Platné znění

Vyhláška, kterou se stanoví analytické metody kontroly složení kosmetických prostředků

  1. účinné od 1. 1. 20064.1.1 POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

    účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

    1. účinné od 1. 1. 20064.1.1.1 Papírek s octanem olovnatým
    2. účinné od 1. 1. 20064.1.1.2 Roztok kyseliny chlorovodíkové (1:1)
  1. účinné od 1. 1. 20064.1.2 Postup
    1. účinné od 1. 1. 20064.1.2.1 Kvalitativní stanovení kyseliny thioglykolové pomocí barevné reakce s papírkem s octanem olovnatým

      účinné od 1. 1. 2006Kapka vzorku se umístí na papírek s octanem olovnatým (4.1.1.1). Pokud se objeví intenzivní žluté zbarvení, je kyselina thioglykolová pravděpodobně přítomna.

      účinné od 1. 1. 2006Citlivost: 0,5 %.

    1. účinné od 1. 1. 20064.1.2.2 Kvalitativní stanovení anorganických sulfidů vznikem sirovodíku po okyselení

      účinné od 1. 1. 2006Do zkumavky se převede několik miligramů analyzovaného vzorku. Přidají se 2 ml destilované vody a 1 ml kyseliny chlorovodíkové (4.1.1.2). Uvolní se sirovodík, který lze rozpoznat podle zápachu, a na papírku s octanem olovnatým (4.1.1.1) vzniká černá sraženina sulfidu olovnatého.

      účinné od 1. 1. 2006Citlivost: 50 ppm.

    1. účinné od 1. 1. 20064.1.2.3 Kvalitativní stanovení siřičitanů vznikem oxidu siřičitého po okyselení

      účinné od 1. 1. 2006Postupuje se podle bodu 4.1.2.2. Obsah se přivede k varu. Oxid siřičitý lze rozpoznat podle jeho zápachu a jeho schopnosti redukovat například manganisté ionty.

  1. účinné od 1. 1. 20064.2 Kvalitativní stanovení chromatografií na tenké vrstvě
    1. účinné od 1. 1. 20064.2.1 POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

      účinné od 1. 1. 2006Není-li uvedeno jinak, použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

      1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.1 Kyselina thioglykolová, minimální čistota 98 %, stanovena jodometricky
      2. účinné od 1. 1. 20064.2.1.2 2,2'-dithiodi(octová kyselina), minimální čistota 99 %, stanovena jodometricky
      3. účinné od 1. 1. 20064.2.1.3 Kyselina 2-merkaptopropionová (thiomléčná kyselina), minimální čistota 95 %, stanovena jodometricky
      4. účinné od 1. 1. 20064.2.1.4 Kyselina 3-merkaptopropionová, minimální čistota 98 %, stanovena jodometricky
      5. účinné od 1. 1. 20064.2.1.5 3-merkaptopropan-1,2-diol (1-thioglycerol), minimální čistota 98 %, stanovena jodometricky
      6. účinné od 1. 1. 20064.2.1.6 Hotové silikagelové desky pro chromatografii na tenké vrstvě o tloušťce 0,25 mm
      7. účinné od 1. 1. 20064.2.1.7 Hotové desky pro chromatografii na tenké vrstvě s oxidem hlinitým, Merck F 254 E nebo ekvivalentní
      8. účinné od 1. 1. 20064.2.1.8 Kyselina chlorovodíková, koncentrovaná,
      9. účinné od 1. 1. 20064.2.1.9 Ethyl-acetát
      10. účinné od 1. 1. 20064.2.1.10 Chloroform
      11. účinné od 1. 1. 20064.2.1.11 Diisopropylether
      12. účinné od 1. 1. 20064.2.1.12 Tetrachlormethan
      13. účinné od 1. 1. 20064.2.1.13 Ledová kyselina octová
      14. účinné od 1. 1. 20064.2.1.14 Jodid draselný, 1% roztok (m/V) ve vodě
      15. účinné od 1. 1. 20064.2.1.15 Chlorid platičitý, 0,1% roztok (m/V) ve vodě
      16. účinné od 1. 1. 20064.2.1.16 Mobilní fáze
        1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.16.1 Ethyl-acetát (4.2.1.9), chloroform (4.2.1.10), diisopropylether (4.2.1.11), kyselina octová (4.2.1.13) (20:20:10:10, V/V/V/V)
        2. účinné od 1. 1. 20064.2.1.16.2 Chloroform (4.2.1.10), kyselina octová (4.2.1.13) (90:20, V/V)
      1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.17 Detekční činidla
        1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.17.1 Bezprostředně před použitím se smísí stejné objemy roztoku 4.2.1.14 a roztoku 4.2.1.15.
        2. účinné od 1. 1. 20064.2.1.17.2 Roztok bromu, 5 % (m/V):

          účinné od 1. 1. 2006Rozpustí se 5 g bromu ve 100 ml tetrachlormethanu (4.2.1.12).

        1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.17.3 Roztok fluoresceinu, 0,1 % (m/V):

          účinné od 1. 1. 2006100 mg fluoresceinu se rozpustí ve 100 ml ethanolu.

        1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.17.4 Heptamolybdenan hexaamonný, 10% roztok (m/V) ve vodě.
      1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.18 Standardní roztoky
        1. účinné od 1. 1. 20064.2.1.18.1 Kyselina thiglykolová (4.2.1.1), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
        2. účinné od 1. 1. 20064.2.1.18.2 2,2'-dithiodi(octová kyselina) (4.2.1.2), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
        3. účinné od 1. 1. 20064.2.1.18.3 Kyselina 2-merkaptopropionová (4.2.1.3), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
        4. účinné od 1. 1. 20064.2.1.18.4 Kyselina 3-merkaptopropionová (4.2.1.4), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
        5. účinné od 1. 1. 20064.2.1.18.5 3-merkaptopropan-1,2-diol (4.2.1.5), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
    1. účinné od 1. 1. 20064.2.2 Přístroje a pomůcky

      účinné od 1. 1. 2006Obvyklé vybavení pro chromatografii na tenké vrstvě

    1. účinné od 1. 1. 20064.2.3 Postup
      1. účinné od 1. 1. 20064.2.3.1 Příprava vzorků

        účinné od 1. 1. 2006Vzorek se okyselí několika kapkami kyseliny chlorovodíkové (4.2.1.8) na pH 1 a v případě potřeby zfiltruje.

        účinné od 1. 1. 2006V některých případech může být účelné vzorek zředit. V tomto případě se okyselení kyselinou chlorovodíkovou provede před zředěním.

      1. účinné od 1. 1. 20064.2.3.2 Vyvíjení

        účinné od 1. 1. 2006Na desku se nanese 1 μl roztoku vzorku (4.2.3.1) a 1 μl každého z pěti referenčních roztoků (4.2.1.18). Pečlivě se vysuší v mírném proudu dusíku a deska se vyvíjí rozpouštědly (4.2.1.16.1 nebo 4.2.1.16.2). Deska se usuší co nejrychleji pod dusíkem, aby nedošlo k oxidaci thiolů.

      1. účinné od 1. 1. 20064.2.3.3 Detekce

        účinné od 1. 1. 2006Deska se postříká jedním ze tří činidel (4.2.1.17.1, 4.2.1.17.3 nebo 4.2.1.17.4). Pokud se deska postříká činidlem (4.2.1.17.3), vystaví se poté parám bromu (např. v nádobě obsahující malou kádinku činidla (4.2.1.17.2)), dokud se skvrny nezviditelní. Detekce postřikem činidlem (4.2.1.17.4) bude úspěšná jen tehdy, nepřekročí-li doba sušení desky 30 minut.

      1. účinné od 1. 1. 20064.2.3.4 Interpretace

        účinné od 1. 1. 2006Hodnoty Rf a barvy referenčních roztoků se porovnají s roztoky vzorků. Průměrné hodnoty Rf uváděné dále jako hrubé vodítko slouží pouze pro srovnání. Závisí na:

        1. účinné od 1. 1. 2006— úrovni aktivace tenké vrstvy v době vyvíjení chromatogramu,
        2. účinné od 1. 1. 2006— teplotě ve vyvíjecí komoře.

        účinné od 1. 1. 2006Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě

        účinné od 1. 1. 2006
        Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
        Vyvíjecí rozpouštědla
        4.2.1.16.14.2.1.16.2
        Kyselina thioglykolová0,250,80
        Kyselina 2-merkaptopropionová0,400,95
        2,2'-dithiodi(octová kyselina)0,000,35
        Kyselina 3-merkaptopropionová0,450,95
        3-merkaptopropan-1,2-diol0,450,35
  1. účinné od 1. 1. 20065. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ

    účinné od 1. 1. 2006(Stanovení kyseliny thioglykolové se provádí s dosud nepoužitým výrobkem z čerstvě otevřeného obalu, aby se zamezilo oxidaci.)

    účinné od 1. 1. 2006Stanovení musí vždy začínat jodometrií.

    1. účinné od 1. 1. 20065.1 Jodometrie
      1. účinné od 1. 1. 20065.1.1 Princip

        účinné od 1. 1. 2006Stanovení se provádí oxidací skupiny „-SH“ jodem v kyselém prostředí podle rovnice:

        účinné od 1. 1. 20062 HOOC − CH2SH + I2 → (HOOC − CH2 − S)2 + 2I- + 2H+

      1. účinné od 1. 1. 20065.1.2 POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

        účinné od 1. 1. 2006Jod, 0,05 mol/l odměrný roztok

      1. účinné od 1. 1. 20065.1.3 Přístroje a pomůcky

        účinné od 1. 1. 2006Obvyklé laboratorní vybavení

      1. účinné od 1. 1. 20065.1.4 Postup

        účinné od 1. 1. 2006Do Erlenmeyerovy baňky na 150 ml s uzávěrem, obsahující 50 ml destilované vody, se přesně naváží 0,5 až 1 g vzorku. Přidá se 5 ml kyseliny chlorovodíkové (4.1.1.2) (pH roztoku asi 0) a titruje se roztokem jodu (5.1.2), dokud se neobjeví žluté zabarvení. Lze použít také indikátor (např. roztok škrobu nebo tetrachlormethan).

      1. účinné od 1. 1. 20065.1.5 Výpočet

        účinné od 1. 1. 2006Obsah kyseliny thioglykolové se vypočte podle vzorce:

        účinné od 1. 1. 2006

        1. účinné od 1. 1. 2006kde:
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          m =hmotnost zkušebního vzorku (v g),
          n =objem spotřebovaného roztoku jodu (5.1.2).
      1. účinné od 1. 1. 20065.1.6 Poznámky

        účinné od 1. 1. 2006Je-li vypočtený výsledek pro kyselinu thioglykolovou nejméně o 0,1 % nižší než nejvyšší povolená koncentrace, není další stanovení nutné. Jestliže se výsledek rovná nebo je vyšší než povolená maximální koncentrace a kvalitativní stanovení odhalilo přítomnost několika redukčních činidel, je nezbytné provést stanovení plynovou chromatografií.

  1. účinné od 1. 1. 20065.2 Plynová chromatografie
    1. účinné od 1. 1. 20065.2.1 Princip

      účinné od 1. 1. 2006Kyselina thioglykolová se oddělí od pomocných látek vysrážením roztokem octanu kademnatého. Po methylaci diazomethanem, který se buď připraví in situ nebo předem jako roztok v diethyletheru, se methylderivát kyseliny thioglykolové stanoví chromatografií plyn/kapalina s methyl-oktanoátem jako vnitřním standardem.

    1. účinné od 1. 1. 20065.2.2 POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

      účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.2.1 Kyselina thioglykolová, 98 %
      2. účinné od 1. 1. 20065.2.2.2 Kyselina chlorovodíková,
      3. účinné od 1. 1. 20065.2.2.3 Methanol
      4. účinné od 1. 1. 20065.2.2.4 Octan kademnatý, dihydrát, 10% roztok (m/V) ve vodě
      5. účinné od 1. 1. 20065.2.2.5 Methyl-oktanoát, 2% roztok (m/V) v methanolu
      6. účinné od 1. 1. 20065.2.2.6 Acetátový tlumivý roztok (pH 5):
        1. účinné od 1. 1. 2006Octan sodný, trihydrát, 77 g.
        2. účinné od 1. 1. 2006Kyselina octová (ledová), 27,5 g.
        3. účinné od 1. 1. 2006Demineralizovaná voda do konečného objemu jeden litr.
      1. účinné od 1. 1. 20065.2.2.7 Kyselina chlorovodíková, čerstvě připravený 3M roztok v methanolu (5.2.2.3)
      2. účinné od 1. 1. 20065.2.2.8 1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidin
      3. účinné od 1. 1. 20065.2.2.9 Hydroxid sodný, 5M roztok
      4. účinné od 1. 1. 20065.2.2.10 Jod, 0,05M odměrný roztok
      5. účinné od 1. 1. 20065.2.2.11 Diethylether
      6. účinné od 1. 1. 20065.2.2.12 Roztok diazomethanu připravený z N-methyl-N-nitrosotoluen-4-sulfonamidu (Fieser, Reagents for Organic Synthesis (Wiley), 1967)

        účinné od 1. 1. 2006Získaný roztok obsahuje asi 1,5 g diazomethanu ve 100 ml diethyletheru. Protože diazomethan je toxický a velmi nestabilní plyn, je třeba všechny operace provádět v dobře táhnoucí digestoři, a je třeba se vyvarovat použití zábrusové aparatury (pro tento účel jsou k dispozici speciální soupravy).

    1. účinné od 1. 1. 20065.2.3 Přístroje a pomůcky
      1. účinné od 1. 1. 20065.2.3.1 Obvyklé laboratorní vybavení
      2. účinné od 1. 1. 20065.2.3.2 Aparatura pro přípravu diazomethanu pro methylaci in situ (viz Fales, H.M., Jaouni, T.M. a Babashak, J.F., Analyt. Chem. 1973, 45, 2302)
      3. účinné od 1. 1. 20065.2.3.3 Přístroj pro přípravu diazomethanu předem (podle Fiesera)
    1. účinné od 1. 1. 20065.2.4 Příprava vzorku

      účinné od 1. 1. 2006Do centrifugační kyvety na 50 ml se přesně naváží dostatek vzorku, aby obsahoval předpokládané množství 50 až 70 mg kyseliny thioglykolové. Okyselí se několika kapkami kyseliny chlorovodíkové (5.2.2.2), aby se dosáhlo pH asi 3.

      účinné od 1. 1. 2006Přidá se 5 ml demineralizované vody a 10 ml acetátového tlumivýho roztoku (5.2.2.6).

      účinné od 1. 1. 2006Pomocí pH papírku se ověří, zda je hodnota pH asi 5. Poté se přidá 5 ml roztoku octanu kademnatého (5.2.2.4).

      účinné od 1. 1. 2006Vyčká se 10 minut a poté se odstřeďuje nejméně 15 minut při 4000 g. Odstraní se supernatant, který může obsahovat nerozpustný tuk (v případě krémových prostředků). Tento tuk nelze zaměňovat s thioly, které se hromadí jako kompaktní hmota na dně nádobky. Ověří se, že se po přidání několika kapek roztoku octanu kademnatého (5.2.2.4) k supernatantu netvoří sraženina.

      účinné od 1. 1. 2006Jestliže předchozí kvalitativní stanovení neodhalilo přítomnost jiných redukčních činidel než thiolů, ověří se jodometricky, že množství thiolu přítomného v supernatantu nepřekračuje 6 až 8 % původního množství.

      účinné od 1. 1. 2006Do centrifugační zkumavky obsahující sraženinu se přidá 10 ml methanolu (5.2.2.3) a sraženina se jemně rozptýlí tyčinkou. Znovu se odstřeďuje nejméně 15 minut při 4000 g. Supernatant se slije a ověří se, že neobsahuje thioly.

      účinné od 1. 1. 2006Sraženina se ještě jednou stejným postupem promyje.

      účinné od 1. 1. 2006Do téže centrifugační kyvety se přidá

      1. účinné od 1. 1. 2006— 2 ml roztoku methyl-oktanoátu (5.2.2.5),
      2. účinné od 1. 1. 2006— 5 ml kyseliny chlorovodíkové v methanolu (5.2.2.7).

      účinné od 1. 1. 2006Thioly se úplně rozpustí (může zbývat malé množství nerozpustného zbytku pomocných látek).Toto je roztok „S“.

      účinné od 1. 1. 2006Na alikvotním podílu tohoto roztoku se jodometricky ověří, že obsah thiolů činí alespoň 90 % hodnoty získané v bodě 5.1.

    1. účinné od 1. 1. 20065.2.5 Methylace

      účinné od 1. 1. 2006Methylace se provádí buď pomocí přípravy in situ (5.2.5.1), nebo předem připraveným roztokem diazomethanu (5.2.5.2).

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.5.1 Methylace in situ

        účinné od 1. 1. 2006Do methylační aparatury (5.2.3.2) obsahující 1 ml diethyletheru (5.2.2.11) se převede 50 μl roztoku „S“ a methyluje se postupem (5.2.3.2) s asi 300 mg 1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidinu (5.2.2.8). Po 15 minutách (etherický roztok by měl být žlutý, což indikuje nadbytek diazomethanu) se roztok vzorku převede do nádobky na 2 ml opatřené vzduchotěsnou zátkou. Ponechá se v ledničce přes noc. Methylují se dva vzorky současně.

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.5.2 Methylace předem připraveným roztokem diazomethanu

        účinné od 1. 1. 2006Do nádobky na 5 ml opatřené zátkou se převede 1 ml roztoku diazomethanu (5.2.2.12) a poté 50 μl roztoku „S“. Ponechá se v ledničce přes noc.

    1. účinné od 1. 1. 20065.2.6 Příprava standardu

      účinné od 1. 1. 2006Připraví se standardní roztok kyseliny thioglykolové (5.2.2.1) o známé koncentraci, obsahující asi 60 mg čisté kyseliny thioglykolové (5.2.2.1) ve 2 ml.

      účinné od 1. 1. 2006Toto je roztok „E“.

      účinné od 1. 1. 2006Vysrážení, zkouška a methylace se provedou tak, jak je popsáno v bodech 5.2.4 a 5.2.5.

    1. účinné od 1. 1. 20065.2.7 Podmínky pro plynovou chromatografii
      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.1 Kolona
        1. účinné od 1. 1. 2006Typ: nerezová ocel.
        2. účinné od 1. 1. 2006Délka: 2 m.
        3. účinné od 1. 1. 2006Průměr: 3 mm.
      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.2 Náplň

        účinné od 1. 1. 200620 % didecylftalát/Chromosorb WAW, 80 až 100 mesh.

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.3 Detektor

        účinné od 1. 1. 2006Plamenový ionizační. Vhodné nastavení citlivosti elektrometru plamenového ionizačního detektoru je 8 x 10-10 A.

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.4 Plyny
        1. účinné od 1. 1. 2006Nosný plyn: dusík.
        2. účinné od 1. 1. 2006tlak: 2,2 bar,
        3. účinné od 1. 1. 2006průtok: 35 ml/min.
        4. účinné od 1. 1. 2006Pomocný plyn: vodík.
        5. účinné od 1. 1. 2006tlak: 1,8 bar,
        6. účinné od 1. 1. 2006průtok: 15 ml/min.
        7. účinné od 1. 1. 2006Plyny pro detektor: podle specifikace výrobce přístroje.
      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.5 Teplotní podmínky
        1. účinné od 1. 1. 2006Nástřik: 200 °C
        2. účinné od 1. 1. 2006Detektor: 200 °C
        3. účinné od 1. 1. 2006Kolona: 90 °C.
      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.6 Rychlost posuvu papíru v zapisovači

        účinné od 1. 1. 20065 mm/min.

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.7 Nastřikované množství

        účinné od 1. 1. 20063 μl. Provede se pět nástřiků.

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.7.8 Chromatografické podmínky jsou uvedeny pouze jako vodítko. Umožní dosáhnout rozlišení „R“ rovné nebo lepší než 1,5, kde:

        účinné od 1. 1. 2006

        1. účinné od 1. 1. 2006kde
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          r1 a r2 =retenční časy dvou píků (v min.),
          W1 a W2 =šířka píků v polovině výšky píků (v mm),
          d' = rychlost posuvu papíru (v mm/min.).

        účinné od 1. 1. 2006Doporučuje se zvyšovat na závěr chromatografického měření teplotu z 90 °C na 150 °C rychlostí 10 °C za minutu, aby se vyloučily látky, které by mohly rušit následující měření.

    1. účinné od 1. 1. 20065.2.8 Výpočty
      1. účinné od 1. 1. 20065.2.8.1 Koeficient úměrnosti pro kyselinu thioglykolovou

        účinné od 1. 1. 2006Počítá se vzhledem k methyloktanoátu na základě standardní směsi.

        účinné od 1. 1. 2006Označí-li se kyselina thioglykolová jako „t“,

        1. účinné od 1. 1. 2006přičemž
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          kt = její koeficient úměrnosti,
          m't = její hmotnost ve směsi (v mg),
          S't =plocha jejího píku,
        1. účinné od 1. 1. 2006a označí-li se methyloktanoát jako „c“,
        2. účinné od 1. 1. 2006přičemž
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          m'c =jeho hmotnost ve směsi (v mg),
          S'c=plocha jeho píku,
        1. účinné od 1. 1. 2006potom

          účinné od 1. 1. 2006

        účinné od 1. 1. 2006Tento koeficient se liší podle použitého přístroje.

      1. účinné od 1. 1. 20065.2.8.2 Koncentrace kyseliny thioglykolové přítomné ve vzorku

        účinné od 1. 1. 2006Označí-li se kyselina thioglykolová jako „t“,

        1. účinné od 1. 1. 2006přičemž
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          kt = její koeficient úměrnosti,
          St = plocha jejího píku,
        1. účinné od 1. 1. 2006a označí-li se methyloktanoát jako „c“,
        2. účinné od 1. 1. 2006přičemž
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          mc =jeho hmotnost ve směsi (v mg),
          Sc =plocha jeho píku,
          M = hmotnost původního zkušebního vzorku (v mg),
        1. účinné od 1. 1. 2006potom % (m/m) kyseliny thioglykolové přítomné ve vzorku je:

          účinné od 1. 1. 2006

  1. účinné od 1. 1. 20068. OPAKOVATELNOST

    účinné od 1. 1. 2006Pro výrobky obsahující asi 8 % (m/m) kyseliny thioglykolové nesmí rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení na stejném vzorku překročit absolutní hodnotu 0,8 %.

  1. účinné od 1. 1. 200619. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ HEXACHLOROFENU (INN)
    1. účinné od 1. 1. 2006A. KVALITATIVNÍ STANOVENÍ
      1. účinné od 1. 1. 20061. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

        účinné od 1. 1. 2006Tato metoda je vhodná pro všechny kosmetické prostředky.

      1. účinné od 1. 1. 20062. PRINCIP

        účinné od 1. 1. 2006Hexachlorofen ve vzorku se extrahuje ethylacetátem a kvalitativně se stanoví chromatografií na tenké vrstvě.

      1. účinné od 1. 1. 20063. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

        účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

        1. účinné od 1. 1. 20063.1 Kyselina sírová, 4 mol/l
        2. účinné od 1. 1. 20063.2 Celit AW
        3. účinné od 1. 1. 20063.3 Ethylacetát
        4. účinné od 1. 1. 20063.4 Mobilní fáze: Benzen obsahující 1 % (V/V) ledové kyseliny octové.
        5. účinné od 1. 1. 20063.5 Detekční činidlo I:

          účinné od 1. 1. 2006Roztok rhodaminu B: Rozpustí se 100 mg rhodaminu B ve směsi 150 ml diethyletheru, 70 ml absolutního ethanolu a 16 ml vody.

        1. účinné od 1. 1. 20063.6 Detekční činidlo II:

          účinné od 1. 1. 2006Roztok 2,6-dibrom-4-(chlorimino)cyklohexa-2,5-dienonu: 400 mg 2,6-dibrom-4-(chlorimino)cyklohexa-2,5-dienonu se rozpustí ve 100 ml methanolu (připravuje se čerstvý každý den).

          účinné od 1. 1. 2006Roztok uhličitanu sodného: 10 g uhličitanu sodného se rozpustí ve 100 ml demineralizované vody.

        1. účinné od 1. 1. 20063.7 Standardní roztok:

          účinné od 1. 1. 2006Hexachlorofen, 0,05% roztok (m/V) v ethylacetátu

      1. účinné od 1. 1. 20064. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
        1. účinné od 1. 1. 20064.1 TLC desky Kieselgel 254, 200 x 200 mm (nebo ekvivalentní)
        2. účinné od 1. 1. 20064.2 Obvyklé vybavení pro TLC
        3. účinné od 1. 1. 20064.3 Lázeň pro temperaci chromatografické komory udržovaná na teplotě 26 °C
      1. účinné od 1. 1. 20065. PŘÍPRAVA ZKUŠEBNÍHO VZORKU
        1. účinné od 1. 1. 20065.1 1 g homogenizovaného vzorku se důkladně promíchá s 1 g Celitu AW (3.2) a 1 ml kyseliny sírové (3.1).
        2. účinné od 1. 1. 20065.2 Suší se 2 hodiny při 100 °C.
        3. účinné od 1. 1. 20065.3 Nechá se vychladnout a vysušený zbytek se rozdrtí na jemný prášek.
        4. účinné od 1. 1. 20065.4 Dvakrát se extrahuje vždy 10 ml ethylacetátu (3.3), po každé extrakci se odstředí a ethylacetátové vrstvy se sloučí.
        5. účinné od 1. 1. 20065.5 Odpaří se při 60 °C.
        6. účinné od 1. 1. 20065.6 Odparek se rozpustí ve 2 ml ethylacetátu (3.3).
      1. účinné od 1. 1. 20066. POSTUP
        1. účinné od 1. 1. 20066.1 2 μl roztoku zkušebního vzorku (5.6) a 2 μl standardního roztoku (3.7) se nanesou na desku pro chromatografii na tenké vrstvě (4.1).
        2. účinné od 1. 1. 20066.2 Komora (4.3) se nasytí mobilní fází (3.4).
        3. účinné od 1. 1. 20066.3 Deska pro chromatografii na tenké vrstvě se vloží do komory a vyvíjí se do vzdálenosti čela 150 mm.
        4. účinné od 1. 1. 20066.4 Deska pro chromatografii na tenké vrstvě se vyjme z komory a suší se v sušárně s nuceným oběhem vzduchu při teplotě asi 105 °C.
        5. účinné od 1. 1. 20066.5 Detekce

          účinné od 1. 1. 2006Skvrny hexachlorofenu na desce pro chromatografii na tenké vrstvě se detekují způsobem popsaným v bodě 6.5.1 nebo 6.5.2.

          1. účinné od 1. 1. 20066.5.1 Deska se rovnoměrně postříká detekčním činidlem I (3.5). Po 30 minutách se deska pozoruje v UV světle při 254 nm.
          2. účinné od 1. 1. 20066.5.2 Deska se rovnoměrně postříká roztokem 2,6-dibrom-4-(chlorimino)cyklohexa-2,5-dienonu detekčního činidla II (3.6). Následně se deska postříká roztokem uhličitanu sodného (3.6). Deska se po 10 minutách sušení při pokojové teplotě pozoruje v denním světle.
      1. účinné od 1. 1. 20067. INTERPRETACE
        1. účinné od 1. 1. 20067.1 Detekční činidlo I (3.5):

          účinné od 1. 1. 2006Hexachlorofen se detekuje jako namodralá skvrna na žluto-oranžovém fluoreskujícím pozadí a má Rf přibližně 0,5.

        1. účinné od 1. 1. 20067.2 Detekční činidlo II (3.6):

          účinné od 1. 1. 2006Hexachlorofen se detekuje jako blankytně modrá až tyrkysově zbarvená skvrna na bílém pozadí a má Rf přibližně 0,5.

    1. účinné od 1. 1. 2006B. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ
      1. účinné od 1. 1. 20061. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

        účinné od 1. 1. 2006Tato metoda je vhodná pro všechny kosmetické prostředky.

      1. účinné od 1. 1. 20062. DEFINICE

        účinné od 1. 1. 2006Obsah hexachlorofenu ve vzorku stanovený touto metodou se vyjádří v hmotnostních procentech hexachlorofenu.

      1. účinné od 1. 1. 20063. PRINCIP

        účinné od 1. 1. 2006Hexachlorofen se stanovuje po přeměně na methylderivát plynovou chromatografií s detektorem elektronového záchytu.

      1. účinné od 1. 1. 20064. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

        účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

        1. účinné od 1. 1. 20064.1 Ethylacetát
        2. účinné od 1. 1. 20064.2 N-methyl-N-nitroso-p-toluensulfonamid (diazald)
        3. účinné od 1. 1. 20064.3 Diethylether
        4. účinné od 1. 1. 20064.4 Methanol
        5. účinné od 1. 1. 20064.5 2-(2-ethoxyethoxy)ethanol (karbitol)
        6. účinné od 1. 1. 20064.6 Kyselina mravenčí
        7. účinné od 1. 1. 20064.7 Hydroxid draselný, 50% vodný roztok (m/m) (připravuje se vždy čerstvý)
        8. účinné od 1. 1. 20064.8 Hexan pro spektroskopii
        9. účinné od 1. 1. 20064.9 Bromchlorofen (standard č. 1)
        10. účinné od 1. 1. 20064.10 4,4',6,6'-tetrachlor-2,2'-thiodifenol (standard č. 2)
        11. účinné od 1. 1. 20064.11 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (standard č. 3)
        12. účinné od 1. 1. 20064.12 Aceton
        13. účinné od 1. 1. 20064.13 Kyselina sírová, 4M
        14. účinné od 1. 1. 20064.14 Celit AW
        15. účinné od 1. 1. 20064.15 Kyselina mravenčí v ethylacetátu, 10% roztok (V/V)
        16. účinné od 1. 1. 20064.16 Hexachlorofen
      1. účinné od 1. 1. 20065. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
        1. účinné od 1. 1. 20065.1 Obvyklé laboratorní sklo
        2. účinné od 1. 1. 20065.2 Miniaparatura pro přípravu diazomethanu (Analyt. Chem. 1973, 45, 2302-2)
        3. účinné od 1. 1. 20065.3 Plynový chromatograf vybavený detektorem elektronového záchytu se zdrojem 63Ni
      1. účinné od 1. 1. 20066. POSTUP
        1. účinné od 1. 1. 20066.1 Příprava standardního roztoku

          účinné od 1. 1. 2006Standard se zvolí tak, aby neinterferoval se žádnou látkou obsaženou v analyzovaném výrobku jako pomocná látka. Obvykle je nejvhodnější standard č. 1 (4.9).

          1. účinné od 1. 1. 20066.1.1 Do odměrné baňky na 100 ml se naváží asi 50 mg standardu č. 1, 2 nebo 3 přesně (4.9, 4.10 nebo 4.11) a 50 mg hexachlorofenu (4.16). Doplní se na objem ethylacetátem (4.1) (roztok A). 10 ml roztoku A se zředí ethylacetátem (4.1) na 100 ml (roztok B).
          2. účinné od 1. 1. 20066.1.2 Do odměrné baňky na 100 ml se naváží asi 50 mg standardu č. 1, 2 nebo 3 přesně (4.9, 4.10 nebo 4.11). Doplní se na objem ethylacetátem (4.1) (roztok C).
        1. účinné od 1. 1. 20066.2 Příprava vzorku

          účinné od 1. 1. 2006Naváží se asi 1 g homogenizovaného vzorku přesně a důkladně se promíchá s 1 ml kyseliny sírové (4.13), 15 ml acetonu (4.12) a 8 g Celitu AW (4.14). Směs se 30 minut suší vzduchem na vodní lázni, poté se jeden a půl hodiny suší v sušárně s nuceným oběhem vzduchu. Nechá se vychladnout, zbytek se rozdrtí na jemný prášek a převede do skleněné kolony. Eluuje se ethylacetátem (4.1) a jímá se 100 ml. Přidají se 2 ml roztoku vnitřního standardu (roztok C) (6.1.2).

          účinné od 1. 1. 2006(Vzhledem k tomu, že hexachlorofen je obsažen v celé řadě typů výrobků, je důležité před definitivním zaznamenáním výsledků stanovit výtěžek hexachlorofenu při stanovení v dotyčném vzorku tímto postupem. Jsou-li výtěžky nízké, mohou být se souhlasem zúčastněných stran provedeny změny, například změna rozpouštědla (benzen místo ethylacetátu) apod.)

        1. účinné od 1. 1. 20066.3 Methylace vzorku

          účinné od 1. 1. 2006Všechna reakční činidla a aparatura se 2 hodiny chladí na teplotu 0 až 4 °C. Do vnějšího zásobníku diazomethanové aparatury se převede 1,2 ml roztoku připraveného podle bodu 6.2 a 0,1 ml methanolu (4.4). Do středního zásobníku se převede asi 200 mg diazaldu (4.2), přidá se 1 ml karbitolu (4.5) a 1 ml diethyletheru (4.3) a nechá se rozpustit. Aparatura se sestaví, z poloviny se ponoří do lázně o teplotě 0 °C a do středního zásobníku se injekční stříkačkou zavede asi 1 ml vychlazeného roztoku hydroxidu draselného (4.7). Je třeba se přesvědčit, že žluté zbarvení způsobené vzniklým diazomethanem přetrvává. Pokud žluté zbarvení nepřetrvává, methylace se opakuje s dalšími 200 mg diazaldu (4.2).

          účinné od 1. 1. 2006(Přetrvávání tohoto žlutého zbarvení je známkou přebytku diazomethanu, který je nezbytný pro zajištění úplné methylace vzorku.)

          účinné od 1. 1. 2006Aparatura se po 15 minutách vyjme z lázně a ponechá se uzavřená při laboratorní teplotě 12 hodin. Aparatura se otevře, přebytek diazomethanu se odstraní přídavkem několika kapek 10% (V/V) roztoku kyseliny mravenčí v ethylacetátu (4.15), organický roztok se převede do odměrné baňky na 25 ml. Doplní se na objem hexanem (4.8).

          účinné od 1. 1. 20061,5 μl tohoto roztoku se nastříkne do chromatografu.

        1. účinné od 1. 1. 20066.4 Methylace standardu

          účinné od 1. 1. 2006Všechna reakční činidla a aparatura se 2 hodiny chladí na teplotu 0 až 4 °C. Do vnějšího zásobníku diazomethanové aparatury se umístí:

          1. účinné od 1. 1. 20060,2 ml roztoku B (6.1.1),
          2. účinné od 1. 1. 20061 ml ethylacetátu (4.1),
          3. účinné od 1. 1. 20060,1 ml methanolu (4.4).

          účinné od 1. 1. 2006V methylaci se pokračuje tak, jak je popsáno v bodě 6.3. 1,5 μl výsledného roztoku se nastříkne do chromatografu.

      1. účinné od 1. 1. 20067. PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE

        účinné od 1. 1. 2006Kolona musí zaručit rozlišení „R“ rovné nebo lepší než 1,5, kde:

        účinné od 1. 1. 2006

        1. účinné od 1. 1. 2006kde
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          r1 a r2 =retenční časy dvou píků (v min.),
          W1 a W2 =šířky píků v polovině výšky píků (v mm),
          d' = rychlost posuvu papíru (v mm/min.).

        účinné od 1. 1. 2006Jako vhodné se ukázaly následující chromatografické podmínky:

        1. účinné od 1. 1. 2006Kolona: nerezová ocel.
        2. účinné od 1. 1. 2006Délka: 1,7 m.
        3. účinné od 1. 1. 2006Průměr: 3 mm.
        4. účinné od 1. 1. 2006Nosič:
        5. účinné od 1. 1. 2006Chromosorb WAW
        6. účinné od 1. 1. 2006zrnitost: 80 až 100 mesh.
        7. účinné od 1. 1. 2006Stacionární fáze: 10% OV 17.
        8. účinné od 1. 1. 2006Teploty:
        9. účinné od 1. 1. 2006kolona: 280 °C,
        10. účinné od 1. 1. 2006nástřik: 280 °C,
        11. účinné od 1. 1. 2006detektor: 280 °C.
        12. účinné od 1. 1. 2006Nosný plyn: dusík zbavený kyslíku.
        13. účinné od 1. 1. 2006Tlak: 2,3 bar.
        14. účinné od 1. 1. 2006Průtok: 30 ml/min.
      1. účinné od 1. 1. 20068. VÝPOČET
        1. účinné od 1. 1. 20068.1 Koeficient úměrnosti hexachlorofenu

          účinné od 1. 1. 2006Bude odpovídat zvolenému standardu a jeho poměru ve standardní směsi.

          1. účinné od 1. 1. 2006Označí-li se
            1. účinné od 1. 1. 2006h = hexachlorofen,
            2. účinné od 1. 1. 2006kh = jeho koeficient úměrnosti,
            3. účinné od 1. 1. 2006m'h = jeho hmotnost ve směsi (v g),
            4. účinné od 1. 1. 2006A'h = plocha jeho píku,
            5. účinné od 1. 1. 2006s = vybraný standard,
            6. účinné od 1. 1. 2006m's = jeho hmotnost ve směsi (v g),
            7. účinné od 1. 1. 2006A's = plocha jeho píku,
          1. účinné od 1. 1. 2006potom:

            účinné od 1. 1. 2006

        1. účinné od 1. 1. 20068.2 Množství hexachlorofenu ve vzorku
          1. účinné od 1. 1. 2006Označí-li se
            1. účinné od 1. 1. 2006h = hexachlorofen,
            2. účinné od 1. 1. 2006kh = jeho koeficient úměrnosti,
            3. účinné od 1. 1. 2006Ah = plocha jeho píku,
            4. účinné od 1. 1. 2006s = vybraný standard,
            5. účinné od 1. 1. 2006ms = jeho hmotnost ve směsi (v g),
            6. účinné od 1. 1. 2006As = plocha jeho píku,
            7. účinné od 1. 1. 2006M = hmotnost odebraného vzorku (v g),
          1. účinné od 1. 1. 2006potom % (m/m) hexachlorofenu ve vzorku je

            účinné od 1. 1. 2006

      1. účinné od 1. 1. 20068. OPAKOVATELNOST

        účinné od 1. 1. 2006Pro výrobky obsahující asi 0,1 % (m/m) hexachlorofenu nesmí rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení na stejném vzorku překročit absolutní hodnotu 0,005 %.

  1. účinné od 1. 1. 200620. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ TOSYLCHLORAMIDU SODNÉHO, (CHLORAMINU-T)(INN)
    1. účinné od 1. 1. 20061. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

      účinné od 1. 1. 2006V této metodě je popsáno kvantitativní stanovení tosylchloramidu sodného (chloraminu-T) v kosmetických prostředcích chromatografií na tenké vrstvě.

    1. účinné od 1. 1. 20062. DEFINICE

      účinné od 1. 1. 2006Obsah chloraminu-T ve vzorku stanovený touto metodou se vyjádří v hmotnostních procentech (m/m).

    1. účinné od 1. 1. 20063. PRINCIP

      účinné od 1. 1. 2006Chloramin-T se kvantitativně hydrolyzuje na 4-toluensulfonamid varem s kyselinou chlorovodíkovou.

      účinné od 1. 1. 2006Množství vzniklého 4-toluensulfonamidu se po chromatografii na tenké vrstvě stanoví fotodenzitometricky.

    1. účinné od 1. 1. 20064. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

      účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

      1. účinné od 1. 1. 20064.1 Tosylchloramid sodný (chloramin-T)
      2. účinné od 1. 1. 20064.2 Standardní roztok 4-toluensulfonamidu: 50 mg 4-toluensulfonamidu ve 100 ml ethanolu (4.5)
      3. účinné od 1. 1. 20064.3 Kyselina chlorovodíková, 37% (m/m),
      4. účinné od 1. 1. 20064.4 Diethylether
      5. účinné od 1. 1. 20064.5 Ethanol, 96% (V/V)
      6. účinné od 1. 1. 20064.6 Mobilní fáze
      7. účinné od 1. 1. 20064.6.1 Butan-1-ol/ethanol (4.5)/voda (40:4:9, V/V/V), nebo
      8. účinné od 1. 1. 20064.6.2 Chloroform/aceton (6:4, V/V)
      9. účinné od 1. 1. 20064.7 Hotové desky pro chromatografii na tenké vrstvě, silikagel 60, bez fluorescenčního indikátoru
      10. účinné od 1. 1. 20064.8 Manganistan draselný
      11. účinné od 1. 1. 20064.9 Kyselina chlorovodíková, 15% (m/m)
      12. účinné od 1. 1. 20064.10 Detekční činidlo: 2-toluidin, 1% roztok (m/V) v ethanolu (4.5)
    1. účinné od 1. 1. 20065. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
      1. účinné od 1. 1. 20065.1 Obvyklé laboratorní vybavení
      2. účinné od 1. 1. 20065.2 Obvyklé vybavení pro chromatografii na tenké vrstvě
      3. účinné od 1. 1. 20065.3 Fotodenzitometr
    1. účinné od 1. 1. 20066. POSTUP
      1. účinné od 1. 1. 20066.1 Hydrolýza

        účinné od 1. 1. 2006Do baňky na 50 ml s kulatým dnem se naváží asi 1 g vzorku přesně (m). Přidá se 5 ml vody a 5 ml kyseliny chlorovodíkové (4.3) a vaří se jednu hodinu pod zpětným chladičem. Horká suspenze se okamžitě převede vodou do odměrné baňky na 50 ml. Nechá se vychladnout a doplní po rysku vodou. Odstřeďuje se 5 minut alespoň při 3000 ot./min a supernatant se zfiltruje.

      1. účinné od 1. 1. 20066.2 Extrakce
        1. účinné od 1. 1. 20066.2.1 Odebere se 30 ml filtrátu a extrahuje se třikrát 15 ml diethyletheru (4.4). V případě potřeby se etherové fáze vysuší a shromáždí v 50 ml odměrné baňce. Doplní se na objem diethyletherem (4.4).
        2. účinné od 1. 1. 20066.2.2 Odebere se 25 ml vysušeného etherického extraktu a odpaří se do sucha v proudu dusíku. Odparek se rozpustí v 1 ml ethanolu (4.5).
      1. účinné od 1. 1. 20066.3 Chromatografie na tenké vrstvě
        1. účinné od 1. 1. 20066.3.1 20 μl ethanolického roztoku odparku (6.2.2) se nanese na desku pro chromatografii na tenké vrstvě (4.7).

          účinné od 1. 1. 2006Současně a stejným způsobem se nanese 8, 12, 16 a 20 μl standardních roztoků 4-toluensulfonamidu (4.2).

        1. účinné od 1. 1. 20066.3.2 Nechá se vyvíjet v mobilní fázi (4.6.1 nebo 4.6.2) až čelo dosáhne vzdálenosti asi 150 mm.
        2. účinné od 1. 1. 20066.3.3 Po úplném odpaření mobilní fáze se deska umístí na 2 až 3 minuty do atmosféry par chloru, vzniklých nalitím asi 100 ml kyseliny chlorovodíkové (4.9) na asi 2 g manganistanu draselného (4.8) v uzavřené nádobě. Přebytek chloru se odstraní zahřátím desky na 100 °C po dobu 5 minut. Poté se deska postříká detekčním činidlem (4.10).
      1. účinné od 1. 1. 20066.4 Měření

        účinné od 1. 1. 2006Přibližně po jedné hodině se fialové skvrny proměří fotodenzitometrem při 525 nm.

      1. účinné od 1. 1. 20066.5 Vynesení kalibračních křivek

        účinné od 1. 1. 2006Hodnoty maximálních výšek píků stanovených pro čtyři skvrny 4-toluensulfonamidu se vynesou proti odpovídajícím množstvím 4-toluensulfonamidu (tj. 4, 6, 8 a 10 μg 4-toluensulfonamidu na skvrnu).

    1. účinné od 1. 1. 20067. POZNÁMKA

      účinné od 1. 1. 2006Metodu je možno ověřit pomocí 0,1 nebo 0,2% roztoku (m/V) chloraminu-T (4.1), který se podrobí stejnému postupu jako vzorek (6).

    1. účinné od 1. 1. 20068. VÝPOČET

      účinné od 1. 1. 2006Obsah chloraminu-T ve vzorku vyjádřený v hmotnostních procentech se vypočte takto

      účinné od 1. 1. 2006

      1. účinné od 1. 1. 2006kde
        účinné od 1. 1. 2006
        Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
        1,33 =přepočítávací faktor 4-toluensulfonamid/Chloramin-T,
        a =množství 4-toluensulfonamidu ve vzorku, odečtené z kalibračních křivek (v μg),
        m =hmotnost odebraného vzorku (v g).
    1. účinné od 1. 1. 20069. OPAKOVATELNOST

      účinné od 1. 1. 2006Pro výrobky obsahující asi 0,2 % (m/m) chloraminu-T nesmí rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení na stejném vzorku překročit absolutní hodnotu 0,03 %.

  1. účinné od 1. 1. 200621. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ CELKOVÉHO FLUORU V ZUBNÍCH PASTÁCH
    1. účinné od 1. 1. 20061. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

      účinné od 1. 1. 2006Tato metoda je určena ke kvantitativnímu stanovení celkového fluoru v zubních pastách. Je vhodná pro obsah nepřesahující 0,25 %.

    1. účinné od 1. 1. 20062. DEFINICE

      účinné od 1. 1. 2006Obsah fluoru ve vzorku stanovený touto metodou se vyjádří v hmotnostních procentech.

    1. účinné od 1. 1. 20063. PRINCIP

      účinné od 1. 1. 2006Stanovení se provádí plynovou chromatografií. Fluor se ze sloučenin obsahujících fluor převede na triethylfluorsilan (TEFS) přímou reakcí s chlortriethylsilanem (TECS) v kyselém prostředí a současně se extrahuje xylenem obsahujícím cyklohexan jako vnitřní standard.

    1. účinné od 1. 1. 20064. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

      účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

      1. účinné od 1. 1. 20064.1 Fluorid sodný, sušený při 120 °C do konstantní hmotnosti
      2. účinné od 1. 1. 20064.2 Voda, dvakrát destilovaná nebo ekvivalentní kvality
      3. účinné od 1. 1. 20064.3 Kyselina chlorovodíková,
      4. účinné od 1. 1. 20064.4 Cyklohexan (C6H12)
      5. účinné od 1. 1. 20064.5 Xylen nevykazující na chromatogramu při chromatografii za stejných podmínek jako vzorek (6.1) žádné píky před píkem rozpouštědla. V případě potřeby se čistí destilací (5.8).
      6. účinné od 1. 1. 20064.6 Chlortriethylsilan (TECS Merck nebo ekvivalentní)
      7. účinné od 1. 1. 20064.7 Standardní roztoky fluoru
        1. účinné od 1. 1. 20064.7.1 Zásobní roztok, 0,250 mg F- /ml. Naváží se přesně 138,1 mg fluoridu sodného (4.1) a rozpustí se ve vodě (4.2). Roztok se kvantitativně převede do odměrné baňky na 250 ml (5.5). Zředí se po rysku vodou (4.2) a promíchá.
        2. účinné od 1. 1. 20064.7.2 Zředěný zásobní roztok, 0,050 mg F- /ml. Do odměrné baňky na 100 ml (5.5) se pipetou převede 20 ml zásobního roztoku (4.7.1). Zředí se po rysku vodou a promíchá.
      1. účinné od 1. 1. 20064.8 Roztok vnitřního standardu

        účinné od 1. 1. 2006Smíchá se 1 ml cyklohexanu (4.4) a 5 ml xylenu (4.5).

      1. účinné od 1. 1. 20064.9 Roztok chlortriethylsilan/vnitřní standard

        účinné od 1. 1. 2006Do odměrné baňky na 10 ml se pipetou (5.7) převede 0,6 ml TECS (4.6) a 0,12 ml roztoku vnitřního standardu (4.8). Zředí se xylenem po rysku a promíchá. Připravuje se čerstvý každý den.

      1. účinné od 1. 1. 20064.10 Kyselina chloristá, 70% (m/V)
      2. účinné od 1. 1. 20064.11 Kyselina chloristá, 20% (m/V) ve vodě (4.2)
    1. účinné od 1. 1. 20065. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
      1. účinné od 1. 1. 20065.1 Obvyklé laboratorní vybavení
      2. účinné od 1. 1. 20065.2 Plynový chromatograf vybavený plamenovým ionizačním detektorem
      3. účinné od 1. 1. 20065.3 Míchačka Vortex nebo ekvivalentní
      4. účinné od 1. 1. 20065.4 Třepačka Bühler, typ SMB1 nebo ekvivalentní
      5. účinné od 1. 1. 20065.5 Odměrné baňky na 100 a 250 ml z polypropylenu
      6. účinné od 1. 1. 20065.6 Centrifugační kyvety (skleněné) na 20 ml se šroubovacími uzávěry potaženými teflonem, Sovirel typ 611-56 nebo ekvivalentní. Kyvety a uzávěry se čistí louhováním v kyselině chloristé (4.11) několik hodin, poté se pětkrát vypláchnou vodou (4.2) a nakonec se suší při 100 °C.
      7. účinné od 1. 1. 20065.7 Pipety s nastavitelným objemem na 50 až 200 μl, se špičkami z plastu na jedno použití.
      8. účinné od 1. 1. 20065.8 Destilační přístroj s třídílnou Schneiderovou kolonou nebo ekvivalentní kolonou Vigreux.
    1. účinné od 1. 1. 20066. POSTUP
      1. účinné od 1. 1. 20066.1 Analýza vzorku
        1. účinné od 1. 1. 20066.1.1 Vybere se dosud neotevřená tuba se zubní pastou, rozřízne se a veškerý obsah se vyjme. Převede se do nádoby z plastu, důkladně se promíchá a uchovává se za podmínek, při nichž nedojde ke znehodnocení vzorku.
        2. účinné od 1. 1. 20066.1.2 Do centrifugační zkumavky (5.6) se naváží přesně 150 mg vzorku (m), přidá se 5 ml vody (4.2) a zhomogenizuje se (5.3).
        3. účinné od 1. 1. 20066.1.3 Přidá se 1 ml xylenu (4.5).
        4. účinné od 1. 1. 20066.1.4 Po kapkách se přidá 5 ml kyseliny chlorovodíkové (4.3) a zhomogenizuje se (5.3).
        5. účinné od 1. 1. 20066.1.5 Do centrifugační kyvety (5.6) se pipetou přidá 0,5 ml roztoku chlortriethylsilan/vnitřní standard (4.9).
        6. účinné od 1. 1. 20066.1.6 Kyveta se uzavře šroubovacím uzávěrem (5.6) a důkladně se třepe 45 minut na třepačce (5.4) nastavené na 150 kmitů za minutu.
        7. účinné od 1. 1. 20066.1.7 Odstřeďuje se 10 minut při takové rychlosti, aby došlo ke zřetelné separaci fází, kyveta se otevře, organická vrstva se oddělí a 3 μl organické fáze se nastříknou do kolony plynového chromatografu (5.2).
      2. účinné od 1. 1. 2006Poznámka:

        účinné od 1. 1. 2006Eluce všech složek trvá asi 20 minut.

        1. účinné od 1. 1. 20066.1.8 Nástřik se opakuje, vypočte se průměrný poměr ploch píků (ATEFS/ACH), a odpovídající obsah fluoru (v mg (m1)) se odečte z kalibrační křivky (6.3).
        2. účinné od 1. 1. 20066.1.9 Celkový obsah fluoru ve vzorku (v hmotnostních procentech fluoru) se vypočte způsobem popsaným v bodě 7.
    1. účinné od 1. 1. 20066.2 Chromatografické podmínky
      1. účinné od 1. 1. 20066.2.1 Kolona: nerezová ocel.

        účinné od 1. 1. 2006Délka: 1,8 m.

        účinné od 1. 1. 2006Průměr: 3 mm.

        účinné od 1. 1. 2006Nosič: Gaschrom Q, 80 až 100 mesh.

        účinné od 1. 1. 2006Stacionární fáze: silikonový olej DC 200 nebo ekvivalentní, 20 %. Kolona se kondicionuje přes noc při 100 °C (při průtoku nosného plynu 25 ml dusíku za minutu), což se opakuje každou noc. Po každém čtvrtém nebo pátém nástřiku se kolona znovu kondicionuje zahřátím na 100 °C na dobu 30 minut.

        účinné od 1. 1. 2006Teplotní režim:

        1. účinné od 1. 1. 2006kolona: 70 °C,
        2. účinné od 1. 1. 2006nástřik: 150 °C,
        3. účinné od 1. 1. 2006detektor. 250 °C.

        účinné od 1. 1. 2006Průtok nosného plynu: 35 ml dusíku za minutu.

    1. účinné od 1. 1. 20066.3 Kalibrační křivka
      1. účinné od 1. 1. 20066.3.1 Do řady šesti centrifugačních kyvet (5.6) se pipetou odměří 0, 1, 2, 3, 4 a 5 ml zředěného standardního roztoku fluoridu (4.7.2). Každá zkumavka se doplní vodou (4.2) na objem 5 ml.
      2. účinné od 1. 1. 20066.3.2 Pokračuje se tak, jak je popsáno v bodech 6.1.3 až 6.1.6 včetně.
      3. účinné od 1. 1. 20066.3.3 Do kolony plynového chromatografu (5.2) se nastříknou 3 μl organické fáze.
      4. účinné od 1. 1. 20066.3.4 Nástřik se opakuje a vypočítá se průměrný poměr ploch píků (ATEFS/ACH).
      5. účinné od 1. 1. 20066.3.5 Vynese se kalibrační křivka závislosti hmotnosti fluoru (v mg) ve standardních roztocích (6.3.1) a poměr ploch píku (ATEFS/ACH) změřených podle bodu 6.3.4. Pomocí regresní analýzy se provede nejlepší proložení bodů křivky přímkou.
    1. účinné od 1. 1. 20067. VÝPOČET

      účinné od 1. 1. 2006Koncentrace celkového fluoru ve vzorku (v hmotnostních procentech fluoru) (% (m/m) F) je dána vztahem

      účinné od 1. 1. 2006

      1. účinné od 1. 1. 2006kde
        účinné od 1. 1. 2006
        Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
        m =zkušební vzorek (6.1.2) (v mg),
        m1 = množství F (v mg) odečtené z kalibrační křivky (6.1.8).
    1. účinné od 1. 1. 20068. OPAKOVATELNOST

      účinné od 1. 1. 2006Pro výrobky obsahující asi 0,15 % (m/m) fluoru nesmí rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení na stejném vzorku překročit absolutní hodnotu 0,012 %.

  1. účinné od 1. 1. 200622. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ ORGANICKÝCH SLOUČENIN RTUTI

    účinné od 1. 1. 2006ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

    účinné od 1. 1. 2006Dále popsanou metodu lze použít pro kvalitativní a kvantitativní stanovení organických derivátů rtuti používaných jako konzervační přísady v kosmetických prostředcích k líčení a odličování očí. Metodu lze použít pro thiomersal (INN), merthiolát a fenylrtuťnaté soli.

    1. účinné od 1. 1. 2006A. KVALITATIVNÍ STANOVENÍ
      1. účinné od 1. 1. 20061. PRINCIP

        účinné od 1. 1. 2006Organické sloučeniny rtuti se převedou na komplex s 1,5-difenyl-3-thiokarbazonem. Po extrakci dithizonátu tetrachlormethanem se provede chromatografie na tenké vrstvě na silikagelu. Dithizonáty se na chromatogramu projeví jako oranžově zbarvené skvrny.

      1. účinné od 1. 1. 20062. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

        účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

        1. účinné od 1. 1. 20062.1 Kyselina sírová, 25% (V/V)
        2. účinné od 1. 1. 20062.2 1,5-difenyl-3-thiokarbazon (dithizon): 0,8 mg ve 100 ml tetrachlormethanu (2.4)
        3. účinné od 1. 1. 20062.3 Dusík
        4. účinné od 1. 1. 20062.4 Tetrachlormethan
        5. účinné od 1. 1. 20062.5 Mobilní fáze: hexan/aceton, 90:10 (V/V)
        6. účinné od 1. 1. 20062.6 Standardní roztok, 0,001 % ve vodě:
          1. účinné od 1. 1. 20062-(ethylmercuriothio)benzoátu sodného,
          2. účinné od 1. 1. 2006chloridu ethylrtuti nebo chloridu methylrtuti,
          3. účinné od 1. 1. 2006dusičnanu fenylrtuti nebo octanu fenylrtuti,
          4. účinné od 1. 1. 2006chloridu rtuťnatého nebo octanu rtuťnatého.
        1. účinné od 1. 1. 20062.7 Hotové silikagelové desky (např. Merck 5721 nebo ekvivalentní)
        2. účinné od 1. 1. 20062.8 Chlorid sodný
      1. účinné od 1. 1. 20063. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
        1. účinné od 1. 1. 20063.1 Obvyklé laboratorní vybavení
        2. účinné od 1. 1. 20063.2 Obvyklé vybavení pro TLC
        3. účinné od 1. 1. 20063.3 Filtr pro separaci fází
      1. účinné od 1. 1. 20064. POSTUP
        1. účinné od 1. 1. 20064.1 Extrakce
          1. účinné od 1. 1. 20064.1.1 1 g vzorku se zředí v centrifugační kyvetě 20 ml destilované vody. Co nejvíce se rozptýlí a zahřeje na vodní lázni na 60 °C. Přidají se 4 g chloridu sodného (2.8). Protřepe se. Nechá se vychladnout.
          2. účinné od 1. 1. 20064.1.2 Odstřeďuje se alespoň 20 minut při 4500 ot./min, aby se oddělila větší část pevné fáze od kapaliny. Přefiltruje se do dělicí nálevky a přidá se 0,25 ml roztoku kyseliny sírové (2.1).
          3. účinné od 1. 1. 20064.1.3 Několikrát se extrahuje 2 až 3 ml roztoku dithizonu (2.2), dokud nezůstane poslední organická fáze zelená.
          4. účinné od 1. 1. 20064.1.4 Všechny organické fáze se postupně přefiltrují přes filtr pro separaci fází (3.3).
          5. účinné od 1. 1. 20064.1.5 Odpaří se do sucha v proudu dusíku (2.3).
          6. účinné od 1. 1. 20064.1.6 Rozpustí se v 0,5 ml tetrachlormethanu (2.4). Roztok se okamžitě použije způsobem popsaným v bodě 4.2.1.
        1. účinné od 1. 1. 20064.2 Separace a kvalitativní stanovení
          1. účinné od 1. 1. 20064.2.1 Na silikagelovou desku (2.7) se ihned nanese 50 μl roztoku v tetrachlormethanu, připraveného podle bodu 4.1.6. Současně se 10 ml standardního roztoku (2.6) podrobí postupu popsanému v bodě 4.1 a 50 μl získaného roztoku se nanese na tutéž desku.
          2. účinné od 1. 1. 20064.2.2 Deska se umístí do mobilní fáze (2.5) a mobilní fáze se nechá vystoupit do výšky 150 mm. Organické sloučeniny rtuti se objeví jako oranžové skvrny, jejichž barva je stálá, jestliže se okamžitě po odpaření rozpouštědla přikryjí skleněnou deskou.

          účinné od 1. 1. 2006Lze získat například následující hodnoty Rf:

          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          RfBarva
          Thiomersal0,33Oranžová
          Chlorid ethylrtuti0,29Oranžová
          Chlorid methylrtuti0,29Oranžová
          Soli fenylrtuti0,21Oranžová
          Rtuťnaté soli0,10Oranžová
          Octan rtuťnatý0,10Oranžová
          1,5-difenyl-3-thiokarbazon0,09Růžová
    1. účinné od 1. 1. 2006B. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ
      1. účinné od 1. 1. 20061. DEFINICE

        účinné od 1. 1. 2006Obsah organických sloučenin rtuti stanovený touto metodou se vyjádří v hmotnostních procentech (m/m) rtuti ve vzorku.

      1. účinné od 1. 1. 20062. PRINCIP

        účinné od 1. 1. 2006Metoda je založena na měření celkového obsahu přítomné rtuti. Je proto nezbytné se nejprve ujistit, že není přítomna anorganická rtuť, a identifikovat organické sloučeniny rtuti přítomné ve vzorku. Po mineralizaci se uvolněná rtuť stanoví bezplamenovou atomovou absorpcí.

      1. účinné od 1. 1. 20063. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

        účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

        1. účinné od 1. 1. 20063.1 Koncentrovaná kyselina dusičná,
        2. účinné od 1. 1. 20063.2 Koncentrovaná kyselina sírová,
        3. účinné od 1. 1. 20063.3 Redestilovaná voda
        4. účinné od 1. 1. 20063.4 Manganistan draselný, 7% roztok (m/V)
        5. účinné od 1. 1. 20063.5 Hydroxylamoniumchlorid, 1,5% roztok (m/V)
        6. účinné od 1. 1. 20063.6 Peroxodisíran draselný, 5% roztok (m/V)
        7. účinné od 1. 1. 20063.7 Chlorid cínatý, 10% roztok (m/V)
        8. účinné od 1. 1. 20063.8 Koncentrovaná kyselina chlorovodíková,
        9. účinné od 1. 1. 20063.9 Skelná vata impregnovaná chloridem palladnatým, 1% (m/m)
      1. účinné od 1. 1. 20064. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
        1. účinné od 1. 1. 20064.1 Obvyklé laboratorní vybavení
        2. účinné od 1. 1. 20064.2 Přístroj pro stanovení rtuti bezplamenovou atomovou absorpční spektrometrií (technika generování studených par) včetně potřebného skleněného nádobí. Optická dráha kyvety alespoň 100 mm.
      1. účinné od 1. 1. 20065. POSTUP

        účinné od 1. 1. 2006Zachovávají se všechna bezpečnostní opatření obvyklá pro stopovou analýzu rtuti.

        1. účinné od 1. 1. 20065.1 Rozklad
          1. účinné od 1. 1. 20065.1.1 Naváží se 150 mg vzorku přesně (m). Přidá se 10 ml kyseliny dusičné (3.1) a ponechá se působit tři hodiny ve vzduchotěsné nádobce ve vodní lázni při 55 °C, v pravidelných intervalech se protřepává. Současně se provede slepý pokus s reakčními činidly.
          2. účinné od 1. 1. 20065.1.2 Po vychladnutí se přidá 10 ml kyseliny sírové (3.2) a ještě jednou se zahřívá 30 minut ve vodní lázni vyhřáté na 55 °C.
          3. účinné od 1. 1. 20065.1.3 Nádoba se vloží do ledové lázně a opatrně se přidá 20 ml vody (3.3).
          4. účinné od 1. 1. 20065.1.4 Po dávkách se přidají 2 ml 7% roztoku manganistanu draselného (3.4), dokud roztok nezůstane zbarvený. Vrátí se na dalších 15 minut do vodní lázně vyhřáté na 55 °C.
          5. účinné od 1. 1. 20065.1.5 Přidají se 4 ml roztoku peroxodisíranu draselného (3.6). V zahřívání na vodní lázni při 55 °C se pokračuje po dobu 30 minut.
          6. účinné od 1. 1. 20065.1.6 Nechá se vychladnout a obsah se převede do odměrné baňky na 100 ml. Nádobka se vypláchne 5 ml roztoku hydroxylamonium-chloridu (3.5) a poté čtyřikrát 10 ml vody (3.3). Roztok by se měl úplně odbarvit. Doplní se po rysku vodou (3.3).
        1. účinné od 1. 1. 20065.2 Kvantitativní stanovení
          1. účinné od 1. 1. 20065.2.1 10 ml zkušebního roztoku (5.1.6) se převede do skleněné nádobky pro stanovení rtuti technikou generování studených par (4.2). Zředí se 100 ml vody (3.3) a následně se přidá 5 ml kyseliny sírové (3.2) a 5 ml roztoku chloridu cínatého (3.7). Po každém přídavku se promíchá. Vyčká se 30 sekund, aby se veškeré ionty rtuti zredukovaly na kovovou rtuť, a odečte se výsledná hodnota (n).
          2. účinné od 1. 1. 20065.2.2 Skelná vata impregnovaná chloridem paladnatým (3.9) se vloží mezi redukční nádobku a průtočnou kyvetu přístroje (4.2). Postup podle bodu 5.2.1 se opakuje a odečte se výsledná hodnota. Pokud hodnota není nulová, mineralizace byla neúplná a analýza se musí opakovat.
      1. účinné od 1. 1. 20067. VÝPOČET
        1. účinné od 1. 1. 2006Označí-li se
          1. účinné od 1. 1. 2006m = hmotnost zkušebního vzorku (v mg)
          2. účinné od 1. 1. 2006n = množství rtuti odečtené na přístroji (v μg)

        účinné od 1. 1. 2006Množství rtuti vyjádřené v hmotnostních procentech rtuti se vypočte ze vzorce:

        účinné od 1. 1. 2006

      1. účinné od 1. 1. 20067. POZNÁMKY
        1. účinné od 1. 1. 20067.1 Ke zlepšení mineralizace může být nezbytné začít zředěním vzorku.
        2. účinné od 1. 1. 20067.2 Je-li podezření, že se rtuť absorbuje na substrát, mělo by se provést kvantitativní stanovení metodou standardních přídavků.
      1. účinné od 1. 1. 20068. OPAKOVATELNOST

        účinné od 1. 1. 2006Pro výrobky obsahující asi 0,007 % (m/m) rtuti nesmí rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení na stejném vzorku překročit absolutní hodnotu 0,00035 %.

  1. účinné od 1. 1. 200623. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ ALKALICKÝCH SULFIDŮ A SULFIDŮ KOVŮ ALKALICKÝCH ZEMIN
    1. účinné od 1. 1. 20061. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

      účinné od 1. 1. 2006V této metodě je popsáno kvantitativní stanovení sulfidů přítomných v kosmetických prostředcích. Přítomnost thiolů nebo jiných redukčních činidel (včetně siřičitanů) neruší.

    1. účinné od 1. 1. 20062. DEFINICE

      účinné od 1. 1. 2006Koncentrace sulfidů stanovená touto metodou se vyjádří v hmotnostních procentech síry.

    1. účinné od 1. 1. 20063. PRINCIP

      účinné od 1. 1. 2006V okyseleném prostředí se sirovodík odvede proudem dusíku a poté se vysráží ve formě sulfidu kademnatého. Ten se odfiltruje, propláchne a stanoví jodometricky.

    1. účinné od 1. 1. 20064. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

      účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

      1. účinné od 1. 1. 20064.1 Koncentrovaná kyselina chlorovodíková,
      2. účinné od 1. 1. 20064.2 Thiosíran sodný, 0,1 mol/l odměrný roztok
      3. účinné od 1. 1. 20064.3 Jod, 0,05 mol/l odměrný roztok
      4. účinné od 1. 1. 20064.4 Sulfid sodný
      5. účinné od 1. 1. 20064.5 Octan kademnatý
      6. účinné od 1. 1. 20064.6 Koncentrovaný amoniak,
      7. účinné od 1. 1. 20064.7 Amoniakální roztok octanu kademnatého: 10 g octanu kademnatého (4.5) se rozpustí v přibližně 50 ml vody. Přidává se amoniak (4.6), dokud se sraženina nerozpustí (tj. přibližně 20 ml). Doplní se vodou po rysku do 100 ml.
      8. účinné od 1. 1. 20064.8 Dusík
      9. účinné od 1. 1. 20064.9 Roztok amoniaku M
    1. účinné od 1. 1. 20065. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
      1. účinné od 1. 1. 20065.1 Obvyklé laboratorní vybavení
      2. účinné od 1. 1. 20065.2 Tříhrdlá zábrusová baňka na 100 ml s kulatým dnem
      3. účinné od 1. 1. 20065.3 Dvě Erlenmeyrovy baňky se zábrusem na 150 ml, s trubičkou pro přívod a odvod plynu.
      4. účinné od 1. 1. 20065.4 Jedna nálevka s dlouhým stonkem
    1. účinné od 1. 1. 20066. POSTUP
      1. účinné od 1. 1. 20066.1 Uvolnění sulfidů
        1. účinné od 1. 1. 20066.1.1 Použije se dosud neotevřené balení prostředku. Do baňky s kulatým dnem (5.2) se přesně naváží množství výrobku (m) (vyjádřeno v g), které odpovídá nejvýše 30 mg sulfidových iontů. Přidá se 60 ml vody a 2 kapky odpěňovače.
        2. účinné od 1. 1. 20066.1.2 Do obou Erlenmeyerových baněk (5.3) se převede po 50 ml roztoku (4.7).
        3. účinné od 1. 1. 20066.1.3 Na tříhrdlou baňku (5.2) se připojí dělicí nálevka, trubice pro přívod a odvod plynu. Trubice pro odvod plynu se připojí pomocí hadiček z PVC na Erlenmeyerovy baňky (5.3) řazené za sebou.
        4. účinné od 1. 1. 2006Poznámka: Aparatura na uvolnění sulfidů musí projít následující zkouškou těsnosti: za stejných zkušebních podmínek se prostředek, který má být zkoumán, nahradí 10 ml roztoku sulfidu (připraveného podle bodu 4.4), obsahujícího „X mg“ sulfidu (stanoví se jodometricky). Nechť „Y“ je počet miligramů sulfidu zjištěný na konci této operace. Rozdíl mezi množstvím „X“ a „Y“ nesmí překročit 3 %.
        1. účinné od 1. 1. 20066.1.4 Pro odstranění vzduchu se nechá baňkou s kulatým dnem (5.2) 15 minut procházet dusík (4.8) rychlostí 2 bublinky za sekundu.
        2. účinné od 1. 1. 20066.1.5 Baňka s kulatým dnem se ohřeje na 85 ± 5 °C.
        3. účinné od 1. 1. 20066.1.6 Proud dusíku (4.8) se zastaví a po kapkách se přidá 40 ml kyseliny chlorovodíkové (4.1).
        4. účinné od 1. 1. 20066.1.7 Proud dusíku (4.8) se obnoví po přidání téměř veškeré kyseliny, ponechá se minimální množství kapaliny, aby se zamezilo úniku sirovodíku.
        5. účinné od 1. 1. 20066.1.8 Po 30 minutách se ohřev přeruší. Baňka (5.2) se nechá nejméně hodinu a půl chladnout za stálého proudu dusíku (4.8).
      1. účinné od 1. 1. 20066.2 Titrace
        1. účinné od 1. 1. 20066.2.1 Sraženina sulfidu kademnatého se odfiltruje přes nálevku s dlouhým stonkem (5.4).
        2. účinné od 1. 1. 20066.2.2 Erlenmeyerovy baňky (5.3) se nejprve propláchnou roztokem amoniaku (4.9) a kapalina se nalije na filtr. Poté se vypláchnou destilovanou vodou a voda se použije k promytí sraženiny zadržované na filtru.
        3. účinné od 1. 1. 20066.2.3 Promývání sraženiny se dokončí promytím dalšími 100 ml vody.
        4. účinné od 1. 1. 20066.2.4 Papírový filtr se vloží do první Erlenmeyerovy baňky, která obsahovala sraženinu. Přidá se 25 ml (n1) roztoku jodu (4.3), přibližně 20 ml kyseliny chlorovodíkové (4.1) a 50 ml destilované vody.
        5. účinné od 1. 1. 20066.2.5 Nadbytek jodu se stanoví roztokem thiosíranu sodného (n2) (4.2).
    1. účinné od 1. 1. 20067. VÝPOČET

      účinné od 1. 1. 2006Obsah sulfidů ve vzorku vyjádřený v hmotnostních procentech síry se vypočte podle následujícího vzorce:

      účinné od 1. 1. 2006

      1. účinné od 1. 1. 2006kde:
        účinné od 1. 1. 2006
        Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
        n1 = použité množství odměrného roztoku jodu (4.3) (v mililitrech),
        x1 = molarita tohoto roztoku,
        n2 =použité množství odměrného roztoku thiosíranu sodného (4.2) (v mililitrech),
        x2 = molarita tohoto roztoku,
        m = hmotnost zkušebního vzorku (v g).
    1. účinné od 1. 1. 20068. OPAKOVATELNOST

      účinné od 1. 1. 2006Pro výrobky obsahující asi 2 % (m/m) sulfidů nesmí rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení na stejném vzorku překročit absolutní hodnotu 0,2 %.

  1. účinné od 1. 1. 200624. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ 2,3-DIHYDROXYPROPYL-4-AMINOBENZOÁTU
    1. účinné od 1. 1. 2006A. KVALITATIVNÍ STANOVENÍ
      1. účinné od 1. 1. 20061. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

        účinné od 1. 1. 2006Tato metoda slouží ke kvalitativnímu stanovení 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu (glycerol-1-(4-aminobenzoátu)). Slouží rovněž ke kvalitativnímu stanovení ethyl-4-aminobenzoátu (benzokainu INN), který může být přítomen jako nečistota.

      1. účinné od 1. 1. 20062. PRINCIP

        účinné od 1. 1. 2006Kvalitativní stanovení se provádí chromatografií na tenké vrstvě

        účinné od 1. 1. 2006s použitím silikagelu a fluorescentního indikátoru a důkazem volné primární aminoskupiny prostřednictvím tvorby diazobarviva na desce.

      1. účinné od 1. 1. 20063. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

        účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

        1. účinné od 1. 1. 20063.1 Směs rozpouštědel: cyklohexan/propan-2-ol/stabilizovaný dichlormethan 48/64/9 (V/V/V).
        2. účinné od 1. 1. 20063.2 Mobilní fáze: petrolether (40-60)/benzen/aceton/roztok hydroxidu amonného (alespoň 25 % amoniaku): 35/35/35/1 (V/V/V/V).
        3. účinné od 1. 1. 20063.3 Detekční činidlo: a) dusitan sodný: 1 g ve 100 ml 1M HCl (připravený těsně před použitím),
          1. účinné od 1. 1. 2006b) 2-naftol: 0,2 g ve 100 ml 1M hydroxidu draselného.
        1. účinné od 1. 1. 20063.4 Standardní roztoky:

          účinné od 1. 1. 20062,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoát: 0,05 g ve 100 ml směsného rozpouštědla 3.1;

          účinné od 1. 1. 2006ethyl-4-aminobenzoát: 0,05 g ve 100 ml směsného rozpouštědla 3.1.

        1. účinné od 1. 1. 20063.5 Silikagelové desky 60 F254, o tloušťce vrstvy 0,25 mm, 200 mm x 200 mm.
      1. účinné od 1. 1. 20064. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
        1. účinné od 1. 1. 20064.1 Obvyklé zařízení pro chromatografii na tenké vrstvě
        2. účinné od 1. 1. 20064.2 Ultrazvuková lázeň
        3. účinné od 1. 1. 20064.3 Filtr Millipore FH 0,5 μm nebo ekvivalentní
      1. účinné od 1. 1. 20065. POSTUP
        1. účinné od 1. 1. 20065.1 Příprava vzorku

          účinné od 1. 1. 2006Do odměrné baňky s uzávěrem na 10 ml se naváží 1,5 g prostředku, který má být analyzován. Doplní se po rysku rozpouštědlem 3.1. Uzavře se a 1 hodinu ponechá při laboratorní teplotě v ultrazvukové lázni (4.2.). Zfiltruje se přes filtr Millipore (4.3) a filtrát se použije pro chromatografii.

        1. účinné od 1. 1. 20065.2 Chromatografie na tenké vrstvě

          účinné od 1. 1. 2006Na desku (3.5) se nanese 10 μl roztoku vzorku (5.1) a každého ze standardních roztoků (3.4). Chromatogram se vyvíjí do výšky 150 mm v komoře předem nasycené mobilní fází 3.2. Deska se nechá vyschnout při teplotě okolí.

        1. účinné od 1. 1. 20065.3 Detekce
          1. účinné od 1. 1. 20065.3.1 Deska se pozoruje pod UV světlem 254 nm.
          2. účinné od 1. 1. 20065.3.2 Zcela vysušená deska se postříká detekčním roztokem 3.3 a).

            účinné od 1. 1. 2006Deska se nechá schnout 1 minutu při laboratorní teplotě a ihned se postříká detekčním roztokem 3.3 b). Vysuší se v sušárně při 60 °C. Objeví se skvrny oranžové barvy. 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoát: Rf asi 0,07, ethyl-4-aminobenzoát: Rf 0,55.

    1. účinné od 1. 1. 2006B. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ
      1. účinné od 1. 1. 20061. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ

        účinné od 1. 1. 2006Tato metoda slouží ke kvantitativnímu stanovení 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu rovněž stanovuje ethyl-4-aminobenzoát. Nelze stanovit více než 5 % (m/m) 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu a více než 1 % (m/m) ethyl-4-aminobenzoátu.

      1. účinné od 1. 1. 20062. DEFINICE

        účinné od 1. 1. 2006Obsah 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu a obsah ethyl-4-aminobenzoátu stanovené touto metodou se vyjádří v procentech (% m/m) hmotnosti prostředku.

      1. účinné od 1. 1. 20063. PRINCIP

        účinné od 1. 1. 2006Prostředek, který má být analyzován, se suspenduje v methanolu a po vhodné úpravě vzorku se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC).

      1. účinné od 1. 1. 20064. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE

        účinné od 1. 1. 2006Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší a musí být vhodná pro HPLC.

        1. účinné od 1. 1. 20064.1 Methanol
        2. účinné od 1. 1. 20064.2 Dihydrogenfosforečnan draselný (KH2PO4)
        3. účinné od 1. 1. 20064.3 Octan zinečnatý (Zn(CH3COO)2·2H2O)
        4. účinné od 1. 1. 20064.4 Kyselina octová
        5. účinné od 1. 1. 20064.5 Hexakyanoželeznatan draselný (K4(Fe(CN)6)·3H2O)
        6. účinné od 1. 1. 20064.6 Ethyl-4-hydroxybenzoát
        7. účinné od 1. 1. 20064.7 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoát
        8. účinné od 1. 1. 20064.8 Ethyl-4-aminobenzoát
        9. účinné od 1. 1. 20064.9 Fosfátový tlumivý roztok (0,02M): rozpustí se 2,72 g dihydrogenfosforečnanu draselného (4.2) v 1 litru vody.
        10. účinné od 1. 1. 20064.10 Mobilní fáze: fosfátový tlumivý roztok (4.9)/methanol (4.1) 61/39 (V/V)

          účinné od 1. 1. 2006Složení mobilní fáze může být změněno s cílem dosáhnout faktoru rozlišení R ≥1,5.

          účinné od 1. 1. 2006

          1. účinné od 1. 1. 2006kde
            účinné od 1. 1. 2006
            Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
            R1 a R2=retenční časy píků v min.,
            W1 a W2 =šířky píků v polovině výšky píků v mm,
            d' = rychlost posuvu papíru v mm/min..
        1. účinné od 1. 1. 20064.11 Zásobní roztok 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu: Naváží se asi 40 mg 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu přesně a převede se do odměrné baňky na 100 ml. Rozpustí se ve 40 ml methanolu (4.1). Doplní se tlumivým roztokem (4.9) po rysku a promíchá se.
        2. účinné od 1. 1. 20064.12 Zásobní roztok ethyl-4-aminobenzoátu: Naváží se asi 40 mg ethyl-4-aminobenzoátu přesně a převede se do odměrné baňky na 100 ml. Rozpustí se ve 40 ml methanolu (4.1). Doplní se tlumivým roztokem (4.9) po rysku a promíchá se.
        3. účinné od 1. 1. 20064.13 Roztok vnitřního standardu: Naváží se asi 50 mg ethyl-4-hydroxybenzoátu přesně a převede se do odměrné baňky na 100 ml. Rozpustí se ve 40 ml methanolu (4.1). Doplní se tlumivým roztokem (4.9) po rysku a promíchá se.
        4. účinné od 1. 1. 20064.14 Standardní roztoky: Připraví se čtyři standardní roztoky rozpuštěním následujících látek ve 100 ml mobilní fáze (4.10) podle následující tabulky:
          účinné od 1. 1. 2006
          Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
          Standardní roztok2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátethyl-4-aminobenzoátethyl-4-hydroxybenzoát
          (μg/ml) (*)ml (4.11)(μg/ml) (*)ml (4.12)(μg/ml) (*)ml (4.13)
          I82825010
          II1641235010
          III2461645010
          IV40102055010
          (*) Tyto hodnoty jsou informativní a odpovídají přesným hmotnostem v 4.11, 4.12 a 4.13.
          Poznámka: Tyto roztoky mohou být připraveny jiným způsobem.
        1. účinné od 1. 1. 20064.15 Carrezovo činidlo I: Rozpustí se 26,5 g hexakyanoželeznatanu draselného (4.5) ve vodě a doplní se do 250 ml.
        2. účinné od 1. 1. 20064.16 Carrezovo činidlo II: Rozpustí se 54,9 g octanu zinečnatého (4.3) a 7,5 ml kyseliny octové (4.4) ve vodě a doplní se do 250 ml.
        3. účinné od 1. 1. 20064.17 Merck Lichrosorb RP-18, nebo ekvivalentní, s průměrnou velikostí částic 5 μm
      1. účinné od 1. 1. 20065. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
        1. účinné od 1. 1. 20065.1 Obvyklé laboratorní vybavení
        2. účinné od 1. 1. 20065.2 Zařízení pro vysokoúčinnou chromatografii s UV detektorem s nastavitelnou vlnové délce a komorou s termostatem nastaveným na 45 °C
        3. účinné od 1. 1. 20065.3 Kolona z nerezové oceli: délka: 250 mm; vnitřní průměr: 4,6 mm; náplň Lichrosorb RP-18 (4.17)
        4. účinné od 1. 1. 20065.4 Ultrazvuková lázeň
      1. účinné od 1. 1. 20066. POSTUP
        1. účinné od 1. 1. 20066.1 Příprava vzorku
          1. účinné od 1. 1. 20066.1.1 Do kádinky na 100 ml se přesně naváží 1 g vzorku a přidá se 10 ml methanolu (4.1).
          2. účinné od 1. 1. 20066.1.2 Kádinka se na 20 minut umístí do ultrazvukové lázně (5.4), aby se vytvořila suspenze. Takto vytvořená suspenze se kvantitativně převede nejvýše 75 ml mobilní fáze (4.10) do odměrné baňky na 100 ml.

            účinné od 1. 1. 2006Postupně se přidá 1 ml Carrezova činidla I (4.15) a 1 ml Carrezova činidla II (4.16) a po každém přidání se promíchá. Doplní se elučním roztokem (4.10) po rysku, znovu se promíchá a zfiltruje se přes skládaný filtrační papír.

          1. účinné od 1. 1. 20066.1.3 Do odměrné baňky na 50 ml se pipetou převede 3,0 ml filtrátu získaného podle bodu 6.1.2 a 5,0 ml roztoku vnitřního standardu (4.13). Doplní se mobilní fází po rysku a promíchá se. Takto získaný roztok se použije pro provedení chromatografické analýzy popsané v bodě 6.2.
        1. účinné od 1. 1. 20066.2 Chromatografie
          1. účinné od 1. 1. 20066.2.1 Průtok mobilní fáze (4.10) se upraví na 1,2 ml/min a teplota kolony se nastaví na 45 °C.
          2. účinné od 1. 1. 20066.2.2 Detektor (5.2) se nastaví na 274 nm.
          3. účinné od 1. 1. 20066.2.3 Do chromatografu se mikrostříkačkou alespoň dvakrát nastříkne 20 μl roztoku (6.1.3) a změří se plochy píků.
        1. účinné od 1. 1. 20066.3 Kalibrační křivka
          1. účinné od 1. 1. 20066.3.1 Nastříkne se 20 μl každého ze standardních roztoků (4.14) a změří se plochy píků.
          2. účinné od 1. 1. 20066.3.2 Pro každou koncentraci se vypočte poměr ploch píků 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu k plochám píků vnitřního standardu. Tento poměr se vynese na osu x a na osu y se vynese poměr odpovídajících hmotností.
          3. účinné od 1. 1. 20066.3.3 Stejným způsobem se postupuje v případě ethyl-4-hydroxybenzoátu.
      1. účinné od 1. 1. 20067. VÝPOČET