Platné znění

Vyhláška Ministerstva životního prostředí, kterou se stanoví metody pro zjišťování fyzikálně-chemických a chemických vlastností chemických látek a chemických přípravků a vlastností chemických látek a chemických přípravků nebezpečných pro životní prostředí

účinné od 1. 1. 1999Porézní nádobka je vyrobena z porézní polyethylenové fólie (tloušťka 2 mm, maximální velikost pórů 95 mikronů) stočené do válce o průměru 14 cm s konickým dnem 45 °, obrázky 1 a 2 v příloze 2. Porézní nádobka je umístěna v nepropustné nádobě o průměru 15 cm zhotovené z vhodné umělé hmoty, která má nad konickou částí odtok ve výšce 17,2 cm, čímž je v zařízení vymezen objem 3 l. Na horním konci vnitřní nádoby je upevněn kruhový držák tak, že mezi vnější a vnitří nádobou je 0,5 cm odtoková mezera.

účinné od 1. 1. 1999Celé zařízení je umístěno do vodní lázně regulované termostatem. Vzduch je přiváděn na dno vnitřní nádoby pomocí vhodného rozvaděče.

účinné od 1. 1. 1999Nádoby (A) a (E) musí být vyrobeny ze skla nebo vhodné umělé hmoty a mají mít objem nejméně 24 l. Čerpadlo (B) umožňuje konstantní přítok odpadních vod do aerační nádoby. Může být použit jakýkoliv vhodný systém za předpokladu, že zaručuje stanovený přítok a koncentraci.

účinné od 1. 1. 1999K dispozici musí být zásoba dalších porézních nádobek jako náhrada za zanesené; zanesené nádobky se čistí namočením na 24 hodin do roztoku chlornanu sodného a promytím pitnou vodou.

  1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1. 2 Filtrace

    účinné od 1. 1. 1999Používají se membránové filtrační přístroje a membránové filtry (velikost pórů 0,45 µm). Membránový filtr nesmí uvolňovat uhlík ani nesmí adsorbovat zkoušenou látku při filtraci.

  1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1. 3 Odpadní voda

    účinné od 1. 1. 1999Může být použito buď vhodné syntetické médium nebo komunální odpadní voda.

    1. účinné od 1. 1. 1999Příklad syntetického média:
      1. účinné od 1. 1. 1999V 1 l pitné vody se rozpustí:
        účinné od 1. 1. 1999
        pepton160 mg,
        masový extrakt 110 mg,
        močovina30 mg,
        NaCl7 mg,
        CaCl2.2 H2O4 mg,
        MgSO4.7 H2O2 mg,
        K2HPO428 mg.
    1. účinné od 1. 1. 1999Komunální odpadní vody:
      1. účinné od 1. 1. 1999Odebírají se čerstvé každý den z přepadu mechanického stupně čistírny, která čistí převážně městské odpadní vody.
  1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1. 4 Zásobní roztok zkoušené látky

    účinné od 1. 1. 1999Připraví se např. 1% roztok zkoušené látky, který se bude přidávat do zkušební jednotky. Stanoví se koncentrace zkoušené látky a určí se příslušný objem zásobního roztoku, který je potřebné přidat k odpadní vodě nebo dalším čerpadlem přímo do zkušební jednotky, aby byla dosažena požadovaná zkušební koncentrace.

  1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1. 5 Inokulum
  2. účinné od 1. 1. 1999Poznámka: Je-li používána komunální odpadní voda není vhodné používání inokula s malou koncentrací bakterií, ale má se používat aktivovaný kal.

    3. účinné od 1. 1. 1999Mohou se používat inokula z různých zdrojů.

    1. účinné od 1. 1. 1999Příklady vhodného inokula:
      1. účinné od 1. 1. 1999a) Inokulum z odtoku biologické čistírny odpadních vod

        účinné od 1. 1. 1999Inokulum může být získáno z odtoku dobře fungující čistírny zpracovávající převážně komunální odpadní vody. Vzorek odtoku musí být v době mezi odběrem a použitím uchován v aerobních podmínkách. Inokulum se připraví filtrací vzorku vody přes hrubý filtr, prvních 200 ml filtrátu se vyleje. Až do okamžiku použití se filtrát uchovává v aerobních podmínkách. Inokulum musí být použito ve stejný den kdy bylo připraveno. K inokulaci se užívá nejméně 3 ml.

      1. účinné od 1. 1. 1999b) Směsné inokulum
        1. účinné od 1. 1. 1999Inokulum odebrané z odtoku čistírny:
          1. účinné od 1. 1. 1999Viz předchozí popis.
        1. účinné od 1. 1. 1999Inokulum z půdy:
          1. účinné od 1. 1. 1999100 g zahradní zeminy (úrodná, nesterilní zemina) se suspenduje v 1 l nechlórované pitné vody (nevhodné jsou zeminy s vysokým obsahem jílu, písku a humusu). Po zamíchání se nechá suspenze 30 minut dekantovat. Kapalná fáze se přefiltruje, prvních 200 ml se vyleje. Filtrát se ihned provzdušňuje až do okamžiku použití. Inokulum je možné použít pouze ten den, kdy bylo připraveno.
        1. účinné od 1. 1. 1999Inokulum z povrchové vody:
          1. účinné od 1. 1. 1999Další díl směsného inokula se získává z mesosaprobních povrchovým vod. Odebraný vzorek se filtruje, prvních 200 ml se vyleje. Až do okamžiku použití se filtrát udržuje v aerobních pdomínkách. Inokulum musí být použito pouze ten den, kdy bylo připraveno.
          2. účinné od 1. 1. 1999Směsné inokulum se získá smísením a dobrým promícháním stejných objemových dílů všech tří dílčích inokulí. K očkování se používají nejméně 3 ml směsného roztoku.
      1. účinné od 1. 1. 1999c) Inokulum z aktivovaného kalu

        účinné od 1. 1. 1999Používá se aktivovaný kal (s obsahem suspendovaných pevných částic do 2,5 g/l) odebraný z aerační nádrže čistírny komunálních odpadních vod.

  1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 2 Postup

    účinné od 1. 1. 1999Zkouška se provádí při laboratorní teplotě, která se má udržovat mezi 18 - 25 °C.

    účinné od 1. 1. 1999Zkouška může být event. prováděna při nižších teplotách (do 10 °C). Pokud se zkoušená látka za těchto podmínek rozkládá, nejsou zapotřebí žádná další měření. Jestliže však při nižší teplotě rozkládána není, musí být zkouška opakována při teplotě 18 - 25 °C.

    1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 2. 1 Fáze zapracování: tvorba kalu/stabilizace kalu

      účinné od 1. 1. 1999Fází růstu/stabilizace kalu je období, během kterého dochází za provozních podmínek k ustálení koncentrace aktivovaného kalu a funkce zkušební jednotky

      účinné od 1. 1. 1999Rozběhová fáze začíná první vsádkou zkoušené látky a končí dobou, kdy naměřený úbytek zkoušené látky dosáhne relativně konstantní hodnoty. Tato fáze by neměl trvat déle než 6 týdnů.

      účinné od 1. 1. 1999Hodnotící fáze je doba trvající 3 týdny od okamžiku kdy úbytek zkoušené látky dosáhl relativně konstantní, zpravidla vysoké, hodnoty. Pro látky, které se během šest týdnů trvající rozběhové fáze nerozkládají nebo jejich úbytek dosahuje nízkých hodnot se za vyhodnocovací fázi považuje období dalších tří následujících týdnů.

      účinné od 1. 1. 1999Na začátku zkušky se zkušební jednotka(y) naplní zkušební kapalinou s inokulem.

      účinné od 1. 1. 1999Zapne se provzdušňování a mamutka (při použití zkušebního zařízení podle OECD) a zapne se dávkovací zařízení.

      účinné od 1. 1. 1999Přítok odpadních vod bez zkoušené látky do aerační nádoby se udržuje na rychlosti 1 l.h-1 nebo 1/2 l.h-1; doba zdržení tak dosáhne 3 h nebo 6 h.

      účinné od 1. 1. 1999Intenzita provzdušňování musí být regulována tak, aby se udržoval obsah aerační nádoby ve vznosu a obsah rozpuštěného kyslíku neklesl pod hodnotu 2 mg.l-1.

      účinné od 1. 1. 1999Pěnění směsi se zabraňuje vhodnými prostředky, které neinhibují kal.

      účinné od 1. 1. 1999Kal, který se shromažďuje v horní části aerační nádoby a u průkazné zkoušky OECD na dně sedimentační nádoby a v cirkulačním okruhu musí být alespoň jednou za den vracen do matečné suspenze setřením nebo jiným vhodným způsobem.

      účinné od 1. 1. 1999Jestliže kal špatně sedimentuje lze zvýšit jeho hustotu přídavkem 2 ml 5% roztoku chloridu železitého. Přídavek je možné opakovat podle potřeby.

      účinné od 1. 1. 1999Odtok ze sedimentační nádrže se shromažďuje v nádobách E nebo F po dobu 20 - 24 hod. Před odebráním vzorku se směs důkladně promíchá. Nádoby E a F se musí pečlivě čistit.

      účinné od 1. 1. 1999Pro potřeby sledování účinnosti procesu a pro potřeby jeho řízení sestanoví nejméně dvakrát týdně CHSK nebo DOC zfiltrovaného průměrného vzorku výtoku ze zařízení a filtrované směsi dávkované do zařízení. K filtraci se používá membránový filtr s velikostí pórů 0,45 µm. Prvních 20 ml filtrátu se vyleje.

      účinné od 1. 1. 1999Pokud se rozkladné procesy ustálí, vyrovnají se i poklesy CHSK nebo DOC.

      účinné od 1. 1. 1999Sušina kalu v aerační nádobě se stanovuje dvakrát týdně (g.l-1).

      účinné od 1. 1. 1999Zařízení mohou být provozována dvěma způsoby: pokud je sušina kalu vyšší než 2,5 g.l-1 přebytečný kal se vypustí nebo se denně odebere z každé nádoby 500 ml suspenze, takže střední doba zdržení kalu v zařízení je 6 dní.

      účinné od 1. 1. 1999Jestliže jsou naměřené a hodnocené parametry (účinnost metody stanovená na základě úbytku CHSK nebo DOC, koncentrace kalu, schopnost sedimentace kalu, zákal kapalné fáze v sedimentační nádobě atd.) dvou jednotek dostatečně stabilní, může být zahájeno přidávání zkoušené látky dle kap. 1. 6. 2. 2 do nátoku do jedné z jednotek.

      účinné od 1. 1. 1999Alternativně může být zkoušená látka přidávána na začátku fáze růstu kalu (1. 6. 2. 1), zvlášť tehdy, když je jako inokulum používán aktivovaný kal.

    1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 2. 2 Pracovní postup

      účinné od 1. 1. 1999Za dodržování podmínek pro rozběhovou fázi se do přítoku do zkušebního zařízení přidává zásobní roztok zkoušené látky (cca 1 %), aby obsah DOC v suspenzi byl v rozmezí 10 - 20 mg.l-1 nebo CHSK 40 mg.l-1.

      účinné od 1. 1. 1999Zásobní roztok se buď denně přimíchává do odpadní vody nebo se přivádí pomocí čerpadla přímo do suspenze. Koncentrace se postupně zvyšuje až na požadovanou hodnotu. Vyzkoušeny mohou být i vyšší koncentrace než udává předchozí odstavec, pokud nemá zkoušená látka na aktivovaný kal toxické účinky.

      účinné od 1. 1. 1999Do kontrolní jednotky se dávkuje pouze odpadní voda bez zkoušené látky. Z odtoku se odebírají vzorky pro analýzu a filtrují se na membránovém filtru s velikostí pórů 0,45 µm. Prvních 20 ml filtrátu se vylévá.

      účinné od 1. 1. 1999Filtráty vzorků musí být analyzovány v den odběru nebo musí být konzerovány (např. přídavkem 0,05 ml 1% chloridu rtuťnatého na 10 ml filtrátu, uložením na 24 h při teplotě 2 - 4 °C nebo při -18 °C na delší dobu).

      účinné od 1. 1. 1999Doba trvání rozběhové fáze od okamžiku přídavku zkoušené látky by neměla překročit 6 týdnů. Vyhodnocovací fáze by neměla být kratší než 3 týdny, aby bylo možné provést 14 - 20 stanovení nutných k vyhodnocení zkoušky.

      1. účinné od 1. 1. 1999Spřažená zařízení
        1. účinné od 1. 1. 1999Zařízení jsou spřažena tak, že je mezi nimi 1x denně vyměňováno 1,5 l suspenze (včetně kalu) z aeračních nádob. Dochází-li k silné adsorbci zkoušené látky, odebere se 1,5 l kapalné fáze ze sedimentační nádoby a přidává se do aerační nádoby druhého zařízení.
    1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 2. 3 Analytika
      1. účinné od 1. 1. 1999Ke sledování chování zkoušené látky se používají dvě metody stanovení:
        1. účinné od 1. 1. 1999DOC a CHSK.
        2. účinné od 1. 1. 1999Hodnoty DOC se stanoví dvakrát pomocí analyzátoru uhlíku a CHSK se stanoví podle literatury (2).
      1. účinné od 1. 1. 1999Specifická analýza
        1. účinné od 1. 1. 1999Koncentrace zkoušené látky se stanoví vhodnou analytickou metodou. Je-li to možné, stanoví se zvlášť množství látky adsorbované na aktivovaný kal.
  1. účinné od 1. 1. 19992 DATA A VYHODNOCENÍ
    1. účinné od 1. 1. 19992.1 SPŘAŽENÁ ZAŘÍZENÍ

      účinné od 1. 1. 1999Pokud je používáno spřažené zařízení, počítá se denně stupeň odstranění, DR, postupem podle 1. 2. 1.

      účinné od 1. 1. 1999Tyto denní hodnoty se opraví na hodnotu Drc, zohledněním přenosu materiálu při očkování. Tento výpočet se provádí dle rovnice (2) pro střední dobu prodlení 3 hodiny a podle rovnice (3) pro střední dobu prodlení 6 hodin.

      účinné od 1. 1. 1999 (2)

      účinné od 1. 1. 1999 (3)

      účinné od 1. 1. 1999Ze získaných hodnot se vypočítá jejich průměr a dále standardní odchylka podle rovnice (4)

      účinné od 1. 1. 1999 (4)

      1. účinné od 1. 1. 1999kde:
        1. účinné od 1. 1. 1999sDRc = standardní odchylka,
        2. účinné od 1. 1. 1999
        3. účinné od 1. 1. 1999n = počet stanovení.
      1. účinné od 1. 1. 1999Odlehlé hodnoty DRc se eliminují vhodnou statistickou metodou, např. Nalimovou metodou (6) pro 95% hladinu významnosti, průměr a standardní odchylka se potom vypočtou s vyloučením odlehých hodnot Drc:
        1. účinné od 1. 1. 1999Výsledek se vjádří dle (5):

          účinné od 1. 1. 1999 (5)

          1. účinné od 1. 1. 1999kde
            1. účinné od 1. 1. 1999tn - 1; α = tabulková hodnota t pro n dvojic hodnot e a Eo a statistickou mez spolehlivosti P (P=1-α), kde P = 95% (1).

        účinné od 1. 1. 1999Výsledkem je průměr s udanými mezemi tolerance pro 95% hladinou významnosti případně s udanou standardní odchylkou, počtem dat hodnot DRc bez odlehlých hodnot a počtem odlehlých hodnot.

        1. účinné od 1. 1. 1999Např.
          1. účinné od 1. 1. 1999DRc = 98,6 ± 2,3% úbytku DOC,
          2. účinné od 1. 1. 1999s = 4,65% úbytku DOC,
          3. účinné od 1. 1. 1999n = 18,
          4. účinné od 1. 1. 1999x = počet odlehlých hodnot.
    1. účinné od 1. 1. 19992. 2 NESPŘAŽENÁ ZAŘÍZENÍ
      1. účinné od 1. 1. 1999Provozní výkon zařízení může být ověřen následovně:

        účinné od 1. 1. 1999

      účinné od 1. 1. 1999Vynášením denně naměřených úbytků do grafu se zdůrazní všechny trendy, např. adaptace.

      1. účinné od 1. 1. 19992. 2. 1 Využití stanovení CHSK/DOC

        účinné od 1. 1. 1999Z denně naměřených hodnot se podle kap. 1. 2. 1 vypočítá procentuální úbytek DR.

        1. účinné od 1. 1. 1999Z řady hodnot DR se spočítá jejich průměr a podle rovnice (6) standardní odchylka:

          účinné od 1. 1. 1999 (6)

          1. účinné od 1. 1. 1999kde
            1. účinné od 1. 1. 1999sDR = standardní odchylka hodnot Dri,
            2. účinné od 1. 1. 1999
            3. účinné od 1. 1. 1999n = počet stanovení.

        účinné od 1. 1. 1999Odlehlé hodnoty DR se eliminují vhodnou statistickou metodou např. podle Nalimova (6) při 95% hladině významnosti, střední hodnota a standardní odchylka jsou potom znovu vypočítány s vyloučením odlehlých hodnot DR.

        1. účinné od 1. 1. 1999Výsledná hodnota se počítá dle rovnice (7)

          účinné od 1. 1. 1999 (7)

          1. účinné od 1. 1. 1999kde
            1. účinné od 1. 1. 1999tn - 1; α - tabulková hodnota t pro n dvojic hodnot e a Eo a statistickou n mez spolehlivosti P (P=1-α), kde P = 95% (l).

        účinné od 1. 1. 1999Výsledkem je průměr s mezemi tolerance při 95% hladině významnosti s udanou standardní odchylkou, počtem dat hodnot DR bez odlehlých hodnot a počtem odlehlých hodnot.

        1. účinné od 1. 1. 1999Např.:
          1. účinné od 1. 1. 1999Dr = (98,6 ± 2,3%) úbytku DOC,
          2. účinné od 1. 1. 1999s = 4,65% úbytku DOC,
          3. účinné od 1. 1. 1999n = 18,
          4. účinné od 1. 1. 1999x = počet odlehlých hodnot.
      1. účinné od 1. 1. 19992. 2. 2 Použití výsledků specifické analýzy

        účinné od 1. 1. 1999Odstranění zkoušené látky z vodné fáze (Rw) v % se počítá podle 1. 2. 2.

  1. účinné od 1. 1. 19993 ZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA
    1. účinné od 1. 1. 19993. 1 PROTOKOL O ZKOUŠCE
      1. účinné od 1. 1. 1999V protokolu o zkoušce by měly být uvedeny pokud je to možné následující údaje:
        1. účinné od 1. 1. 1999- provozní podmínky, které jsou zaznamenány do formuláře uvedeného v příloze č. 3 této metody;
        2. účinné od 1. 1. 1999- druh použitého zkušebního zařízení (zařízení pro průkaznou zkoušku OECD nebo zařízení s porézní nádobkou);
        3. účinné od 1. 1. 1999- způsob provozování zařízení: spřažená nebo nespřažená zařízení;
        4. účinné od 1. 1. 1999- druh odpadních vod: syntetické nebo komunální odpadní vody, u komunálních odpadních vod datum a místo odběru;
        5. účinné od 1. 1. 1999- druh inokula, datum a místo odběru;
        6. účinné od 1. 1. 1999- popis použitých analytických metod, pokud byly prováděny specifické analýzy;
        7. účinné od 1. 1. 1999- grafické vyjádření závislosti úbytku CHSK nebo DOC na čase ve fázi rozběhové a vyhodnocovací;
        8. účinné od 1. 1. 1999- výsledek stanovení obsahu zkoušené látky prostřednictvím CHSK nebo DOC v zásobním roztoku;
        9. účinné od 1. 1. 1999- při provádění specifické analýzy: grafické vyjádření procentuálního úbytku zkoušené látky z kapalné fáze během rozběhové a vyhodnocovací fáze v závislosti na čase;
        10. účinné od 1. 1. 1999- střední úbytek DOC nebo CHSK zkoušené látky a standardní odchylka výsledků získaných během vyhodnocovací fáze, kdy úbytek zkoušené látky je konstantní;
        11. účinné od 1. 1. 1999- grafické vyjádření koncentrace aktivovaného kalu v závislosti na čase;
        12. účinné od 1. 1. 1999- poznámky týkající se aktivovaného kalu (odstraňování přebytečného kalu ze zařízení, tvorba shluků, použití chloridu železitého atd.);
        13. účinné od 1. 1. 1999- proměřované koncentrace zkoušené látky;
        14. účinné od 1. 1. 1999- výsledky analýz kalu;
        15. účinné od 1. 1. 1999- všechny informace o zkoušené látce a o referenční látce, pokud byla použita;
        16. účinné od 1. 1. 1999- vědecké zdůvodnění všech odchylek a změn metody.
    1. účinné od 1. 1. 19993. 2 INTERPRETACE VÝSLEDKŮ

      účinné od 1. 1. 1999Příčinou nízké hodnoty úbytku zkoušené látky z vodné fáze může být inhibice mikroorganismů způsobená touto látkou. Projevuje se to především rozpouštěním a ztrátou kalu, zakalováním kapalné fáze a snížením účinnosti odstraňování CHSK nebo DOC v zařízení.

      účinné od 1. 1. 1999Někdy hraje roli fyzikálně-chemická adsorbce. Vztah mezi biologickým působením na látku a její fyzikálně-chemickou adsorpcí je možné rozlišit po odpovídající desorpci.

      účinné od 1. 1. 1999K rozlišení úplného nebo částečného biologického rozkladu od adsorbce je nutno provést další zkoušky.

      účinné od 1. 1. 1999Nabízí se zde více možností. Nejlepším postupem je použití kapalné fáze ze sedimentační nádoby jako inokula v některé ze zkoušek snadné biologické rozložitelnosti (nejlépe v respirometrické zkoušce).

      účinné od 1. 1. 1999Vysoké hodnoty úbytku DOC nebo CHSK jsou zpravidla způsobovány biologickým rozkladem, nízké hodnoty úbytku naproti tomu nelze odlišit od jiných mechanizmů odstranění látky. Pokud např. rozpustná sloučenina vykazuje stupeň adsorbce 98 % a denně je odstraňováno 10 % kalu, dochází až ke 40 % odstranění látky v tomto kalu. Je-li denně odstraňováno 30 % kalu, může eliminace na základě adsorbce a odstranění kalu stoupnout na 65 % (4):

      účinné od 1. 1. 1999Při používání specifických analýz je třeba brát na zřetel vliv struktury látky na specifickou analýzu. Úbytek látky stanovený specifickou analýzou nemůže být interpretován jako mineralizace látky.

  1. účinné od 1. 1. 19994 LITERATURA

    účinné od 1. 1. 1999(1) OECD, Paris 1981, Test Guideline 303 A, Decision of the Council C (81) 30 final.

    účinné od 1. 1. 1999(2) Annex V C9 Degradation Test - Chemical Oxygen Demand, Commission Directive 84/449/EEC,Official Journal of the European Communities, No L 251,19. 9. 1984).

    účinné od 1. 1. 1999(3) H. A. Painter and E. F. King, WRC Porous Pot method for asessing biodegradability. Technical report TR7O. June 1978, Water Research Center, Velká Británie.

    účinné od 1. 1. 1999(4) Wierich P. and Gerike P., The Fate of Soluble, Recalcitrant, and Absorging Compounds in Activated Sludge Plants, Ecotoxicology and Enviromental Safety, Vol 5, Nr. 2 - June 1981, str. 161 - 171.

    účinné od 1. 1. 1999(5) Council Directives 82/242/EEC und 82/243/EEC, Official Journal of the European Communities, No L109, 22. 4. 1982, amending Council Directives 73/404/EEC und 73/405/EEC on biodegradability of detergents, Official Journal of the European Communities, No L347, 17. 12. 1973.

    účinné od 1. 1. 1999(6) Streuli, H., Fehlerhafte Interpretation und Anwendung von Ausreissetest, insbesondere bei Rindversuchen zur Überprüfung analytisch - chemischer Untersuchungsmethoden, Fressenius - Zeitschrift für Analytische Chemie (1980), str. 406 - 408.

účinné od 1. 1. 1999

PŘÍLOHA 1

účinné od 1. 1. 1999

účinné od 1. 1. 1999Obrázek 1

účinné od 1. 1. 1999Obrázek
  • účinné od 1. 1. 1999A = zásobník
  • účinné od 1. 1. 1999B = dávkovací zařízení
  • účinné od 1. 1. 1999C = aerační komora (objem 3 litry)
  • účinné od 1. 1. 1999D = sedimentační nádoba
  • účinné od 1. 1. 1999E = mamutka
  • účinné od 1. 1. 1999F = zásobník na výtok
  • účinné od 1. 1. 1999G = aerátor
  • účinné od 1. 1. 1999H = průtokoměr (nepovinně)

    • účinné od 1. 1. 1999Obrázek 2

    účinné od 1. 1. 1999Obrázek
    účinné od 1. 1. 1999

    PŘÍLOHA 2

    účinné od 1. 1. 1999

    účinné od 1. 1. 1999Obrázek 1

    účinné od 1. 1. 1999Zařízení používané pro stanovení biologické rozložitelnosti

    účinné od 1. 1. 1999Obrázek
  • účinné od 1. 1. 1999A = zásobník
  • účinné od 1. 1. 1999E = zásobník na výtok
  • účinné od 1. 1. 1999B = dávkovací čerpadlo
  • účinné od 1. 1. 1999F = vzduchovací kámen
  • účinné od 1. 1. 1999C = porézní aerační nádobka
  • účinné od 1. 1. 1999G = rotametr
  • účinné od 1. 1. 1999D = vnější nepropustná nádoba

    • účinné od 1. 1. 1999Obrázek 2

    účinné od 1. 1. 1999Detaily třílitrové vzduchovací porézní nádobky

    účinné od 1. 1. 1999Obrázek
    účinné od 1. 1. 1999

    PŘÍLOHA 3

    účinné od 1. 1. 1999

    účinné od 1. 1. 1999Provozní podmínky simulační zkoušky s aktivovaným kalem

    účinné od 1. 1. 1999Označ v každé skupině

    1. účinné od 1. 1. 1999Zařízení:
      1. účinné od 1. 1. 1999průkazná zkouška OECD
      2. účinné od 1. 1. 1999zařízení s porézní nádobkou
    1. účinné od 1. 1. 1999Způsob provozu:
      1. účinné od 1. 1. 1999samostatná jednotka
      2. účinné od 1. 1. 1999spřažená zařízení
      3. účinné od 1. 1. 1999nespřažená zařízení
    1. účinné od 1. 1. 1999Přeočkování:
      1. účinné od 1. 1. 1999žádné
      2. účinné od 1. 1. 1999aktivovaným kalem
      3. účinné od 1. 1. 1999kapalnou fází vzniklou odsedimentováním
    1. účinné od 1. 1. 1999Střední doba zdržení:
      1. účinné od 1. 1. 19993 hodiny
      2. účinné od 1. 1. 19996 hodin
    1. účinné od 1. 1. 1999Živné médium:
      1. účinné od 1. 1. 1999komunální odpadní voda
      2. účinné od 1. 1. 1999syntetická odpadní voda
    1. účinné od 1. 1. 1999Inokulum:
      1. účinné od 1. 1. 1999z čistírny odpadních vod
      2. účinné od 1. 1. 1999směsné inokulum
      3. účinné od 1. 1. 1999aktivovaný kal
    1. účinné od 1. 1. 1999Přidávání zkoušené látky:
      1. účinné od 1. 1. 1999na začátku
      2. účinné od 1. 1. 1999postupně
      3. účinné od 1. 1. 1999po vytvoření kalu
    1. účinné od 1. 1. 1999Analýzy:
      1. účinné od 1. 1. 1999specifická
      2. účinné od 1. 1. 1999CHSK
      3. účinné od 1. 1. 1999DOC
    1. účinné od 1. 1. 1999XI BIOLOGICKÝ ROZKLAD - ZKOUŠKA INHIBICE DÝCHÁNÍ AKTIVOVANÉHO KALU
      1. účinné od 1. 1. 19991 METODA
        1. účinné od 1. 1. 19991. 1 ÚVOD

          účinné od 1. 1. 1999Popsaná metoda hodnotí vliv zkoušené látky na mikroorganizmy měřením intenzity jejich dýchání za definovaných podmínek v přítomnosti různých koncentrací zkoušené látky.

          účinné od 1. 1. 1999Účelem této metody je poskytnout rychlou vyhledávací metodu, kterou je možné určit látky, které mohou nepříznivě ovlivnit aerobní mikrobiální čistírny vod, a naznačit vhodné koncentrace zkoušených látek, které nejsou inhibující a které je možno použít ve zkouškách biologické rozložitelnosti.

          účinné od 1. 1. 1999Definitivní zkoušce může předcházet zkouška pro nalezení pracovní oblasti. Může poskytnout informace o oboru koncentrací, které je možné použít v hlavní zkoušce.

          účinné od 1. 1. 1999Do schématu zkoušky jsou zařazeny dvě kontroly, jedna na začátku a druhá na konci řady pokusů. Každou dávku aktivovaného kalu je také nutno kontrolovat s použitím referenční látky.

          účinné od 1. 1. 1999Tato metoda se nejsnáze aplikuje na látky, které díky své rozpustnosti a nízké těkavosti zůstávají ve vodě.

          účinné od 1. 1. 1999U látek s nízkou rozpustností v médiích používaných ve zkoušce může být nemožné stanovit EC50.

          účinné od 1. 1. 1999Pokud má zkoušená látka sklon k rozkladu oxidační fosforylací mohou výsledky založené na absorpci kyslíku vést k nesprávným závěrům,

          1. účinné od 1. 1. 1999Pro provedení zkoušky je užitečné znát následující informace:
            1. účinné od 1. 1. 1999- rozpustnost ve vodě,
            2. účinné od 1. 1. 1999- tenze par,
            3. účinné od 1. 1. 1999- strukturní vzorec,
            4. účinné od 1. 1. 1999- čistota zkoušené látky.
          1. účinné od 1. 1. 1999Doporučení:
            1. účinné od 1. 1. 1999Aktivovaný kal může obsahovat potenciálně patogenní organizmy a je třeba s ním zacházet opatrně.
        1. účinné od 1. 1. 19991. 2 DEFINICE A JEDNOTKY

          účinné od 1. 1. 1999Respirační rychlost je spotřeba kyslíku mikroorganizmy odpadních vod v aerobním kalu, obecně vyjádřená jako mg O2 na 1 mg kalu za hodinu.

          1. účinné od 1. 1. 1999Pro výpočet inhibičního účinku zkoušené látky při určité koncentraci se respirační rychlost vyjadřuje jako procento průměrné hodnoty dvou kontrolních respiračních rychlostí:

            účinné od 1. 1. 1999

            1. účinné od 1. 1. 1999kde:
              1. účinné od 1. 1. 1999Rs = rychlost spotřeby kyslíku při použité koncentraci zkoušené látky,
              2. účinné od 1. 1. 1999Rc1 = rychlost spotřeby kyslíku v kontrolní zkušce 1,
              3. účinné od 1. 1. 1999Rc2 = rychlost spotřeby kyslíku v kontrolní zkoušce 2.
              4. účinné od 1. 1. 1999EC50 v této zkoušce je koncentrace zkoušené látky, při které respirační rychlost činí 50 % hodnoty vycházející z kontrolní zkoušky za podmínek popsaných v této metodě.
        1. účinné od 1. 1. 19991. 3 REFERENČNÍ LÁTKY

          účinné od 1. 1. 1999Jako referenční látku se doporučuje používat známý inhibitor dýchání 3,5dichlorfenol. Ověřením EC50 u každé dávky aktivovaného kalu by mělo být zkontrolováno, že kal není abnormálně citlivý.

        1. účinné od 1. 1. 19991. 4 PRINCIP ZKUŠEBNÍ METODY

          účinné od 1. 1. 1999Rychlost dýchání aktivovaného kalu vyživovaného standardním množstvím syntetické odpadní vody se měří po době kontaktu 30 minut, 3 hodin nebo v obou časech. Měří se také rychlost dýchání téhož aktivovaného kalu v přítomnosti různých koncentrací zkoušené látky za jinak stejných podmínek. Inhibiční efekt zkoušené látky při určité koncentraci se vyjadřuje jako procento průměrné rychlosti dýchání ze dvou kontrolních pokusů. Hodnota EC50 se vypočítá ze stanovení při různých koncentracích.

        1. účinné od 1. 1. 19991. 5 KRITÉRIA KVALITY
          1. účinné od 1. 1. 1999Výsledky zkoušky jsou platné, jestliže:
            1. účinné od 1. 1. 1999- respirační rychlosti dvou kontrolních pokusů se od sebe liší nejvýše o 15 %,
            2. účinné od 1. 1. 1999- EC50 (pro 30 minut nebo pro 3 hodiny) 3,5-dichlorfenolu leží v přijatém rozmezí 5 - 30 mg.l-1.
        1. účinné od 1. 1. 19991. 6 POPIS ZKUŠEBNÍ METODY
          1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1 Činidla
            1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1. 1 Roztoky zkoušené látky

              účinné od 1. 1. 1999Roztoky zkoušené látky se připravují čerstvé na začátku studie s použitím zásobního roztoku. Použije-li se níže popsaný postup, je vhodná koncentrace zásobního roztoku 0,5 g.l-1.

            1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1. 2 Roztok kontrolní látky

              účinné od 1. 1. 1999Roztok 3,5-dichlorfenolu lze připravit například rozpuštěním 0,5 g 3,5-dichlorfenolu v 10 ml 1 M NaOH, zředěním destilovanou vodou přibližně na 30 ml, přidáním 0,5 M H2SO4 do bodu začínajícího srážení ( je třeba asi 8 ml 0,5 M H2SO4) a konečným doplněním směsi destilovanou vodou na 1 litr. pH musí potom ležet mezi 7 a 8.

            1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1. 3 Syntetická odpadní voda
              1. účinné od 1. 1. 1999Používaná syntetická odpadní voda se připraví rozpuštěním následujícího množství látek v 1 litru vody:
                1. účinné od 1. 1. 1999- 16 g peptonu,
                2. účinné od 1. 1. 1999- 11 g masového extraktu,
                3. účinné od 1. 1. 1999- 3 g močoviny,
                4. účinné od 1. 1. 1999- 0,7 g NaCl,
                5. účinné od 1. 1. 1999- 0,4 g CaCl2.2H2O,
                6. účinné od 1. 1. 1999- 0,2 g MgSO4.7H2O,
                7. účinné od 1. 1. 1999- 2,8 g K2HPO4.
            2. účinné od 1. 1. 1999Poznámka 1: Tato syntetická odpadní voda má stonásobnou koncentraci oproti vodě popsané v technické zprávě OECD „Návrh metody stanovení biologické rozložitelnosti povrchově aktivních látek používaných v syntetických detergentech“ (11.6.1976), s přídavkem monohydrogenfosforečnanu draselného.
            3. účinné od 1. 1. 1999Poznámka 2: Nepoužije-li se připravené médium ihned, je nutné je přechovávat v temnu při 0 - 4 °C ne déle než jeden týden za podmínek, které nezpůsobují žádné změny v jeho složení. Médium je také možné před uschováním sterilizovat, nebo je možné pepton a masový extrakt přidat krátce před provedením zkoušky. Před použitím je nutné médium důkladně promíchat a upravit pH.
          1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 2 Aparatura

            účinné od 1. 1. 1999Měřicí aparatura: Přesná konstrukce není podstatná. Musí však mít volný prostor nad kapalinou a sonda musí přesně zapadat do hrdla odměrné baňky.

            1. účinné od 1. 1. 1999Z běžného laboratorního vybavení je třeba zejména toto:
              1. účinné od 1. 1. 1999- měřicí přístroje,
              2. účinné od 1. 1. 1999- provzdušňovací zařízení,
              3. účinné od 1. 1. 1999- měřič pH a monitorovací zařízení,
              4. účinné od 1. 1. 1999- kyslíková elektroda.
          1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 3 Příprava inokula

            účinné od 1. 1. 1999Jako mikrobiální inokulum pro zkoušku se používá aktivovaný kal z čistírny odpadních vod čistící převážně domovní odpadní vody.

            účinné od 1. 1. 1999Je-li to nutné, je možné při dodání kalu do laboratoře odstranit hrubé částice krátkodobým usazením (např. 15 minut) a dekantovat horní vrstvu jemnějších tuhých částic pro použití. Alternativně je možné kal po několik sekund.promíchat.

            účinné od 1. 1. 1999Lze-li mimoto předpokládat, že je přítomna látka mající inhibiční účinek, je nutné kal promýt vodovodní vodou nebo izotonickým roztokem. Po zcentrifugování se roztok nad usazeninou dekantuje (tento postup se opakuje třikrát).

            účinné od 1. 1. 1999Malé množství kalu se zváží a vysuší. Z výsledku je možné vypočítat množství vlhkého kalu, které je nutné suspendovat ve vodě, aby se získal aktivovaný kal v oblasti koncentrací suspendovaných tuhých látek ve směsné kapalině mezi 2 a 4 g.l-1. Dodrží-li se níže doporučený postup získá se zkušební médium s koncentrací kalu 0,8 a 1,6 g.l-1.

            účinné od 1. 1. 1999Není-li možné kal použít v den kdy byl shromážděn přidá se ke každému litru aktivovaného kalu, připraveného tak, jak je popsáno výše, 50 ml syntetické odpadní vody, potom se provzdušňuje přes noc při 20 ± 2 °C. Poté se udržuje za provzdušňování pro použití během dne. Před použitím se zkontroluje pH a je-li třeba, upraví se na 6 - 8. Obsah suspendovaných tuhých látek ve směsné kapalině je třeba stanovit, jak je popsáno v předchozím odstavci.

            účinné od 1. 1. 1999Požaduje-li se použití stejné dávky kalu v následující dny (nejvýše po čtyři dny), přidává se na konci každého pracovního dne dalších 50 ml syntetické odpadní vody na litr kalu.

          1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 4 Provedení zkoušky
            účinné od 1. 1. 1999
            PŘÍLOHA 3 Provozní podmínky simulační zkoušky s aktivovaným kalem Označ v každé skupině
            Trvání/doba kontaktu: 30 minut a (nebo) 3 hodiny, během kterých probíhá provzdušňování
            Voda: Pitná voda (v případě potřeby zbavená chlóru)
            Přívod vzduchu:Čistý vzduch, prostý oleje. Průtok 0,1 - 1 l.min-1.
            Měřicí aparatura:Baňka s plochým dnem, jaká se používá pro stanovení BSK.
            Měřič obsahu kyslíku:Vhodná kyslíková elektroda, se zapisovačem.
            Živný roztok:Syntetická odpadní voda (viz výše).
            Zkoušená látka:Roztok zkoušené látky se připraví čerstvý na začátku zkoušky.
            Referenční látka:např. 3,5-dichlorfenol (nejméně tři koncentrace)
            Kontrolní zkouška:Naočkovaný vzorek bez zkoušené látky
            Teplota:20 ± 2 °C

            účinné od 1. 1. 1999Dále je uveden navržený experimentální postup, kterého je možné použít jak pro zkoušenou, tak pro referenční látku, pro dobu kontaktu tři hodiny:

            účinné od 1. 1. 1999Používá se několika nádob (např. jednolitrových kádinek).

            účinné od 1. 1. 1999Je třeba použít alespoň pět koncentrací, odstupňovaných o konstantní faktor nepřevyšující pokud možno 3,2.

            účinné od 1. 1. 1999V okamžiku „0“ se 16 ml syntetické odpadní vody doplní vodou na 300 ml. Přidá se 200 ml mikrobiálního inokula a výsledná směs (500 ml) se převede do první nádoby (první kontrola C1).

            účinné od 1. 1. 1999Nádoby, používané v pokusu, je nutné nepřetržitě provzdušňovat, aby bylo zaručeno, že koncentrace rozpuštěného kyslíku nepoklesne pod 2,5 mg.l-1 a aby těsně před měřením rychlosti dýchání činila koncentrace kyslíku přibližně 6,5 mg.l-1.

            účinné od 1. 1. 1999V okamžiku „15 minut“ (15 minut je libovolně zvolený, avšak vhodný interval) se opakuje totéž až na to, že se k 16 ml syntetické odpadní vody před doplněním vodou na 300 ml a přidáním mikrobiálního inokula na celkový objem 500 ml přidá 100 ml zásobního roztoku zkoušené látky. Tato směs se pak převede do druhé nádoby a provzdušňuje se jako výše. Tento postup se opakuje v 15-minutových intervalech s různými objemy zásobního roztoku zkoušené látky, čímž se získá řada nádob obsahujících různé koncentrace zkoušené látky. Nakonec se připraví druhá kontrolní nádoba.

            účinné od 1. 1. 1999Po třech hodinách se zaznamená pH, dobře promíchaný vzorek obsahu první nádoby se převede do měřicí aparatury a v době do 10 minut se změří rychlost dýchání.

            účinné od 1. 1. 1999Stanovení se opakuje u obsahu každé z nádob v 15minutových intervalech tak, že doba kontaktu v každé nádobě je tři hodiny.

            účinné od 1. 1. 1999Referenční látka se zkouší na každé dávce mikrobiálního inokula týmž způsobem.

            účinné od 1. 1. 1999Mají-li se měření provádět po 30 minutách kontaktu, je třeba použít jiného režimu (např. použití více než jednoho měřiče kyslíku).

            účinné od 1. 1. 1999Vyžaduje-li se měření chemické spotřeby kyslíku, připraví se další nádoby, obsahující zkoušenou látku, syntetickou odpadní vodu a čistou vodu, ale ne aktivovaný kal. Spotřeba kyslíku se měří a zaznamená po době provzdušňování 30 minut a (nebo) tři hodiny (doba kontaktu).

      1. účinné od 1. 1. 19992 VÝSLEDKY A VYHODNOCENÍ

        účinné od 1. 1. 1999Rychlost dýchání se vypočítá ze záznamu zapisovače mezi přibližně 6,5 mg.l-1 a 2,5 mg.l-1, nebo za desetiminutovou periodu, je-li rychlost dýchání nízká. Část respirační křivky, ze které se vyhodnocuje rychlost dýchání, musí být lineární.

        účinné od 1. 1. 1999Jestliže rychlosti dýchání v obou kontrolních pokusech neleží v rozmezí 15 % od sebe navzájem, nebo EC50 (za 30 minut nebo tři hodiny) referenční látky neleží v akceptovaném rozmezí (5 - 30 mg.l-1 pro 3,5-dichlorfenol), je zkouška neplatná a musí se opakovat.

        účinné od 1. 1. 1999Pro každou zkušenou koncentraci (viz bod 1. 2) se vypočte inhibice v %. Inhibice v % se vynese proti koncentraci na logaritmicko-normálním (nebo logaritmicko-pravděpodobnostním) papíru a odečte se hodnota EC50.

        účinné od 1. 1. 1999Standardními postupy je možné stanovit pro hodnoty EC50 95% meze spolehlivosti.

      1. účinné od 1. 1. 19993 ZPRÁVA
        1. účinné od 1. 1. 19993. 1 PROTOKOL O ZKOUŠCE
          1. účinné od 1. 1. 1999Je-li to možné, má protokol o zkoušce obsahovat tyto informace:
            1. účinné od 1. 1. 1999- zkoušená látka: chemické identifikační údaje,
            2. účinné od 1. 1. 1999- systém použitý při zkoušce: zdroj, koncentrace a veškerá předběžná úprava aktivovaného kalu,
            3. účinné od 1. 1. 1999- experimentální podmínky:
              1. účinné od 1. 1. 1999- pH reakční směsi před měřením respirace,
              2. účinné od 1. 1. 1999- teplota při zkoušce,
              3. účinné od 1. 1. 1999- doba trvání zkoušky,
              4. účinné od 1. 1. 1999- referenční látka a její změřená EC50,
              5. účinné od 1. 1. 1999- abiotická spotřeba kyslíku (pokud k ní dochází).
            1. účinné od 1. 1. 1999- výsledky:
              1. účinné od 1. 1. 1999- veškeré naměřené hodnoty,
              2. účinné od 1. 1. 1999- křivka inhibice a metoda výpočtu EC50,
              3. účinné od 1. 1. 1999- EC50 a je-li možné 95% meze spolehlivosti, EC20 a EC80,
              4. účinné od 1. 1. 1999- veškerá pozorování a veškeré odchylky od této zkušební metody, které mohly ovlivnit výsledek.
        1. účinné od 1. 1. 19993. 2 INTERPRETACE VÝSLEDKŮ

          účinné od 1. 1. 1999Hodnotu EC50 je třeba považovat pouze za orientační hodnotu pravděpodobné toxicity zkoušené látky buď při zpracování odpadních vod aktivovaným kalem, nebo pro mikroorganizmy v odpadních vodách, protože složité interakce, ke kterým dochází v životním prostředí, nelze přesně simulovat laboratorní zkouškou. Mimoto, zkoušené látky, které mohou mít inhibiční účinky na oxidaci amoniaku, mohou také způsobovat atypické inhibiční křivky. Proto je nutné interpretovat tyto křivky opatrně.

      1. účinné od 1. 1. 19994 LITERATURA

        účinné od 1. 1. 1999(1) International Standard ISO 8192-1986.

        účinné od 1. 1. 1999(2) Broecker, B., Zahn, R., Water Research 11, 1977, str. 165

        účinné od 1. 1. 1999(3) Brown, D., Hitz, H.R., Schaefer, L., Chemosphere 10, 1981, str. 245

        účinné od 1. 1. 1999(4) ETAD (Ecological and Toxicological Association of Dyestuffs Manufacturing Industries - Ekologická a toxikologická asociace průmyslu výroby barviv), Recommended Method No 103, také popsáno v:

        účinné od 1. 1. 1999(5) Robra, B., Wasser/Abwasser 117, 1976, str. 80

        účinné od 1. 1. 1999(6) Schefer, W., Textilveredlung 6, 1977, str. 247

        účinné od 1. 1. 1999(7) OECD, Paris, 1981, Test Guideline 209, Decision of the Council C(81) 30 final.

    1. účinné od 1. 1. 1999XII MODIFIKOVANÁ ZKOUŠKA SCAS
      1. účinné od 1. 1. 19991 METODA
        1. účinné od 1. 1. 19991.1 ÚVOD

          účinné od 1. 1. 1999Cílem této metody je hodnocení potenciální úplné biologické rozložitelnosti netěkavých organických látek rozpustných ve vodě, jsou-li vystaveny poměrně vysokým koncentracím mikroorganizmů po dlouhé časové období. Životaschopnost mikroorganizmů se udržuje po tuto dobu denními přídavky živin z usazené odpadní vody. (Pro potřebu během víkendů lze odpadní vodu přechovávat při 4 °C. Alternativně je možné použít syntetickou odpadní vodu podle potvrzující zkoušky OECD.)

          účinné od 1. 1. 1999Při interpretaci výsledků (viz 3. 2) je nutné brát v úvahu, že může docházet k fyzikálně-chemické adsorpci na suspendovaných tuhých látkách.

          účinné od 1. 1. 1999V důsledku dlouhé doby zdržení kapalné fáze (36 hodin) a průběžného přidávání živin nesimuluje zkouška podmínky existující v čistírně odpadních vod. Výsledky získané při pokusech s různými látkami ukazují, že zkouška má vysoký potenciál biologického rozkladu.

          účinné od 1. 1. 1999Podmínky poskytované zkouškou jsou vysoce příznivé pro výběr a adaptaci mikroorganizmů schopných rozkládat zkoušenou látku. (Postup je možné použít také k získávání aklimatizovaných inokulí pro použití v jiných zkouškách.)

          účinné od 1. 1. 1999V této metodě se používá k hodnocení výsledné biologické rozložitelnosti zkoušené látky hodnota koncentrace rozpuštěného organického uhlíku (DOC). DOC se doporučuje raději stanovit po okyselení a přečištění než jako rozdíl Ccelk.- Canorg..

          účinné od 1. 1. 1999Současné použití specifické analytické metody může umožnit určení primárního rozkladu látky (úbytek výchozí chemické struktury).

          1. účinné od 1. 1. 1999Metoda je použitelná pouze pro ty organické látky, které v koncentracích používaných ve zkoušce:
            1. účinné od 1. 1. 1999- jsou rozpustné ve vodě (alespoň 20 mg rozpuštěného organického uhlíku na litr),
            2. účinné od 1. 1. 1999- mají zanedbatelnou tenzi par,
            3. účinné od 1. 1. 1999- nepůsobí inhibičně na bakterie,
            4. účinné od 1. 1. 1999- významně se neadsorbují ve zkušebním systému,
            5. účinné od 1. 1. 1999- neztrácejí se ze zkoušeného roztoku pěněním.

          účinné od 1. 1. 1999Je nutné stanovit obsah organického uhlíku ve zkoušené látce.

          účinné od 1. 1. 1999Při interpretaci získaných výsledků, zejména v případech, kdy výsledky jsou nízké nebo marginální, jsou cenné informace o relativních podílech hlavních složek ve zkoušeném vzorku

          účinné od 1. 1. 1999Pro interpretaci nízkých výsledků a při volbě vhodné koncentrace při zkoušce mohou být užitečné informace o toxicitě látky pro mikroorganizmy.

        1. účinné od 1. 1. 19991. 2 DEFINICE A JEDNOTKY

          účinné od 1. 1. 1999CT = koncentrace zkoušené látky na začátku provzdušňovací periody, vyjádřená jako množství organického uhlíku přítomného nebo přidaného k usazené odpadní vodě (mg.l-1),

          účinné od 1. 1. 1999Ct = koncentrace rozpuštěného organického uhlíku v kapalině nad usazeninou, ve zkoušce, na konci provzdušňovací periody (mg.l-1),

          účinné od 1. 1. 1999Cc = koncentrace rozpuštěného organického uhlíku v kapalině nad sedimentem, v kontrolní zkoušce, na konci provzdušňovací periody (mg.l-1).

          účinné od 1. 1. 1999Biologický rozklad je v této metodě definován jako úbytek organického uhlíku.

          1. účinné od 1. 1. 1999Biologický rozklad je možné vyjádřit jako:
            1. účinné od 1. 1. 19991. Procentický úbytek Dda množství denně přidávané látky:

              účinné od 1. 1. 1999 (1)

              1. účinné od 1. 1. 1999kde Dds = rozklad/denní přídavek
            1. účinné od 1. 1. 19992. Procentický úbytek Dssd množství látky přítomného na začátku každého dne:

              účinné od 1. 1. 1999 (2(a))

              účinné od 1. 1. 1999 (2(b))

              1. účinné od 1. 1. 1999kde Dred = rozklad/denní přídavek;
              2. účinné od 1. 1. 1999indexy i a (i + 1) se vztahují ke dni měření.

            účinné od 1. 1. 1999Rovnice 2(a) se doporučuje, mění-li se DOC v odcházející vodě den ode dne, zatímco rovnici 2(b) lze používat, zůstává-li DOC v odcházející vodě den ode dne relativně konstantní.

        1. účinné od 1. 1. 19991. 3 REFERENČNÍ LÁTKY

          účinné od 1. 1. 1999V některých případech mohou být při studiu nové látky užitečné referenční látky. Pro tuto zkoušku není dosud žádná referenční látka stanovena.

          účinné od 1. 1. 1999Jsou uvedeny hodnoty pro několik sloučenin vyhodnocených v okružních zkouškách (viz příloha 1), takže je možné provést občasnou kalibraci metody a porovnat výsledky získané jinými metodami.

        1. účinné od 1. 1. 19991. 4 PRINCIP ZKUŠEBNÍ METODY

          účinné od 1. 1. 1999Aktivovaný kal z čistírny odpadních vod se vpraví do semikontinuální jednotky pro aktivovaný kal (SCAS, semi-continuous activated sludge unit). Přidají se zkoušená látka a usazená domovní odpadní voda a směs se provzdušňuje 23 hodin.
          Provzdušňování se pak ukončí, kal se nechá usadit a kapalina nad usazeninou se odstraní.

          účinné od 1. 1. 1999Kal zbylý v provzdušňovací komoře se pak smísí s další alikvotní částí zkoušené látky a odpadní vody a cyklus se opakuje.

          účinné od 1. 1. 1999Biologický rozklad se určí stanovením obsahu rozpuštěného organického uhlíku v kapalině nad sedimentem. Tato hodnota se porovná s hodnotou, zjištěnou pro kapalinu získanou z kontrolní nádoby, do které byla dávkována pouze usazená odpadní voda.

          účinné od 1. 1. 1999Použije-li se specifická analytická metoda, je možné měřit změny koncentrace výchozí chemické látky v důsledku biologického rozkladu (primární biologický rozklad).

        1. účinné od 1. 1. 19991. 5 KRITÉRIA KVALITY

          účinné od 1. 1. 1999Reprodukovatelnost této metody, založené na úbytku rozpuštěného organického uhlíku, nebyla ještě stanovena. (Pokud se uvažuje primární biologický rozklad, dosahuje se velmi přesných hodnot pro látky, které se rozkládají ve vysokém stupni.)

          účinné od 1. 1. 1999Citlivost metody je ve velké míře určena variabilitou slepé zkoušky a v menší míře přesností stanovení rozpuštěného organického uhlíku a obsahem zkoušené látky v kapalině na začátku každého cyklu.

        1. účinné od 1. 1. 19991. 6 POPIS PRACOVNÍHO POSTUPU
          1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 1 Příprava

            účinné od 1. 1. 1999Sestaví se dostatečný počet čistých provzdušňovacích jednotek, alternativně je možné použít originální zkušební jednotku SCAS o obsahu 1,5 l, a trubic pro přívod vzduchu (obrázek 1) pro každou zkoušenou látku a pro kontrolní zkoušky. Stlačený vzduch přiváděný do zkušebních jednotek, přečištěný vatovým filtrem, musí být prostý organického uhlíku a musí být předem nasycen vodou, aby se snížily ztráty vypařováním.

            účinné od 1. 1. 1999Vzorek směsné kapaliny, obsahující 1 - 4 g suspendovaných tuhých látek v 1 litru, se získá z čistírny pracující s aktivovaným kalem, čistící převážně domovní odpadní vody. Pro každou provzdušňovací jednotku je třeba přibližně 150 ml směsné kapaliny.

            účinné od 1. 1. 1999Zásobní roztoky zkoušené látky se připravují s použitím destilované vody; normálně požadovaná koncentrace je 400 mg.l-1 jako organický uhlík, což představuje koncentraci zkoušené látky 20 mg.l-1 uhlíku na začátku každého cyklu provzdušňování, nedochází-li k biologickému rozkladu.

            účinné od 1. 1. 1999Dovoluje-li to toxicita pro mikroorganizmy jsou přípustné vyšší koncentrace.

            účinné od 1. 1. 1999Měří se obsah organického uhlíku zásobních roztoků.

          1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 2 Experimentální podmínky

            účinné od 1. 1. 1999Zkoušku je třeba provádět při 20 - 25 °C.

            účinné od 1. 1. 1999Používá se vysoká koncentrace aerobních mikroorganizmů (1 - 4 g.l-1 suspendovaných látek), a efektivní doba zdržení je 36 hodin. Uhlíkaté látky v přiváděné odpadní vodě se v široké míře oxidují, normálně během osmi hodin po začátku každého cyklu provzdušňování. Potom kal endogenně dýchá po zbytek provzdušňovací periody, a v této době je jediným dostupným substrátem zkoušená sloučenina, pokud se také rychle nemetabolizuje. Tyto skutečnosti spolu s denně opakovaným očkováním, používá-li se jako médium domovní odpadní voda, vytvářejí vysoce příznivé podmínky jak pro aklimatizaci, tak pro vysoký stupeň rozkladu.

          1. účinné od 1. 1. 19991. 6. 3 Provedení zkoušky

            účinné od 1. 1. 1999Získá se vzorek směsné kapaliny z vhodné čistírny čistící aktivovaným kalem převážně domovní odpadní vody nebo vzorek kapaliny z laboratorní jednotky a udržuje se v aerobních podmínkách až do použití v laboratoři. Do každé aerační i kontrolní jednotky se naplní 150 ml směsné kapaliny (používá-li se originální jednotka pro zkoušku SCAS, je třeba uvedené objemy násobit 10) a zahájí se provzdušňování. Po 23 hodinách se provzdušňování ukončí a kal se nechá 45 minut usadit. Postupně se otevřou kohouty všech nádob a odeberou se 100 ml podíly kapaliny nad usazeninou. Ke kalu zbylému v každé aerační jednotce se přidá 100 ml usazené domovní odpadní vody získané bezprostředně před použitím. Opět se zahájí provzdušňování. V této etapě se nepřidávají žádné zkoušené látky, a do jednotek se denně přidává domovní odpadní voda pouze do té doby, než se po usazení získá čirá kapalina nad usazeninou. To trvá obvykle až dva týdny, během kterých se obsah rozpuštěného organického uhlíku v kapalině nad usazeninou na konci každého aeračního cyklu přiblíží konstantní hodnotě.

            účinné od 1. 1. 1999Na konci této fáze se jednotlivé usazené kaly smísí a do každé jednotky se předloží 50 ml výsledného směsného kalu.

            účinné od 1. 1. 1999Do kontrolních jednotek se přidá 95 ml usazené odpadní vody a 5 ml vody, a do zkušebních jednotek se přidá 95 ml usazené odpadní vody plus 5 ml příslušného zásobního roztoku zkoušené látky (450 mg.l-1). Znovu se zahájí provzdušňování a pokračuje se v něm 23 hodin. Kal se pak nechá 45 minut usadit, kapalina nad usazeninou se odebere a analyzuje na obsah rozpuštěného organického uhlíku.

            účinné od 1. 1. 1999Výše uvedený postup plnění a odběru se opakuje v průběhu zkoušky denně.

            účinné od 1. 1. 1999Může se ukázat nutným očistit před usazováním stěny jednotek, aby se předešlo hromadění tuhých látek nad hladinou kapaliny. Pro každou jednotku se používá samostatná stěrka nebo kartáč, aby se předešlo vzájemné kontaminaci.

            účinné od 1. 1. 1999V ideálním případě se rozpuštěný organický uhlík stanoví v kapalinách nad usazeninami denně, i když jsou přípustné méně časté analýzy. Před analýzou se kapaliny zfiltrují přes promyté 0,45 µm membránové filtry nebo se zcentrifugují. Membránové filtry jsou vhodné, je-li zaručeno, že ani neuvolňují uhlík, ani ve filtračním kroku neabsorbují příslušnou látku. Teplota vzorku po dobu, kdy je v odstředivce, nesmí přesáhnout 40 °C.

            účinné od 1. 1. 1999Doba trvání zkoušky pro látky, u kterých dochází k malému nebo žádnému biologickému rozkladu není určena, ale na základě zkušenosti lze doporučit, aby trvala obecně nejméně 12 týdnů, avšak ne déle než 26 týdnů.

      1. účinné od 1. 1. 19992 VÝSLEDKY A VYHODNOCENÍ

        účinné od 1. 1. 1999Hodnoty koncentrace rozpuštěného organického uhlíku v čiré kapalině nad usazeninami ve zkušebních jednotkách a v kontrolních jednotkách se vynesou proti času.

        účinné od 1. 1. 1999Po skončení biologického rozkladu se koncentrace zjištěná ve zkoušce přiblíží hodnotě v kontrolní jednotce. Jakmile se ve třech po sobě následujících měřeních zjistí, že rozdíl mezi oběma úrovněmi je konstantní, provede se takový počet dalších měření, který je postačující pro statistické vyhodnocení výsledků, a vypočte se procentní hodnota biologického rozkladu zkoušené látky (Dda nebo Dred, viz 1. 2).

      1. účinné od 1. 1. 19993 ZPRÁVA
        1. účinné od 1. 1. 19993. 1 PROTOKOL O ZKOUŠCE
          1. účinné od 1. 1. 1999Je-li to možné, má protokol o zkoušce obsahovat tyto informace:
            1. účinné od 1. 1. 1999- veškeré informace o druhu odpadní vody, typu použité jednotky a o experimentálních výsledcích týkajících se zkoušené látky, referenční látky ( pokud byla použita) a slepé zkoušky,
            2. účinné od 1. 1. 1999- teplotu,
            3. účinné od 1. 1. 1999- křivku úbytku s popisem, způsob výpočtu (viz 1. 2),
            4. účinné od 1. 1. 1999- datum a lokalitu, kde byly odebrány aktivovaný kal a odpadní voda, stav adaptace, koncentrace atd.,
            5. účinné od 1. 1. 1999- vědecké důvody pro veškeré změny v postupu zkoušky,
            6. účinné od 1. 1. 1999- podpis a datum.
        1. účinné od 1. 1. 19993. 2 INTERPRETACE VÝSLEDKŮ

          účinné od 1. 1. 1999Protože látky zkoušené touto metodou nejsou snadno biologicky rozložitelné, bude normálně jakýkoli úbytek DOC, ke kterému dojde pouze v důsledku biologického rozkladu, během dnů nebo týdnů, postupný, s výjimkou případů, kdy aklimatizace je náhlá, jak je to indikováno náhlým vymizením zkoušené látky po několika týdnech.

          účinné od 1. 1. 1999Někdy může hrát významnou úlohu fyzikálně-chemická adsorpce; to je indikováno úplným nebo částečným úbytkem přidaného DOC na začátku. K čemu dojde potom, závisí na činitelích jako je míra adsorpce a koncentrace suspendovaných látek v nepoužité odcházející vodě. Obvykle rozdíl mezi koncentrací DOC v kapalinách nad usazeninou u kontroly a ve zkoušce postupně vzrůstá z počáteční nízké hodnoty a tento rozdíl pak, pokud nedojde k aklimatizaci, zůstává na nové hodnotě po zbytek experimentu,.

          účinné od 1. 1. 1999Je-li třeba rozlišit mezi biologickým rozkladem (nebo částečným biologickým rozkladem) a adsorpcí, jsou nezbytné další zkoušky. Je možné je provést řadou způsobů, ale nejpřesvědčivější je použití kapaliny nad usazeninou nebo kalu jako inokula ve zkoušce vybrané ze základního souboru (nejlépe v respirometrické zkoušce).

          účinné od 1. 1. 1999Zkoušené látky, u kterých v této zkoušce dochází k vysokému neadsorpčnímu úbytku DOC, je třeba považovat za potenciálně biologicky rozložitelné. Částečný neadsorpční úbytek ukazuje, že u látky dochází alespoň k určitému biologickému rozkladu.

          účinné od 1. 1. 1999Nízké nebo nulové úbytky DOC mohou být způsobeny inhibicí mikroorganizmů zkoušenou látkou, což se může projevit také lyzí a ztrátou kalu, takže kapalina nad usazeninou je zakalená. Zkoušku je nutné opakovat s nižší koncentrací zkoušené látky.

          účinné od 1. 1. 1999Vyšší citlivosti je možné dosáhnout použitím specifické analytické metody nebo sloučeniny značené 14C. V případě zkoušené látky značené uhlíkem 14C se zachycením 14CO2 potvrdí, že došlo k biologickému rozkladu.

          účinné od 1. 1. 1999Tam, kde jsou výsledky uvedeny také jako primární biologický rozklad, je třeba, pokud je to možné, uvést také vysvětlení změny chemické struktury, která vede ke ztrátě odezvy u mateřské zkoušené látky.

          účinné od 1. 1. 1999Je nutné uvést potvrzení platnosti metody spolu s odezvou zjištěnou u média ve slepé zkoušce.

      1. účinné od 1. 1. 19994 LITERATURA

        účinné od 1. 1. 1999(1) OECD, Paris, 1981. Test Guideline 302 A, Decision of the Council C(81) 30 final.

    účinné od 1. 1. 1999

    PŘÍLOHA 1

    účinné od 1. 1. 1999

    účinné od 1. 1. 1999Zkouška SCAS: příklad výsledků

    účinné od 1. 1. 1999
    PŘÍLOHA 1 Zkouška SCAS: příklad výsledků
    LátkaCT
    (mg.l-1)    		Cl - Cc
    (mg.l-1)    		Procento biolog.
    rozkladu Dda    		Doba trvání zkoušky
    (dny)
    4 -acetylaminobenzen
    sulfonan    		17,22,08540
    tetrapropylenbenzen
    sulfonan    		17,38,451,440
    4 - nitrofenol16,90,895,340
    diethylenglykol16,50,298,840
    anilin16,91,795,940
    cyklopentantetra- karboxylát17,93,281,1120
    účinné od 1. 1. 1999

    PŘÍLOHA 2

    účinné od 1. 1. 1999

    účinné od 1. 1. 1999Příklad zkušební aparatury

    účinné od 1. 1. 1999Obrázek
    1. účinné od 1. 1. 1999XIII STANOVENÍ BIOLOGICKÉ ROZLOŽITELNOSTI NEIONTOVÝCH POVRCHOVĚ AKTIVNÍCH LÁTEK
      1. účinné od 1. 1. 19991. 1 DEFINICE

        účinné od 1. 1. 1999Neiontové povrchově aktivní látky ve smyslu této směrnice jsou ty povrchově aktivní látky, které se po průchodu měniči kationtů a aniontů stanoví jako látky s aktivní reakcí s bismutem (bismuth - active substance, BiAS) v souladu s analytickým postupem popsaným v kapitole 3.

      1. účinné od 1. 1. 19991. 2 ZAŘÍZENÍ POTŘEBNÉ PRO MĚŘENÍ

        účinné od 1. 1. 1999Měřicí metoda používá malé zařízení zpracovávající aktivovaný kal, znázorněné na obr. 1 a podrobněji na obr. 2. Zařízení sestává ze zásobníku syntetické odpadní vody A, dávkovacího čerpadla B, provzdušňovací nádoby C, usazovací nádoby D, mamutky E pro recyklaci aktivovaného kalu a nádoby F pro shromažďování upravené odtokové vody.

        účinné od 1. 1. 1999Nádoby A a F musí být ze skla nebo z vhodného plastu o obsahu nejméně 24 litrů. Čerpadlo B musí zaručovat konstantní průtok syntetické odpadní vody do provzdušňovací nádoby; tato nádoba obsahuje za normálního provozu tři litry směsné kapaliny. Porézní provzdušňovací kostka G je ponořena v nádobě C u vrcholu kužele. Množství vzduchu prošlé provzdušňovačem se sleduje průtokoměrem H.

      1. účinné od 1. 1. 19991. 3 SYNTETICKÁ ODPADNÍ VODA
        1. účinné od 1. 1. 1999Pro zkoušku se používá syntetická odpadní voda. V jednom litru vodovodní vody se rozpustí:
          1. účinné od 1. 1. 1999160 mg peptonu,
          2. účinné od 1. 1. 1999110 mg masového extraktu,
          3. účinné od 1. 1. 199930 mg močoviny (CO(NH2)2),
          4. účinné od 1. 1. 19997 mg chloridu sodného (NaCl),
          5. účinné od 1. 1. 19994 mg chloridu vápenatého (CaCl2.2H2O),
          6. účinné od 1. 1. 19992 mg síranu hořečnatého (MgSO4.7H2O)
          7. účinné od 1. 1. 199928 mg hydrogenfosforečnanu draselného (K2HPO4) a 10 ± 1 mg BiAS.

        účinné od 1. 1. 1999BiAS se extrahuje ze zkoušeného výrobku metodou uvedenou v kapitole 2. Syntetická odpadní voda se připravuje denně čerstvá.

      1. účinné od 1. 1. 19991. 4 PŘÍPRAVA VZORKŮ
        1. účinné od 1. 1. 19991. 4. 1 Nesmíchané povrchově aktivní látky je možné zkoušet v původním stavu. Za účelem přípravy syntetické odpadní vody (1.3) musí být stanoven obsah BiAS.
        2. účinné od 1. 1. 19991. 4. 2 Kombinované výrobky se analyzují na obsah BiAS, MBAS a mýdla. Musí se extrahovat alkoholem a separovat BiAS (viz kapitolu 2). Obsah BiAS v extraktu je nutné znát k přípravě syntetické odpadní vody.
      1. účinné od 1. 1. 19991. 5 POPIS ČINNOSTI ZAŘIZENÍ

        účinné od 1. 1. 1999Nejdříve se naplní provzdušňovací nádoba C a usazovací nádoba D syntetickou odpadní vodou. Výšku nádoby D je třeba nastavit tak, aby objem, obsažený v provzdušňovací nádobě C, odpovídal 3 litrům. Naočkování se provede přidáním 3 ml sekundárně vyčištěné opadní vody dobré kvality, čerstvě odebrané z čistírny pracující převážně s domovní odpadní vodou. Upravenou odpadní vodu je nutno v období mezi odběrem a použitím přechovávat v aerobních podmínkách. Poté se uvede do provozu provzdušňovací zařízení G, mamutka E a dávkovací zařízení B. Syntetická odpadní voda musí protékat provzdušňovací nádobou C rychlostí jednoho litru za hodinu; z toho vyplývá střední doba zdržení 3 hodiny.

        účinné od 1. 1. 1999Rychlost provzdušňování je nutné regulovat tak, aby obsah nádoby C byl neustále udržován v suspenzi a obsah rozpuštěného kyslíku činil nejméně 2 mg.l-1. Pěnění je nutné předcházet vhodnými prostředky. Nesmějí se používat činidla proti pěnění, která inhibují aktivovaný kal nebo obsahují BiAS. Mamutku E je třeba nastavit tak, aby se aktivovaný kal z usazovací nádoby kontinuálně a rovnoměrně recykloval do provzdušňovací nádoby C, kal na dně usazovací nádoby D nebo v cirkulačním okruhu, musí být vrácen do cirkulace nejméně jednou denně seškrabáním kartáčem nebo jiným vhodným způsobem. Pokud se kal neusazuje, je možno zvýšit jeho schopnost usazování přídavky 2 ml 5% roztoku chloridu železitého, opakovanými podle potřeby.

        účinné od 1. 1. 1999Upravená voda, odtékající z usazovací nádoby D, se shromažďuje v nádobě F po dobu 24 hodin, poté se po důkladném promísení odebere vzorek. Nádobu F je pak nutné pečlivě vyčistit.

      1. účinné od 1. 1. 19991. 6 KONTROLA MĚŘICÍHO ZAŘÍZENÍ

        účinné od 1. 1. 1999Obsah BiAS (v mg.l-1) v syntetické odpadní vodě se stanoví bezprostředně před použitím.

        účinné od 1. 1. 1999Obsah BiAS (v mg.l-1) ve vodě, shromažďované po dobu 24 hodin v nádobě F, je třeba stanovit analyticky stejnou metodou ihned po shromáždění; jinak se musí vzorky uchovávat, nejlépe zmrazené.

        účinné od 1. 1. 1999Koncentrace se musí stanovit s přesností na 0,1 mg.l-1 BiAS.

        účinné od 1. 1. 1999Pro kontrolu účinnosti probíhajícího procesu se nejméně dvakrát týdně měří v odtékající vodě, zfiltrované přes skelnou vatu a shromažďované v nádobě F, a dále i ve zfiltrované syntetické odpadní vodě v nádobě A, chemická spotřeba kyslíku (CHSK) nebo obsah rozpuštěného organického uhlíku (DOC).