Platné znění

Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby

PUFRYDodatek 2

  1. 0,05 M PBS pH 7,0

    Tento pufr může být použit pro maceraci pletiv hlíz (2.1.)

    PUFRY
    Na2HPO44,26 g
    KH2PO42,72 g
    NaCl8,0 g
    destilovaná voda do1 litru
  1. 0,01 M PBS pH 7,2

    Tento pufr se používá pro ředění antiséra a omývání sklíček pro IF

    PUFRY
    Na2HPO412H2O2,7 g
    NaH2PO42H2O0,4 g
    NaCl8,0 g
    destilovaná voda do1 litru
  1. 0,01 M fosfátový pufr s glycerinem pH 7,6

    Tento pufr se používá v IF testu jako krycí tekutina na podložní sklíčko ke zvýšení fluorescence.

    PUFRY
    Na2HPO4.12H2O3,2 g
    NaH2PO4.2H2O0,15 g
    glycerol50 ml
    destilovaná voda100 ml

GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981)Dodatek 3

Roztok krystalové violeti

Rozpustí se 2 g krystalové violeti v 20 ml 95% ethanolu.

Rozpustí se 0,8 g šťavelanu amonného v 80 ml destilované vody.

Smíchají se oba roztoky.

Lugolův jódový roztok

PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981)
jód1 g
jodid draselný2 g
destilovaná voda300 ml
  1. Společně se pevné látky rozetřou pomocí tloučku v misce. Nasypou se do vody a míchají v uzavřené nádobě do rozpuštění.

Safraninový roztok kontrastního barviva

Zásobní roztok:

PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981)
safranin O2,5 g
95% etanol100 ml

Zamíchá se a uloží.

Ředěním 1:10 se připraví pracovní roztok.

Postup barvení:

  1. 1. Připraví se roztěry, vysuší na vzduchu a fixují zahřátím.
  2. 2. Zalije se sklíčko roztokem krystalové violeti a nechá 1 minutu působit.
  3. 3. Krátce se omyje pod tekoucí vodou.
  4. 4. Zalije se Lugolovým jódovým roztokem a nechá působit po dobu 1 minuty.
  5. 5. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší savým papírem.
  6. 6. Odbarví se pomocí po kapkách přidávaného 95% etanolu tak dlouho, pokud se vyplavuje barvivo, nebo se ponoří za jemného pohybování do etanolu na dobu 30 sekund.
  7. 7. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší savým papírem.
  8. 8. Zalije se na dobu 10 s safraninovým roztokem.
  9. 9. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší savým papírem.

Grampozitivní bakterie se barví fialově modře, gramnegativní bakterie se barví růžově červeně.

STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚKDodatek 4

Plocha (S) jednoho pole na podložním sklíčku s více jamkami

= πD2/4 (1)
  1. kde D = průměr pole.

Plocha (s) pole objektivu

= πd2/4 (2)
  1. kde d = průměr pole objektivu

Vypočítá se d buď přímým měřením, nebo z následujícího vzorce:

s = πi2/G2K2.4 (3)
  1. kde i = koeficient pole (závisí na typu okuláru mikroskopu a pohybuje se v rozmezí od 8 do 24),
  2. K = tubusový koeficient (1 nebo 1,25),
  3. G = zvětšení objektivu (100x, 40 x atd.),
  4. ze vzorce (2) d = √4s/π
  5. ze vzorce (3) d = druhá odmocnina výrazu [(4x πi2/G2K2.4)/π)] i/GK (4)

Zjistí se počet typických fluoreskujících buněk v jednou pozorovacím poli (c).

Vypočítá se počet typických fluoreskujících buněk v jamce (C).

C = c. S/s

Vypočítá se počet typických fluoreskujících buněk na 1 ml pelety (N)

N = C.F.1000/y,
  1. kde y = objem pelety v jamce,
  2. kde F = zřeďovací faktor pelety.

PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHODodatek 5

Vysejí se semena lilku vejcoplodého (Solanum melongena cv. Black Beauty) do sterilního výsevného substrátu. Semenáčky s plně rozvinutými děložními lístky (10 až 14 dní) se přepichjí do sterilního pěstebního substrátu.

Používají se rostliny ve fázi 3 listů, kdy mají dva, ale ne více než tři plně rozvinuté pravé listy.

Lilek se pěstuje ve skleníku za následujících podmínek:

  1. délka dne: 14 hodin nebo přirozená délka dne, pokud je delší;
    1. teplota: - den: 21 až 24 °C,
    2. - noc: 15 °C.
  • Poznámka: Kroužkovitost neroste při teplotách > 30 °C. Pokud noční teploty neklesnou na 15 °C, může dojít k poškození chromozomů (stříbřitá nekróza).

    • Poškození kořenů larvami smutnic lze zabránit užitím vhodného insekticidu.

    Osivo lilku vejcoplodého odrůdy Black Beauty lze získat od:

    1. 1. AB Hammenhögs Frö,

      270 50 Hammenhögs,

      Švédsko;

    1. 2. HURST Seeds Ltd,

      Avenue Road,

      Witham,

      Essex CM8 2DX,

      Anglie;

    1. 3. ASGRO Italia Sp A,

      Corso Lodi, 23,

      Milan;

      Itálie

    1. 4. KÜPPER

      Mitteldeutsche Samen GmbH,

      Hessenring 22,

      D-37269 Eschwege

      Spolková republika Německo.

    MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTIDodatek 6

    1. Živný agar (NA)

      Baktoagar (Difco) v destilované vodě podle instrukcí výrobce. Sterilizuje se v autoklávu při 121 °C po dobu 15 minut.

    1. Živný dextrosový agar (NDA)

      Baktoagar (Difco) obsahující 1 % D(+) glukosy (monohydrátu). Sterilizuje se v autoklávu při 115 °C po dobu 20 minut.

    1. Kvasnico-pepton-glukósový agar (YPGA)
      PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI
      Kvasnicový bakto extrakt (Difco) (č. 0127)5 g
      Baktopepton (Difco) (č. 0118)5 g
      D(+)-glukosa (monohydrát)10 g
      Čistý baktoagar (Difco)
      (č. 0560)      		15 g
      destilovaná voda1 litr

      Sterilizují se 0,5 litrové objemy média v autoklávu při 115 °C po dobu 20 minut.

    1. Médium s kvasničným extraktem a minerálními solemi (YGM)
      PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI
      Kvasnicový baktoextrakt (Difco)2,0 g
      D(+)-glukosa (monohydrát)2,5 g
      K2HPO40,25 g
      KH2PO40,25 g
      MgSO4 . 7H2O0,1 g
      MnSO4 . H2O0,015 g
      NaCl0,05 g
      FeSO4 . 7H2O0,0055 g
      čistý baktoagar (Difco)18 g
      destilovaná voda1 litr

      Sterilizují se 0,5 litrové objemy média v autoklávu při 115 °C po dobu 20 minut.

    NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTIDodatek 7

    Všechna média jenutno inkubovat při 21 °C a po šesti dnech vyhodnotit. Pokud nedošlo k žádnému růstu, inkubují se po dobu nejvýše 20 dní.

    1. ‒ Oxidačně fermentační test (Hugh & Leifson), 1953 – O/F test.
      1. Základní médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        KCl0,2 g
        MgSO4 . 7H2O0,2 g
        NH4H2PO41,0 g
        baktopepton (Difco)1,0 g
        čistý bactoagar (Difco)3,0 g
        D(+)-glukosa (monohydrát)10,0 g
        bromothymolová modř0,03 g
        destilovaná voda1 litr

        Smíchá se a upraví pomocí 1N KOH pH na 7,0 až 7,2.

        Rozdělí se do kultivačních zkumavek Pyrex 16 mm × 100 mm (objem 12 ml) po 5 ml a 10 ml.

        Sterilizuje se v autoklávu při 115 °C po dobu 10 minut.

        Vpichem se naočkují 5 ml a 10 ml zkumavky každou kulturou. Asepticky se přidá do 10 ml zkumavky 1 až 2 ml sterilního tekutého parafínu a inkubuje se.

        1. Pozitivní reakce:
          PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
          ZkumavkaZbarveníInterpretace
          otevřená/zavřenážluté/žlutéfermentační
          otevřená/zavřenážluté/modro-zelenéoxidační
          otevřená/zavřenázelenavé/modro-zelenéoxidační nebo inertní
    1. ‒ Oxidasový test (Kovacs, 1956)
      1. Kovacsovo oxidasové činidlo:
        1. 1% vodní roztok tetramethylparafenylendiamin- dihydrochloridu (BDH č. 30386) v destilované vodě.

      Toto činidlo by mělo být čerstvě připravováno 1 ml objemech nebo může být uchováváno v lahvi z hnědého skla při 5 °C po dobu 1 až 4 týdnů.

      Jedna kapka činidla se kápne na filtrační papír v čisté Petriho misce. Ihned se pomocí platinové kličky rozetře některá z testovaných kultur z živného agaru.

      Pozitivní reakce: Během 10 sekund se vyvine purpurové zbarvení. Kultury vybarvující se během 10 až 30 sekund jsou slabě pozitivní.

    2. Poznámka: Je důležité používat platinové kličky a NA kultury (kultury z živného média), protože stopy železa nebo vysoký obsah cukru v živném růstovém médiu mohou způsobit falešné pozitivní výsledky.
    1. ‒ Tvorba kyseliny z laktosy, rhamnosy, salicinu, glycerolu

      Připraví se Hugh & Leifsonovo O/F médium bez glukosy. Rozdělí se do zkumavek po 5 ml. Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 115 °C po dobu 10 minut. K roztavenému základu při 45 °C se přidá asepticky 0,5 ml filtrací sterilizovaného 10% vodního roztoku glycerolu, laktosy, rhamnosy nebo salicinu. Pečlivě se promíchá.

      Pozitivní reakce: Změna zbarvení modrozeleného na žluté indikuje tvorbu kyseliny.

    1. ‒ Katalasový test

      Kápka třicetiprocentního peroxidu vodíku se kápne na čisté podložní sklíčko a pomocí platinové kličky se vytvoří emulze se zkoumanou kulturou.

      Pozitivní reakce: Tvorba bublinek kyslíku v kapce indikuje přítomnost katalasy.

    1. ‒ Aktivita nitrátreduktasy a denitrifikace (Bradbury, 1970)
      1. Kultivační médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        KNO3 (prostý dusitanu)1 g
        kvasnicový baktoagar (Difco)1 g
        K2HPO45g
        destilovaná voda1 litr

        Rozdělí se po 10 ml do 20 ml lahviček. Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 15 minut.

      1. Činidlo A:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        H2SO48 g
        5N kyselina octová1 litr
      1. Činidlo B:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        naflylamin5 g
        5N kyselina octová1 litr

        Naočkuje se nitrátové médium ve dvou opakováních. Po 10 a 20 dnech se přidá po jedné kapce Lugolova jodového činidla, 0,5 ml činidla A a 0,5 ml činidla B. Pokud se médium nezbarví do červena, přidá se přibližně 50 mg zinkového prášku. Sleduje se barevná reakce.

        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        Pozitivní reakce:Barevná reakce
        Stadium 1Stadium 2
        Žádná redukce dusičnanubezbarváčervená
        Redukce dusičnanu i dusitanu
        (pouze nitrátreduktasa)        		červená-
        Snížení dusičnanu mimo dusitan
        (denitrifikace – nitrit a nitrátreduktasa)        		bezbarvábezbarvá

    Tvorba ureasy (Lelliott, 1966)

    1. Základní médium:
      PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
      základ pro oxoid močovinový agar (CM53)2,4 g
      destilovaná voda95 ml

      Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 121°C po dobu 20 minut. Zchladí se roztavený základ na 50 °C a asepticky se přidá 5 ml filtrací sterilizovaného 40% vodního roztoku močoviny (Oxoid SR20). Řádně se promíchá.

      Rozdělí se po 6 ml do sterilních zkumavek (16 x 100 mm) a nechá ustát v šikmé poloze na vhodné podložce.

      Pozitivní reakce: Za přítomnosti aktivní ureasy se žlutooranžové médium barví třešňově červeně nebo fuchsinově (zelenožlutě) růžově.

    1. Využívání citrátu (Christensen) (Skerman, 1947)
      PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
      základ citrátového agaru (Merck 2503)23 g
      destilovaná voda1 litr

      Rozpustí se mícháním za současného zahřívání. Rozdělí se po 6 ml jako u močovinového média. Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 15 minut a nechá ustát v šikmé poloze.

      Pozitivní reakce: Využívání citrátu se projeví změnou barvy média z oranžové na červenou.

    1. – Tvorba sirovodíku (Ramamurthi, 1959)
      1. Médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        baktotrypton (Difco č. 0123)10 g
        K2HPO41 g
        NaCl5 g
        destilovaná voda1 litr

        Rozpustí se a rozdělí po 6 ml do zkumavek 16 × 100 mm. Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 115 °C po dobu 10 minut.

        Inokuluje se a na okraj zkumavky se asepticky zavěsí papírek s octanem olovnatým (Merck 9511). Papírek se upevní víčkem. Inkubuje se po dobu nejvýše 20 dní.

        Pozitivní reakce: Tvorba sirovodíku (H2S) z tryptonu se projeví vývojem černohnědého zbarvení testovacího papírku.

    1. – Tvorba indolu (Ramamurthi, 1959)
      1. Médium:

        Jako u testu na H2S.

        Odstraní se papírek s octanem olovnatým a přidá 1 až 2 ml diethyleteru a jemně se protřepete. Nechá se chvíli stát (pět minut) k oddělení vrstev. Po stěně nakloněné zkumavky se přidá opatrně 0,5 ml činidla podle Kovacse (Merck 9293).

        Pozitivní reakce: Přítomnost indolu se projeví vývojem červeného zbarvení ve žluté vrstvě mezi etherovou a vodní frakcí.

    1. – Růst při 37 °C (Ramamurthi, 1959)
      1. Médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        baktobujon (Difco č. 0003)8 g
        destilovaná voda1 litr

        Rozmíchá se, rozpustí a rozdělí po 6 ml do zkumavek.

        Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 15 minut.

        Inokuluje se a inkubuje se při teplotě 37 °C.

        Pozitivní reakce: projevy růstu.

    1. ‒ Růst v 7% chloridu sodném (Ramamurthi, 1959)
      1. Médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        baktobujon (Difco č. 0003)8 g
        NaCl70 g
        destilovaná voda1 litr

        Rozmíchá se, rozpustí a rozdělí po 6 ml do zkumavek.

        Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 15 minut.

        Pozitivní reakce: projevy růstu.

    1. ‒ Hydrolýza želatiny (Lelliott, Biling & Hayward, 1966)
      1. Médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        baktoželatina (Difco č. 0143)120 g
        destilovaná voda1 litr

        Rozmíchá se, rozpustí a rozdělí po 6 ml do zkumavek.

        Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 15 minut.

        Pozitivní reakce: Želatina se stává tekutou, i když je uchovávána při teplotě 5 °C po dobu 30 minut.

    1. ‒ Hydrolýza škrobu
      1. Médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        baktoagar (Difco) (roztavený)1 litr
        rozpustný bakt. škrob (Difco č. 0178)2 g

        Rozmíchá se a sterilizuje v autoklávu při teplotě 115 °C po dobu 10 minut.

        Rozlije na plotny. Inokulují se plotny bodově.

        Po dosažení dobrého růstu (10 až 20 dní) se odebere část narostlé kultury a přelije Lugolovým jodovým roztokem.

        Pozitivní reakce: Hydrolýza škrobu se projeví čirými zónami pod vyrostlými koloniemi bakterií nebo kolem nich, zbývající médium se barví purpurově.

    1. ‒ Aktivita hydrolasy eskulinu (Sneath & Collins, 1974)
      1. Médium:
        PUFRY GRAMOVO BARVENÍ V HUCKEROVĚ MODIFIKACI (DOETSCH, 1981) STANOVENÍ KONCENTRACE IF POZITIVNÍCH BUNĚK PĚSTOVÁNÍ LILKU VEJCOPLODÉHO MÉDIA PRO RŮST A IZOLACI KROUŽKOVITOSTI NUTRIČNÍ A FYZIOLOGICKÉ TESTY PRO IDENTIFIKACI KROUŽKOVITOSTI
        baktopepton (Difco)10 g
        eskulin1 g
        citronan železitý (Merck 3862)0,05 g
        citronan sodný1 g
        destilovaná voda1 litr

        Zamíchá se až do rozpuštění a rozdělí po 6 ml do zkumavek. Sterilizuje se v autoklávu při teplotě 115 °C po dobu 10 minut.

        Médium je čiré, ale fluoreskuje do modra.

        Pozitivní reakce: Hydrolýza eskulinu se projeví vznikem hnědé barvy společně s mizením fluorescence. Toto lze prověřit pomocí ultrafialové (UV) lampy.

    Literatura

    Bradbury, J. F., 1970. Isolation and preliminary study of bacteria from plants. Rev. Pl. Path., 49, 213 ‒ 218.

    Dinesen, I. G., 1984. The extraction and diagnosis of Conybacterium sepedonicum from diseased potato tubers. EPPO Bull. 14 (2), 147 ‒ 152.

    Doetsch, R. N., 1981. Determinative methods of light microscopy. V: Manual of methods for general bacteriology, American Society for Microbiology, Washington, 21 ‒ 23.

    Hugh, R a Leifson, F., 1953. The taxanomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various gram-negative bacteria. J. Bact., 66, 24 ‒ 26.

    Janse, J. D. a J Van Vaerenbergh. The interpretation of the EC method for the detection of latent ring rot infections (Conybacterium sepedonicum) in potato. EPPO Bull., č. 17, 1987, pp. 1 ‒10.

    Kovacs, N., 1956. Identification of Pseudomonas pyocyanea by the oxidase reaction. Nature, Lond., 178, 703.

    Lelliott, R. A., 1966. The plant pathogenic coryneform bacteria. J. appl. Bact., 29, 114 ‒ 118.

    Lelliott, R. A., E. Billing a A. C. Hayward, 1966. A determinative scheme for the fluorescent plant pathogenic pseudomonads J. appl. Bact., 29, 470 ‒ 489.

    Lelliott, R. A. a P. W., Sellar, 1976. The detection of latent ring rot (Conybacterium sepedonicum (Spiek.et Kotth.) Skapt. Et. Burkh.) in potato stocks. EPPO Bull., 6 odst. 2, 101 ‒ 106.

    Ramamurthi, C. S., 1959. Comparative studies on some Gram-positive phytopathogenic bacteria and their relationship to the Corynebacteria. Mem. Cornell agric. Exp. Sta., 366, 52 pp.

    Skerman, V. B. D., 1967. A guide to the identification of the genera of bacteria. 2. Edd.,

    William and Wilkins Company, Baltimore.

    Sneath, P. H. A. a V. G. Collins, 1974. A study in test reproductibility between laboratories: report of Pseudomonas working party. Antonie van Leeuwenhoek, 40, 481 ‒ 527.