 nm za použití trimethylpentanu R jako kontrolní tekutiny. Přesně 10 min po přípravě se měří absorbance (2.2.25) zkoušeného roztoku (b) při 350 nm za použití porovnávacího roztoku jako kontrolní tekutiny.

účinné od 1. 1. 2000Anisidinové číslo se vypočítá ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000A_s - absorbanci zkoušeného roztoku (b) při 350 nm,
2. účinné od 1. 1. 2000A_b - absorbanci zkoušeného roztoku (a) při 350 nm,
3. účinné od 1. 1. 2000m - hmotnost zkoušené látky ve zkoušeném roztoku (a) v gramech.

účinné od 1. 1. 2000Číslo jodové (2.5.4). 150 až 180.

účinné od 1. 1. 2000Číslo peroxidové (2.5.5). Nejvýše 10,0.

účinné od 1. 1. 2000Nezmýdelnitelné látky (2.5.7). Nejvýše 1,5 %; stanoví se s 5,0 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Stearin. 10 ml se nechá stát 3 h ve vodě s ledem; olej zůstane čirý.

účinné od 1. 1. 2000Podíl mastných kyselin

účinné od 1. 1. 2000Následující vzor chormatogramu je pouze pro informaci a tato část není součástí požadavků článku.

účinné od 1. 1. 2000

účinné od 1. 1. 2000Obr. 1. Vzorový chromatogram pro zkoušku Podíl mastných kyselin

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 2000Zkouška se provede co nejrychleji, za ochrany před aktinickým světlem a vzduchem, oxidačními činidly, oxidačními katalyzátory (např. mědí a železem) a kyselinami.

účinné od 1. 1. 2000Vitamin A. Provede se absorpční spektrofotometrie v ultrafialové oblasti (2.2.25) (Metoda A). Jestliže výsledky Metody A nelze hodnotit, provede se kapalinová chromatografie (2.2.29) (Metoda B).

účinné od 1. 1. 2000Metoda A

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 1,00 g se v baňce s kulatým dnem smíchá se 3 ml čerstvě připraveného roztoku hydroxidu draselného R 50% a 30 ml ethanolu R. Vaří se 30 min pod zpětným chladičem v proudu dusíku R. Pak se rychle ochladí, přidá se 30 ml vody R a protřepe se čtyřikrát 50 ml etheru R, po posledním protřepání se dokonale oddělená spodní vrstva odstraní. Spojené horní vrstvy se protřepou čtyřikrát 50 ml vody R a odpaří se opatrně proudem dusíku R do sucha při teplotě nepřevyšující 30 °C nebo v rotační vakuové odparce za sníženého tlaku při teplotě nepřevyšující 30 °C. Zbytek se rozpustí v dostatečném množství 2-propanolu R1, tak aby koncentrace vitaminu A byla 10 m.j. až 15 m.j. v 1 mililitru roztoku.

účinné od 1. 1. 2000Měří se absorbance roztoku při 300 nm, 310 nm, 325 nm a 334 nm a při vlnové délce maximální absorpce vhodným spektrofotometrem ve zvlášť upravených kyvetách při tloušťce vrstvy 10 mm za použití 2-propanolu R1 jako kontrolní tekutiny.

účinné od 1. 1. 2000Obsah vitaminu A, počítáno jako all-trans-retinol, v mezinárodních jednotkách v 1 gramu zkoušené látky se vypočítá ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000A₃₂₅ - absorbanci při 325 nm,
2. účinné od 1. 1. 2000m - navážku zkoušené látky v gramech,
3. účinné od 1. 1. 2000V - celkový objem roztoku obsahujícího 10 m.j. až 15 m.j. vitaminu A v 1 mililitru,
4. účinné od 1. 1. 20001830 - přepočítávací faktor pro specifickou absorbanci all-trans-retinolu v mezinárodních jednotkách.

účinné od 1. 1. 2000Uvedený vzorec lze použít pouze v případě, že hodnota A₃₂₅ není větší než hodnota A_325,corr/0,970. kde A_325,corr je upravená absorbance při 325 nm daná vztahem:

účinné od 1. 1. 2000Dolní index písmene A značí odpovídající vlnovou délku.

účinné od 1. 1. 2000Je-li hodnota A₃₂₅ větší než hodnota A₃₂₅,_corr/0,970, vypočítá se obsah vitaminu A ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000Zkoušku lze hodnotit, jestliže:

1. účinné od 1. 1. 2000- absorpčního maxima je dosaženo při 323 nm až 327 nm,
2. účinné od 1. 1. 2000- poměr absorbance při 300 nm k absorbanci při 325 nm je nejvýše 0,73.

účinné od 1. 1. 2000Metoda B

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 2,00 g se v baňce s kulatým dnem smíchají s 5 ml čerstvě připraveného roztoku kyseliny askorbové R (100 g/l), 10 ml čerstvě připraveného roztoku hydroxidu draselného R (800 g/l) a 100 ml ethanolu R. Vaří se 15 min pod zpětným chladičem na vodní lázni, pak se přidá 100 ml roztoku chloridu sodného R (10 g/l) a ochladí se. Roztok se převede do 500ml dělicí nálevky spolu s asi 75 ml roztoku chloridu sodného R (10 g/l) a pak 150 ml směsi stejných objemových dílů etheru petrolejového R3 a etheru R, kterými byla promyta baňka. Protřepává se 1 min. Po dokonalém oddělení se postupně odstraní spodní vrstva a horní vrstva se protřepe nejprve 50 ml roztoku hydroxidu draselného R (30 g/l) v roztoku ethanolu R 10% (V/V) a pak třikrát 50 ml roztoku chloridu sodného R (10 g/l). Horní vrstva se zfiltruje přes 5 g síranu sodného bezvodého R do 250ml baňky vhodné pro odpařování za sníženého tlaku (rotační vakuová odparka). Nálevka se promyje 10 ml čerstvě připravené extrakční směsi. Promývací tekutina a horní vrstvy se spojí a odpaří se za sníženého tlaku při teplotě nepřevyšující 30 °C, zbytek po odpaření se převrství dusíkem R. Rozpouštědla se mohou odpařit i v proudu dusíku R při teplotě nepřevyšující 30 °C. Zbytek se rozpustí v 2-propanolu R, převede se do odměrné baňky a zředí se 2-propanolem R na 25 ml, je-li třeba opatrně se zahřeje v ultrazvukové lázni (velký podíl bílého zbytku tvoří cholesterol, který představuje přibližně 50 % nezmýdelnitelných látek rybího oleje). Porovnávací roztok (a). Připraví se roztok retinylacetatu CRL v 2-propanolu R1 tak, aby 1 ml obsahoval asi 1000 m.j. all-trans-retinolu.

účinné od 1. 1. 2000Přesná koncentrace porovnávacího roztoku (a) se určí absorpční spektrofotometru v ultrafialové oblasti (2.2.25). Porovnávací roztok (a) se zředí 2-propanolem R1 tak, aby koncentrace vitaminu A byla 10 m.j. až 15 m.j. v mililitru a změří se absorbance při 326 nm ve zvlášť upravených kyvetách při tloušťce vrstvy 10 mm za použití 2-propanolu R1 jako kontrolní tekutiny.

účinné od 1. 1. 2000Obsah vitaminu A v porovnávacím roztoku (a) v mezinárodních jednotkách v mililitru se vypočítá s přihlédnutím k udanému obsahu retinylacetatu CRL ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000A₃₂₆ - absorbanci při 326 nm,
2. účinné od 1. 1. 2000V₂ - objem zředěného roztoku,
3. účinné od 1. 1. 2000V₁ - použitý objem porovnávacího roztoku (a),
4. účinné od 1. 1. 20001900 - přepočítávací faktor pro specifickou absorbanci retinylacetatu CRL v mezinárodních jednotkách.

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (b). Připraví se způsobem uvedeným v odstavci Zkoušený roztok. Místo zkoušené látky se použijí 2,00 ml porovnávacího roztoku (a).

účinné od 1. 1. 2000Přesná koncentrace porovnávacího roztoku (b) se určí absorpční spektrofotometru v ultrafialové oblasti (2.2.25). Porovnávací roztok (b) se zředí 2-propanolem R1 tak, aby koncentrace all-trans-retinolu v roztoku byla 1Om.j. až 15 m.j. v mililitru a změří se absorbance při 325 nm ve zvlášť upravených kyvetách při tloušťce vrstvy 10 mm za použití 2-propanolu R1 jako kontrolní tekutiny.

účinné od 1. 1. 2000Obsah all-trans-retinolu v porovnávacím roztoku (b) v mezinárodních jednotkách v mililitru se vypočítá ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000A₃₂₅ - absorbanci při 325 nm,
2. účinné od 1. 1. 2000V₃ - objem zředěného roztoku,
3. účinné od 1. 1. 2000V₄ - použitý objem porovnávacího roztoku (b),
4. účinné od 1. 1. 20001830 - přepočítávací faktor pro specifickou absorbanci all-trans-retinolu v mezinárodních jednotkách.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro chromatografii R (5 μm až 10 μm),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze, která je směsí objemových dílů vody R a methanolu R (3 + 97), při průtokové rychlosti 1 ml/min,
3. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 325 nm,
4. účinné od 1. 1. 2000- injektorové smyčky (10 μl),
5. účinné od 1. 1. 2000- elektronického integrátoru.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se třikrát zkoušený roztok a porovnávací roztok (b). Retenční čas all-trans-retinolu je (5 ± 1) min.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušku lze hodnotit, jestliže:

1. účinné od 1. 1. 2000- na chromatogramu zkoušeného roztoku je pík odpovídající all-trans-retinolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b),
2. účinné od 1. 1. 2000- při použití metody standardního přídavku ke zkoušenému roztoku je návratnost retinylacetatu CRL nejméně 95 %,
3. účinné od 1. 1. 2000- návratnost all-trans-retinolu v porovnávacím roztoku (b) určená přímou absorpční spektrofotometru je větší než 95 %.

účinné od 1. 1. 2000Obsah vitaminu A se vypočítá ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000A₁ - plochu píku all-trans-retinolu na chromatogramu zkoušeného roztoku,
2. účinné od 1. 1. 2000A₂ - plochu píku all-trans-retinolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b),
3. účinné od 1. 1. 2000C - koncentraci retinylacetatu CRL v porovnávacím roztoku (a) před zmýdelněním, v mezinárodních jednotkách v mililitru (= 1000 m.j. v mililitru),
4. účinné od 1. 1. 2000V - použitý objem porovnávacího roztoku (a) (2,00 ml),
5. účinné od 1. 1. 2000m - hmotnost zkoušené látky ve zkoušeném roztoku v gramech (2,00 g).

účinné od 1. 1. 2000Vitamin D₃. Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).

účinné od 1. 1. 2000Zkouška se provádí co nejrychleji, za ochrany před aktinickým světlem a vzduchem.

účinné od 1. 1. 2000Roztok vnitřního standardu. 0,50 mg ergokalciferolu CRL se rozpustí ve 100 ml ethanolu R.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (a). 4,00 g se v baňce s kulatým dnem smíchají s 5 ml čerstvě připraveného roztoku kyseliny askorbové R (100 g/l), 10 ml čerstvě připraveného roztoku hydroxidu draselného R (800 g/l) a 100 ml ethanolu R. Vaří se 30 min pod zpětným chladičem na vodní lázni, pak se přidá 100 ml roztoku chloridu sodného R (10 g/l) a ochladí se na pokojovou teplotu. Roztok se převede do 500ml dělicí nálevky spolu s asi 75 ml roztoku chloridu sodného R (10 g/l) a pak 150 ml směsi stejných objemových dílů etheru petrolejového R3 a etheru R, kterými byla promyta baňka, a 1 min se protřepává. Po dokonalém oddělení se spodní vrstva odstraní, horní vrstva se protřepe nejprve 50 ml roztoku hydroxidu draselného R (30 g/l) v roztoku ethanolu R 10% (V/V) a pak třikrát 50 ml roztoku chloridu sodného R (10 g/l). Horní vrstva se zfiltruje přes 5 g síranu sodného bezvodého R do 250ml baňky vhodné pro odpařování za sníženého tlaku (vakuová odparka). Nálevka se promyje 10 ml čerstvě připravené extrakční směsi, promývací tekutina a horní vrstvy se spojí a odpaří se za sníženého tlaku při teplotě nepřevyšující 30 °C; zbytek po odpaření se převrství dusíkem R. Rozpouštědla se mohou opatrně odpařit i v proudu dusíku R při teplotě nepřevyšující 30 °C. Zbytek se rozpustí v 1,5 ml mobilní fáze, kterou je směs objemových dílů isoamylalkoholu R v hexanu R (1,6 + 98,4), je-li třeba opatrně se zahřeje v ultrazvukové lázni (velký podíl bílého zbytku tvoří cholesterol, který představuje asi 50 % nezmýdelnitelných látek rybího oleje).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok (b). 4,00 g se smíchají se 2,0 ml roztoku vnitřního standardu a dále se postupuje způsobem uvedeným v odstavci Zkoušený roztok (a).

účinné od 1. 1. 2000Porovnávací roztok (a). 0,50 mg cholekalciferolu CRL se rozpustí ve 100,0 ml ethanolu R. Porovnávací roztok (b). V baňce s kulatým dnem se smíchají 2,0 ml porovnávacího roztoku (a) a 2,0 ml roztoku vnitřního standardu a dále se postupuje způsobem uvedeným v odstavci Zkoušený roztok (a).

účinné od 1. 1. 2000Čištění

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem kyansilanizovaným pro chromatografii R (10 μm),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze, která je směsí objemových dílů isoamylalkoholu R a hexanu R (1,6 + 98,4), při průtokové rychlosti 1,1 ml/min,
3. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 265 nm.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se 350 μl porovnávacího roztoku (b). Eluát se jímá 2 min před a 2 min po retenčním času odpovídajícím cholekalciferolu do zkumavky se zábrusem, která obsahuje 1 ml roztoku butylhydroxytoluenu R (1 g/l) v hexanu R. Postup se opakuje se zkoušeným roztokem (a) a zkoušeným roztokem (b). Eluáty získané z porovnávacího roztoku (b), zkoušeného roztoku(a) a zkoušeného roztoku (b) se odděleně odpaří do sucha v mírném proudu dusíku R při teplotě nepřevyšující 30 °C. Každý zbytek se rozpustí odděleně v 1,5 ml acetonitrilu R.

účinné od 1. 1. 2000Stanovení

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- nerezové ocelové kolony délky 0,15 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro chromatografii R (5 μm),
2. účinné od 1. 1. 2000- mobilní fáze, která je směsí objemových dílů kyseliny fosforečné R a roztoku acetonitrilu R 96% (V/V) (0,2 + 99,8), při průtokové rychlosti 1 ml/min,
3. účinné od 1. 1. 2000- spektrofotometrického detektoru, 265 nm.

účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se dvakrát nejvýše 200 μl každého ze tří roztoků uvedených v odstavci Čištění.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušku lze hodnotit jestliže:

1. účinné od 1. 1. 2000- na chromatogramu porovnávacího roztoku (b) je rozlišení mezi píky ergokalciferolu a cholekalciferolu nejméně 1,4,
2. účinné od 1. 1. 2000- při použití metody standardního přídavku ke zkoušenému roztoku (a) je návratnost cholekalciferolu CRL nejméně 95 %, vztaženo na vnitřní standard.

účinné od 1. 1. 2000Obsah vitaminu D₃ v mezinárodních jednotkách v gramu zkoušené látky, s přihlédnutím k udanému obsahu cholekalciferolu CRL, se vypočítá ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000m₁ - navážku zkoušené látky ve zkoušeném roztoku (b) v gramech,
2. účinné od 1. 1. 2000m₂ - celkovou hmotnost cholekalciferolu CRL použitého k přípravě porovnávacího roztoku (a) v mikrogramech (500 μg),
3. účinné od 1. 1. 2000A₁ - plochu (nebo výšku) píku cholekalciferolu na chromatogramu zkoušeného roztoku (a),
4. účinné od 1. 1. 2000A₂ - plochu (nebo výšku) píku cholekalciferolu na chromatogramu zkoušeného roztoku (b),
5. účinné od 1. 1. 2000A₃ - plochu (nebo výšku) píku ergokalciferolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b),
6. účinné od 1. 1. 2000A₄ - plochu (nebo výšku) píku ergokalciferolu na chromatogramu zkoušeného roztoku (b),
7. účinné od 1. 1. 2000A₅ - plochu (nebo výšku) případného píku na chromatogramu zkoušeného roztoku (a), jehož retenční čas odpovídá ergokalciferolu a který se eluuje současně s ergokalciferolem zkoušeného roztoku (b),
8. účinné od 1. 1. 2000A₆ - plochu (nebo výšku) píku cholekalciferolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b),
9. účinné od 1. 1. 2000V₁ - celkový objem porovnávacího roztoku (a) (100 ml),
10. účinné od 1. 1. 2000V₂ - objem porovnávacího roztoku (a) použitý k přípravě porovnávacího roztoku (b) (2,0 ml).

účinné od 1. 1. 2000Uchovávání

účinné od 1. 1. 2000Pod inertním plynem ve vzduchotěsných, zcela naplněných obalech, chráněn před světlem.

účinné od 1. 1. 2000Po otevření obalu se olej spotřebuje co nejrychleji; nespotřebovaný olej by měl být uchováván pod inertním plynem.

účinné od 1. 1. 2000Označování

účinné od 1. 1. 2000V označení na obalu se uvede:

1. účinné od 1. 1. 2000- název a množství přidaného antioxidantu, byl-li přidán,
2. účinné od 1. 1. 2000- počet mezinárodních jednotek vitaminu A,
3. účinné od 1. 1. 2000- počet mezinárodních jednotek vitaminu D₃.

účinné od 1. 1. 2000Jecoris aselli oleum (typus B)

účinné od 1. 1. 2000Rybí olej (typ B)

účinné od 1. 1. 2000Synonymum. Oleum jecoris aselli

účinné od 1. 1. 2000Je to čištěný olej získaný z čerstvých jater druhu Gadus morhua L. a z jiných druhů čeledi Gadidae, pevné látky jsou odstraněny ochlazením a filtrací. Obsahuje 600 m.j. (180 μg) až 2500m.j. (750 μg) vitaminu A a 60 m.j. (1,5 μg) až 250 m.j. (6,25 μg) vitaminu D₃ v gramu.

účinné od 1. 1. 2000Oprávněná autorita může povolit přísadu přípustných antioxidantů v předepsaném množství.

účinné od 1. 1. 2000Vlastnosti

účinné od 1. 1. 2000Čirá nažloutlá viskózní tekutina. Je prakticky nerozpustný ve vodě, těžce rozpustný v lihu 96%, mísitelný s etherem petrolejovým.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky totožnosti

účinné od 1. 1. 2000Základní sestava zkoušek: A, B a C.

účinné od 1. 1. 2000Alternativní sestava zkoušek: C a D, viz Obecné zásady (1.2).

1. účinné od 1. 1. 2000A. Zkouška Vitamin A, metoda A, viz Stanovení obsahu, je zároveň zkouškou totožnosti. Zkoušený roztok vykazuje maximum (2.2.25) při (325 ± 2) nm.

   účinné od 1. 1. 2000Zkouška Vitamin A, metoda B, viz Stanovení obsahu, je zároveň zkouškou totožnosti. Na chromatogramu zkoušeného roztoku je pík odpovídající píku all-trans-retinolu na chromatogramu porovnávacího roztoku.

1. účinné od 1. 1. 2000B. Zkouška Vitamin D₃, viz Stanovení obsahuje zároveň zkouškou totožnosti. Na chromatogramu zkoušeného roztoku (a) je pík odpovídající píku cholekalciferolu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b).
2. účinné od 1. 1. 2000C. Zkouška Podíl mastných kyselin, viz Zkoušky na čistotu, je zároveň zkouškou totožnosti.
3. účinné od 1. 1. 2000D. K 0,1 g se přidá 0,5 ml chloroformu R a 1 ml chloridu antimonitého RS a protřepe se; do asi 10 s vznikne tmavě modré zbarvení.

účinné od 1. 1. 2000Zkoušky na čistotu

účinné od 1. 1. 2000Barva. Zkoušená látka není zbarvena intenzivněji (2.2.2., Metoda II) než porovnávací roztok připravený takto: ke 3,0 ml základního červeného roztoku se přidá 25,0 ml základního žlutého roztoku a zředí se roztokem kyseliny chlorovodíkové R (10 g/l) na 50,0 ml.

účinné od 1. 1. 2000Relativní hustota (2.2.5). 0,917 až 0,930.

účinné od 1. 1. 2000Index lomu (2.2.6). 1,477 až 1,484.

účinné od 1. 1. 2000Číslo kyselosti (2.5.1). Nejvýše 2,0; stanoví se s 5,0 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Číslo jodové (2.5.4). 150 až 180.

účinné od 1. 1. 2000Číslo peroxidové (2.5.5). Nejvýše 10,0.

účinné od 1. 1. 2000Nezmýdelnitelné látky (2.5.7). Nejvýše 1,5 %; stanoví se s 5,0 g zkoušené látky.

účinné od 1. 1. 2000Stearin. 10 ml se nechá stát 3 h ve vodě s ledem; olej zůstane čirý.

účinné od 1. 1. 2000Provede se plynová chromatografie (2.2.28).

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. Asi 0,45 g se převede do 10ml odměmé baňky, rozpustí se v hexanu R, který obsahuje 50 mg butylhydroxytoluenu R v 1 litru a zředí se stejným rozpouštědlem na 10,0 ml. 2,0 ml tohoto roztoku se převedou do křemenné zkumavky a rozpouštědlo se opatrně odpaří v proudu dusíku R. Přidá se 1,5 ml roztoku hydroxidu sodného R (20 g/l) v methanolu R, převrství se dusíkem R, zkumavka se těsně uzavře zátkou s polytetrafluoroethylenovým těsněním, obsah zkumavky se promíchá a zahřívá se 7 min ve vodní lázni. Po ochlazení se smíchá se 2 ml roztoku chloridu boritého v methanolu RS, roztok se převrství dusíkem R, zkumavka se těsně uzavře, promíchá se a zahřívá se 30 min ve vodní lázni. Pak se ochladí na 40 °C až 50 °C, přidá se 1 ml trimethylpentanu R, zkumavka se uzavře a obsah se intenzivně protřepává nejméně 30 s. Pak se okamžitě přidá 5 ml nasyceného roztoku chloridu sodného R, roztok se převrství dusíkem R, zkumavka se uzavře a protřepává se důkladně nejméně 15 s. Po oddělení vrstev se horní čirá vrstva převede do jiné zkumavky. Methanolová vrstva se protřepe ještě jednou 1 ml trimethylpentanu R a trimethylpentanové extrakty se spojí. Spojené extrakty se protřepou dvakrát 1 ml vody R a pak se vysuší síranem sodným bezvodým R. Připraví se vždy dva roztoky.

účinné od 1. 1. 2000Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:

1. účinné od 1. 1. 2000- křemenné kapilární kolony délky nejméně 30 m a vnitřního průměru 0,25 mm se stěnou pokrytou makrogolem 20 000 R (tloušťka vrstvy 0,25 pm),
2. účinné od 1. 1. 2000- vodíku pro chromatografii R nebo helia pro chromatografii R jako nosného plynu za použití zařízení pro odstranění kyslíku,
3. účinné od 1. 1. 2000- plamenoionizačního detektoru,
4. účinné od 1. 1. 2000- injektoru s děličem 1:200,
5. účinné od 1. 1. 2000- vhodného integrátoru.

   účinné od 1. 1. 2000Teplota kolony je 170 °C, pak se zvyšuje rychlostí 1 °C/min až na 225 °C, při níž se udržuje 20 min; teplota vstřikovacího prostoru je 250 °C a teplota detektoru je 280 °C.

   účinné od 1. 1. 2000Nastříkne se dvakrát 1 pl zkoušeného roztoku. Zkoušku lze hodnotit, jestliže:

1. účinné od 1. 1. 2000- patnáct nalezených mastných kyselin se shoduje s mastnými kyselinami na vzorovém chromatogramu viz obrázek č. 1,
2. účinné od 1. 1. 2000- po nástřiku směsi stejných množství methylpalmitatu R, methylstearatu R, methylarachidatu R a methylbehenatu R jsou plochy píků těchto látek v procentech: 24,4, 24,8, 25,2 a 25,6,
3. účinné od 1. 1. 2000- rozlišení mezi píky methyloleatu a methyl-cis-vakcenatu je nejméně 1,3 a dvojice píků odpovídajících methylgadoleatu a methylgongoatu je dostatečně rozdělená, aby bylo možné výše uvedené látky identifikovat a změřit plochy píků.

účinné od 1. 1. 2000Plocha píku v procentech pro každý methylester mastné kyseliny se vypočítá ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000A_x - plochu píku mastné kyseliny x,
2. účinné od 1. 1. 2000A_t - součet ploch všech píků.

účinné od 1. 1. 2000Výpočet lze hodnotit, jestliže:

1. účinné od 1. 1. 2000- součet ploch všech píků zahrnuje pouze píky jednotlivých methylesterů mastných kyselin,
2. účinné od 1. 1. 2000- počet píků methylesterů mastných kyselin, jejichž plocha je větší než 0,05 % součtu ploch, činí nejméně dvacet čtyři,
3. účinné od 1. 1. 2000- dvacet čtyři největších píků methylesterů mastných kyselin tvoří více než 90 % součtu ploch, v elučním pořadí: 14:0, 15:0, 16:0, 16:1 n-7, 16:4 n-1, 18:0, 18:1 n-9, 18:1 n-7, 18:2 n-6, 18:3 n-3, 18:4 n-3, 20:1 n-11, 20:1 n-9, 20:1 n-7, 20:2 n-6, 20:4 n-6, 20:3 n-3, 20:4 n-3, 20:5 n-3, 22:1 n-11, 22:1 n-9, 21:5 n-3, 22:5 n-3 a 22:6 n-3).

účinné od 1. 1. 2000Následující vzor chromatogramu je pouze pro informaci a tato část není součástí požadavků článku.

účinné od 1. 1. 2000

účinné od 1. 1. 2000Obr. 1. Vzorový chromatogram ke zkoušce Podíl mastných kyselin

účinné od 1. 1. 2000Stanovení obsahu

účinné od 1. 1. 2000Zkouška se provede co nejrychleji, za ochrany před aktinickým světlem a vzduchem, oxidačními činidly, oxidačními katalyzátory (např. mědí a železem) a kyselinami.

účinné od 1. 1. 2000Vitamin A. Provede se absorpční spektrofotometrie v ultrafialové oblasti (2.2.25) (Metoda A). Jestliže výsledky Metody A nelze hodnotit, provede se kapalinová chromatografie (2.2.29) (Metoda B).

účinné od 1. 1. 2000Metoda A

účinné od 1. 1. 2000Zkoušený roztok. 1,00 g se v baňce s kulatým dnem smíchá se 3 ml čerstvě připraveného roztoku hydroxidu draselného R 50% a 30 ml ethanolu R. Vaří se 30 min pod zpětným chladičem v proudu dusíku R. Pak se rychle ochladí, přidá se 30 ml vody R a protřepe se čtyřikrát 50 ml etheru R, po posledním protřepání se dokonale oddělená spodní vrstva odstraní. Spojené horní vrstvy se protřepou čtyřikrát 50 ml vody R a odpaří se opatrně proudem dusíku R do sucha při teplotě nepřevyšující 30 °C nebo v rotační vakuové odparce za sníženého tlaku při teplotě nepřevyšující 30 °C. Zbytek se rozpustí v dostatečném množství 2-propanolu R1, tak aby koncentrace vitaminu A byla 10 m.j. až 15 m.j. v 1 mililitru roztoku.

účinné od 1. 1. 2000Měří se absorbance roztoku při 300 nm, 310 nm, 325 nm a 334 nm a při vlnové délce maximální absorpce vhodným spektrofotometrem ve zvlášť upravených kyvetách při tloušťce vrstvy 10 mm za použití 2-propanolu R1 jako kontrolní tekutiny.

účinné od 1. 1. 2000Obsah vitaminu A, počítáno jako all-trans-retinol, v mezinárodních jednotkách v 1 gramu zkoušené látky se vypočítá ze vztahu:

účinné od 1. 1. 2000v němž značí:

1. účinné od 1. 1. 2000A₃₂₅ - absorbanci při 325 nm,
2. účinné od 1. 1. 2000m - navážku zkoušené látky v gramech,
3. účinné od 1. 1. 2000V - celkový objem roztoku obsahujícího 10 m.j. až 15 m.j. vitaminu A v 1 mililitru,
4. účinné od 1. 1. 20001830 - přepočítávácí faktor pro specifickou absorbanci all-trans-retinolu v mezinárodních jednotkách.