Platné znění

Vyhláška, kterou se u chemických látek a chemických přípravků stanoví základní metody pro zkoušení fyzikálně-chemických vlastností, výbušných vlastností a vlastností nebezpečných pro životní prostředí

účinné od 1. 5. 2004Obecné podmínky pro zkoušky jsou shrnuty v tabulce 2. Přístroje a další experimentální podmínky specifické pro jednotlivé metody jsou popsány dále v kapitolách pro tyto příslušné metody.

účinné od 1. 5. 2004Tabulka 2: Zkušební podmínky

účinné od 1. 5. 2004
Tabulka 2: Zkušební podmínky
ZkouškaZkouška na
úbytek DOC		Zkouška na
uvolňování CO2		Manometrická
respirometrie		Modif. screeningová
zkouška OECD		Zkouška v uzavřených
lahvičkách		Zkouška MITI (I)
Koncentrace zkušební látky
mg·l-11002 - 10100
mg DOG/110-4010 - 2010 - 40
mg TSK/l50 - 1005 - 10
Koncentrace inokula (buňky/l,
přibližně)		≤ 30 mg/l SL nebo ≤ 100 ml odpadní vody/l
(107-108)		0,5 ml sekundární odpadní vody/l
(105)		≤ 5 ml odpadní vody/l
(104-106)		30 mg/l SL
(107-108)
Koncentrace prvků
v minerálním médiu (v mg·l-1)
P11611,629
N1,30,131,3
Na868,617,2
K12212,236,5
Mg2,22,26,6
Ca9,99,929,7
Fe0,05 – 0,10,05 - 0,10,15
pH7,4 ± 0,2nejlépe 7,0
Teplota22 ± 2 °C25 ± 1 °C
DOC = rozpuštěný organický uhlík, TSK = teoretická spotřeba kyslíku, SL = suspendované látky
  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.1 Ředicí voda

    účinné od 1. 5. 2004Používá se deionizovaná nebo destilovaná voda neobsahující inhibující koncentrace toxických látek (např. ionty Cu2+). Voda smí obsahovat nejvýše 10 % obsahu organického uhlíku vneseného zkušebním materiálem. Vysoká čistota vody pro zkoušky je nezbytná pro to, aby se nevyskytovaly vysoké hodnoty slepého pokusu. Kontaminace může pocházet z vlastních přítomných nečistot, z materiálu měniče iontů, z rozkladných látek z bakterií a řas. Pro každou sérii měření se použije pouze jedna šarže vody, která byla předem překontrolována analýzou DOC. Tato kontrola není nutná u zkoušky v uzavřených lahvičkách, spotřeba kyslíku vodou však musí být nízká.

  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.2 Zásobní roztoky minerálních složek

    účinné od 1. 5. 2004Pro přípravu zkušebních roztoků se připraví zásobní roztoky o vhodných koncentracích minerálních složek Níže uvedené zásobní roztoky je možné použít (při různých zřeďovacích faktorech) pro metodu s úbytkem DOC, modifikovanou screeningovou metodu OECD, metodu s uvolňováním CO2, pro manometrickou respirometrii a pro metodu s uzavřenými lahvičkami.

    účinné od 1. 5. 2004Zřeďovací faktory a specifická příprava minerálního media pro zkoušku MITI jsou uvedeny v oddílech pro jednotlivé zkoušky.

    1. účinné od 1. 5. 2004Zásobní roztoky:
      1. účinné od 1. 5. 2004Za použití reakčních činidel čistoty p.a. se připraví následující zásobní roztoky:
        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky
        a)Dihydrogenfosforečnan draselný, KH2PO48,50 g
        Hydrogenfosforečnan didraselný, K2HPO421,75 g
        Hydrogenfosforečnan disodný dihydrát, Na2HPO4·2H2O33,40 g
        Chlorid amonný, NH4Cl0,50 g

        účinné od 1. 5. 2004Rozpustí se ve vodě a doplní na 1 litr. pH roztoku musí být 7,4.

        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky
        b)Chlorid vápenatý bezvodý, CaCl227,50 g
        nebo chlorid vápenatý dihydrát, CaCl2·2H2O36,40 g

        účinné od 1. 5. 2004Rozpustí se ve vodě a doplní na 1 litr.

        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky
        c)Síran hořečnatý heptahydrát, MgSO4·7H2O22,50 g

        účinné od 1. 5. 2004Rozpustí se ve vodě a doplní na 1 litr.

        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky
        d)Chlorid železitý hexahydrát, FeCl3·6H2O0,25 g

        účinné od 1. 5. 2004Rozpustí se ve vodě a doplní na 1 litr.

      2. účinné od 1. 5. 2004Poznámka: Aby nebylo nutné připravovat tento roztok bezprostředně před použitím, přidá se jedna kapka koncentrované kyseliny chlorovodíkové nebo 0,4 g disodné soli kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA) na 1 litr.
  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.3 Zásobní roztoky chemických látek

    účinné od 1. 5. 2004Pokud je rozpustnost vyšší než 1 g·l-1, rozpustí se například 1 – 10 g (podle potřeby) zkušební nebo referenční látky v deionizované vodě a doplní se na 1 litr. Jinak se zásobní roztoky připravují v minerálním médiu, nebo se chemická látka přidá přímo do minerálního média. Pokud jde o postup s méně rozpustnými chemickými látkami, viz příloha III; ve zkoušce MITI (metoda C.4-F) se nepoužívají ani rozpouštědla, ani emulgační činidla.

  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.4 Inokula

    účinné od 1. 5. 2004Inokulum lze získat z řady zdrojů: z aktivovaného kalu, ze splaškových vod (nechlorovaných), z povrchových vod a půd nebo z jejich směsi. Používá-li se aktivovaný kal ve zkoušce na úbytek DOC, na uvolňování CO2 a ve zkoušce manometrickou respirometrií, měl by být odebrán z čistírny nebo z laboratorní jednotky čistící převážně domovní odpadní vody. U inokulí z jiných zdrojů byl zjištěn větší rozptyl výsledků. V modifikované screeningové zkoušce OECD a ve zkoušce v uzavřených lahvičkách je potřebné zředěnější inokulum bez vloček kalu a nejvhodnějším zdrojem je voda z druhého stupně čistírny domovních odpadních vod nebo z laboratorní jednotky. Pro zkoušku MITI se inokulum získává ze směsi zdrojů a je popsáno v oddílu věnovaném této zkoušce.

    1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.4.1 Inokulum z aktivovaných kalů

      účinné od 1. 5. 2004Odebere se čerstvý vzorek aktivovaného kalu z aerační nádrže čistírny odpadních vod nebo laboratorní jednotky čistící převážně domovní odpadní vody. Podle potřeby se filtrací přes jemné síto odstraní hrubé částice a kal se udržuje v aerobních podmínkách.

      účinné od 1. 5. 2004Jinou možností je usazení nebo odstředění (např. 10 min při 1 100 g) po odstranění hrubých částic. Voda nad usazeninou se odstraní. Kal se promyje minerálním médiem. Koncentrovaný kal se suspenduje v minerálním médiu na koncentraci 3 – 5 g suspendovaných tuhých látek na litr a až do použití se provzdušňuje.

      účinné od 1. 5. 2004Kal by měl být odebrán z dobře fungující konvenční čistírny. Je-li nutné odebrat kal z čistírny s vysokým výkonem nebo předpokládá-li se, že kal obsahuje inhibitory, je třeba jej promýt. Po důkladném promíchání se kal nechá usadit nebo se odstředí, voda nad usazeninou se odstraní a promytý kal se opět suspenduje v nové dávce minerálního média. Tento postup se opakuje, dokud se kal nepovažuje za prostý přebytečného substrátu nebo inhibitoru.

      účinné od 1. 5. 2004Po opakovaném suspendování nebo z neupravovaného kalu se těsně před použitím odebere vzorek pro stanovení hmotnosti sušiny suspendovaných tuhých látek.

      účinné od 1. 5. 2004Další možností je homogenizace aktivovaného kalu (3 – 5 g suspendovaných látek v litru). Kal se 2 min zpracovává v mechanickém mísiči při střední rychlosti. Promíchaný kal se nechá 30 min, popřípadě déle, usazovat a kapalina se dekantuje pro použití jako inokulum v koncentraci 10 ml na litr minerálního média.

    1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.4.2 Jiné zdroje inokula

      účinné od 1. 5. 2004Inokulum lze získat z výstupu z druhého stupně čistírny odpadních vod nebo laboratorní jednotky zpracovávající převážně domovní odpadní vody Odebere se čerstvý vzorek a během přepravy se udržuje v aerobních podmínkách. Nechá se 1 h usadit nebo se zfiltruje přes hrubý filtrační papír a dekantovaná kapalina nebo filtrát se až do použití udržuje v aerobních podmínkách. Na litr média lze použít až 100 ml tohoto typu inokula.

      účinné od 1. 5. 2004Dalším zdrojem inokula je povrchová voda. V tomto případě se odebere vzorek vhodné povrchové vody, např. říční nebo jezerní vody, a uchovává se až do použití v aerobních podmínkách. V případě potřeby se inokulum zkoncentruje filtrací nebo odstředěním.

  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.5 Předběžná úprava inokulí

    účinné od 1. 5. 2004Inokula je možné předběžně upravit pro experimentální podmínky, ale nikoli předběžně adaptovat na zkušební látku. Předběžná úprava spočívá v aeraci aktivovaného kalu v minerálním médiu nebo výstupu z druhého stupně čistírny po dobu 5 – 7 dnů při zkušební teplotě. Předběžná úprava někdy zlepší přesnost zkušebních metod snížením hodnot ze slepých pokusů. Předběžná úprava inokula pro zkoušku MITI se nepovažuje za nutnou.

  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.6 Abiotické kontroly

    účinné od 1. 5. 2004V případě potřeby se kontroluje možný abiotický rozklad zkušební látky stanovením úbytku DOC, přijmu kyslíku nebo uvolňování oxidu uhličitého ve sterilních kontrolách bez inokula. Sterilizace se provádí filtrací přes membránu (0,2 – 0,45 μm) nebo přidáním vhodné toxické látky v odpovídající koncentraci. Používá-li se membránová filtrace, odebírají se vzorky asepticky, aby byla zachována sterilita. Pokud nebyla předem vyloučena adsorpce zkušební látky, měly by zkoušky, kterými se sleduje biologický rozklad podle úbytku DOC, zejména při použití inokula z aktivovaného kalu, zahrnovat abiotickou kontrolu, která je inokulována a intoxikována.

  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.6.7 Počet nasazených baněk

    účinné od 1. 5. 2004Počet nasazených baněk v typické zkoušce je uveden v oddílech věnovaných jednotlivým zkouškám.

    1. účinné od 1. 5. 2004Mohou být použity tyto baňky:
      1. účinné od 1. 5. 2004Zkušební suspense: obsahující zkušební látku a inokulum
      2. účinné od 1. 5. 2004Slepá zkouška s inokulem: obsahující pouze inokulum
      3. účinné od 1. 5. 2004Kontrolní zkouška postupu: obsahující referenční látku a inokulum
      4. účinné od 1. 5. 2004Abiotická sterilní kontrola: sterilní, obsahující zkušební látku (viz I.6.6)
      5. účinné od 1. 5. 2004Kontrola adsorpce: obsahující zkušební látku, inokulum a sterilizační činidlo
      6. účinné od 1. 5. 2004Kontrola toxicity: obsahující zkušební látku, referenční látku a inokulum

    účinné od 1. 5. 2004Stanovení ve zkušební suspensi a slepý pokus s inokulem musí být prováděny souběžně. Doporučuje se, aby stanovení v ostatních baňkách bylo prováděno rovněž souběžně.

    účinné od 1. 5. 2004To však nemusí být vždy možné. Je třeba zajistit, aby se odebíral dostatečný počet vzorků nebo aby se prováděl dostatečný počet odečtů pro vyhodnocení procenta úbytku v 10denním období rozkladu.

  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.7 DATA A HODNOCENÍ

    účinné od 1. 5. 2004Při výpočtu rozkladu v procentech Dt, se použijí střední hodnoty z měření parametru provedených duplicitně v obou zkušebních nádobách a ze slepého pokusu s inokulem. Vzorce jsou uvedeny dále v oddílech pro jednotlivé zkoušky. Průběh rozkladu se znázorní graficky a vyznačí se 10denní období rozkladu. Vypočte se a uvede úbytek v procentech dosažený na konci 10denního období rozkladu a hodnota pro plató křivky nebo popřípadě hodnota odpovídající konci zkoušky.

    účinné od 1. 5. 2004V respirometrických zkouškách mohou v důsledku nitrifikace ovlivnit spotřebu kyslíku látky obsahující dusík (viz přílohy II a V).

    1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.7.1 Měření rozkladu prostřednictvím stanovení DOC
      1. účinné od 1. 5. 2004Za účelem posouzení platnosti zkoušky (viz I.5.2) by se měla hodnota rozkladu Dt v procentech v každém časovém okamžiku, ve kterém se odebral vzorek, vypočítat odděleně pro každou baňku obsahující zkušební látku, a to pomocí středních hodnot měření DOC provedených duplicitně. Vypočte se podle následující rovnice:

        účinné od 1. 5. 2004

        1. účinné od 1. 5. 2004kde
          1. účinné od 1. 5. 2004Dt = rozklad v procentech v čase t,
          2. účinné od 1. 5. 2004C0 = střední počáteční koncentrace DOC v inokulovaném kultivačním médiu obsahujícím zkušební látku (v mg DOC na litr),
          3. účinné od 1. 5. 2004Ct = střední koncentrace DOC v inokulovaném kultivačním médiu obsahujícím zkušební látku v čase t (v mg DOC na litr),
          4. účinné od 1. 5. 2004Cbo = střední počáteční koncentrace DOC ve slepém inokulovaném minerálním médiu (v mg DOC na litr),
          5. účinné od 1. 5. 2004Cbt = střední koncentrace DOC ve slepém inokulovaném minerálním médiu v čase t (v mg DOC na litr).

      účinné od 1. 5. 2004Všechny koncentrace se stanoví experimentálně.

    1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.7.2 Rozklad měřený specifickou analýzou
      1. účinné od 1. 5. 2004Je-li možné získat specifické analytické údaje, vypočte se primární biologický rozklad z rovnice:

        účinné od 1. 5. 2004

        1. účinné od 1. 5. 2004kde
          1. účinné od 1. 5. 2004Dt = rozklad v procentech v čase t, obvykle po 28 dnech,
          2. účinné od 1. 5. 2004Sa = zbylé množství zkušební látky v médiu s inokulem na konci zkoušky (mg),
          3. účinné od 1. 5. 2004Sb = zbylé množství zkušební látky ve slepém pokusu s vodou/médiem, do kterých byla přidána pouze zkušební látka (mg).
    1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.7.3 Abiotický rozklad
      1. účinné od 1. 5. 2004Použije-li se abiotická sterilní kontrola, vypočte se abiotický rozklad v procentech podle rovnice:

      účinné od 1. 5. 2004

      1. účinné od 1. 5. 2004kde:
        1. účinné od 1. 5. 2004Cs(0) = koncentrace DOC ve sterilní kontrole v den 0,
        2. účinné od 1. 5. 2004Cs(t) = koncentrace DOC ve sterilní kontrole v den t.
  1. účinné od 1. 5. 2004IV.I.8 ZPRÁVY
    1. účinné od 1. 5. 2004Protokol o zkoušce má pokud možno obsahovat následující údaje:
      1. účinné od 1. 5. 2004— zkušební a referenční chemické látky a jejich čistota;
      2. účinné od 1. 5. 2004— zkušební podmínky;
      3. účinné od 1. 5. 2004— inokulum: charakter a místo (místa) odběru, koncentrace a jakákoli předběžná úprava;
      4. účinné od 1. 5. 2004— podíl a charakter průmyslového odpadu obsaženého v odpadní vodě, jsou-li známy;
      5. účinné od 1. 5. 2004— délka zkoušky a teplota;
      6. účinné od 1. 5. 2004— v případě špatně rozpustných zkušebních látek použitý způsob zpracování;
      7. účinné od 1. 5. 2004— použitá zkušební metoda; měly by být uvedeny vědecké důvody a vysvětlení pro veškeré změny postupu;
      8. účinné od 1. 5. 2004— přehled dat;
      9. účinné od 1. 5. 2004— veškeré pozorované projevy inhibice;
      10. účinné od 1. 5. 2004— jakýkoli pozorovaný abiotický rozklad;
      11. účinné od 1. 5. 2004— specifická analytická data o chemické látce, pokud existují;
      12. účinné od 1. 5. 2004— analytická data o meziproduktech, pokud existují;
      13. účinné od 1. 5. 2004— graf závislosti rozkladu v procentech na čase pro zkušební a referenční látku; je třeba zřetelně označit fázi iniciace, fázi rozkladu, 10denní období rozkladu a směrnici (příloha I). Vyhovuje-li zkouška kritériím jakosti, je možné v grafu použít střední hodnotu rozkladu v procentech v baňkách obsahujících zkušební látku;
      14. účinné od 1. 5. 2004— rozklad v procentech po 10denním období rozkladu, v oblasti plató a na konci zkoušky.
  1. účinné od 1. 5. 2004IVA. METODA PRO STANOVENÍ „SNADNÉ“ BIOLOGICKÉ ROZLOŽITELNOSTI POMOCÍ ÚBYTKU ROZPUŠTĚNÉHO ORGANICKÉHO UHLÍKU (DOC) – metoda C.4-A podle přílohy směrnice 92/69/EHS
    1. účinné od 1. 5. 2004IVA.1 PODSTATA METODY

      účinné od 1. 5. 2004Odměřený objem inokulovaného minerálního média obsahujícího známou koncentraci zkušební látky (10 – 40 mg DOC na litr) jako nominální jediný zdroj organického uhlíku se provzdušňuje v temnu nebo v difusním světle při 22 ± 2 °C.

      účinné od 1. 5. 2004Rozklad se sleduje v krátkých intervalech během 28denního období prostřednictvím analýzy DOC. Stupeň biologického rozkladu se vypočte vyjádřením koncentrace rozloženého DOC (opravené na koncentraci DOC ve slepé zkoušce s inokulem) v procentech koncentrace, která byla přítomna na začátku. Stupeň primárního biologického rozkladu lze rovněž vypočítat z doplňkové chemické analýzy provedené na začátku a na konci kultivace.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVA 2 POPIS METODY
      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 2.1 Aparatura
        1. účinné od 1. 5. 2004a) Erlenmeyerovy baňky, např. 250 ml až 2 litry, podle objemu potřebného pro analýzu DOC;
        2. účinné od 1. 5. 2004b) Třepačka upravená pro umístění Erlenmeyerových baněk, buď s automatickou regulací teploty nebo používaná v místnosti s konstantní teplotou, a s dostatečným výkonem pro udržení aerobních podmínek ve všech baňkách;
        3. účinné od 1. 5. 2004c) Filtrační aparatura s vhodnými membránami;
        4. účinné od 1. 5. 2004d) Analyzátor DOC;
        5. účinné od 1. 5. 2004e) Přístroj pro stanovení rozpuštěného kyslíku;
        6. účinné od 1. 5. 2004f) Odstředivka;
      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 2.2 Příprava minerálního média

        účinné od 1. 5. 2004Příprava zásobních roztoků je popsána v bodě I.6.2.

        účinné od 1. 5. 2004Smísí se 10 ml roztoku a) s 800 ml ředicí vody, přidá se po 1 ml roztoků b) až d) a doplní se ředicí vodou na 1 litr.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 2.3 Příprava a předběžná úprava inokula

        účinné od 1. 5. 2004Inokulum lze získat z řady zdrojů: z aktivovaného kalu, ze splaškových vod, z povrchových vod, z půd nebo z jejich směsi.

        účinné od 1. 5. 2004Viz I.6.4, I.6.4.1, I.6.4.2 a I.6.5.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 2.4 Příprava baněk

        účinné od 1. 5. 2004Do dvoulitrových Erlenmeyerových baněk se například odměří 800 ml minerálního média a do jednotlivých baněk se přidají dostatečná množství zásobních roztoků zkušební a referenční látky tak, aby se získaly koncentrace látky odpovídající 10 – 40 mg DOC na litr. Zkontrolují se hodnoty pH a popřípadě se upraví na 7,4. Baňky se inokulují aktivovaným kalem nebo jiným zdrojem inokula (viz I.6.4), aby se získala výsledná koncentrace nejvýše 30 mg suspendovaných látek na litr. Připraví se rovněž kontroly s inokulem v minerálním médiu, avšak bez zkušební nebo referenční látky.

        účinné od 1. 5. 2004Podle potřeby se použije jedna nádoba ke kontrole možného inhibičního účinku zkušební látky inokulací roztoku, který obsahuje srovnatelná množství jak zkušební, tak referenční chemické látky v minerálním médiu.

        účinné od 1. 5. 2004Podle potřeby se také použije další, sterilní baňka s roztokem chemické látky bez inokula, a to ke kontrole, zda se zkušební chemická látka rozkládá abioticky (viz I.6.6).

        účinné od 1. 5. 2004Existuje-li dále podezření, že se zkušební látka významně adsorbuje na skle, kalu apod., provede se předběžný odhad pravděpodobného rozsahu adsorpce, a tedy vhodnosti zkoušky pro danou látku (viz tabulka 1). Nasadí se baňka obsahující zkušební látku, inokulum a sterilizační činidlo.

        účinné od 1. 5. 2004Obsah všech baněk se doplní minerálním médiem na 1 litr a po promíchání se z každé baňky odebere vzorek pro stanovení počáteční koncentrace DOC (viz příloha II, bod 4). Ústí baněk se zakryjí např. hliníkovou fólií tak, aby byla umožněna volná výměna vzduchu mezi baňkami a okolní atmosférou. Baňky se poté umístí do třepačky a zahájí se zkouška.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 2.5 Počet baněk v typické zkoušce
        1. účinné od 1. 5. 2004Baňka 1 a 2: Zkušební suspense
        2. účinné od 1. 5. 2004Baňka 3 a 4: Slepá zkouška s inokulem
        3. účinné od 1. 5. 2004Baňka 5: Kontrolní zkouška postupu
        4. účinné od 1. 5. 2004Dále se doporučují nebo se podle potřeby použijí:
          1. účinné od 1. 5. 2004Baňka 6: Abiotická sterilní kontrola
          2. účinné od 1. 5. 2004Baňka 7: Kontrola adsorpce
          3. účinné od 1. 5. 2004Baňka 8: Kontrola toxicity
          4. účinné od 1. 5. 2004Viz také bod I.6.7.
      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 2.6 Provedení zkoušky

        účinné od 1. 5. 2004Během zkoušky se ve známých časových intervalech duplicitně stanovuje koncentrace DOC v každé baňce, a to dostatečně často, aby bylo možné určit začátek 10denního období rozkladu a úbytek v procentech na konci 10denního období rozkladu. Pro každé stanovení se odebere pouze minimální nezbytné množství zkušební suspense.

        účinné od 1. 5. 2004Před každým odběrem vzorků se podle potřeby nahradí ztráty odpařováním z baněk přidáním potřebného množství ředicí vody (1.6.1). Před odběrem vzorků se kultivační médium dobře promíchá a zajistí se, aby látky ulpělé na stěnách nádob přešly do roztoku nebo suspense. Vzorky se ihned po odběru zfiltrují přes membránu nebo odstředí (viz příloha II, bod 4). Zfiltrované nebo odstředěné vzorky se analyzují týž den, v opačném případě se uchovávají nejdéle 48 h při 2 – 4 °C nebo delší dobu při teplotě nižší než –18 °C.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVA 3 DATA A ZPRÁVY
      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 3.1 Zpracování výsledků

        účinné od 1. 5. 2004Rozklad v procentech v čase t se vypočte podle bodu I.7.1. (stanovení DOC) nebo podle bodu I.7.2 (specifická analýza).

        účinné od 1. 5. 2004Všechny výsledky se uvedou na příslušných formulářích přehledu dat.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 3.2 Platnost výsledků

        účinné od 1. 5. 2004Viz bod I.5.2.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVA 3.3 Zprávy

        účinné od 1. 5. 2004Viz bod I.8.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVA 4 PŘEHLED DAT

      účinné od 1. 5. 2004Dále je uveden příklad přehledu dat.

      účinné od 1. 5. 2004ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC

      1. účinné od 1. 5. 20041. LABORATOŘ
      2. účinné od 1. 5. 20042. DATUM POČÁTKU ZKOUŠKY
      3. účinné od 1. 5. 20043. ZKUŠEBNÍ LÁTKA
        1. účinné od 1. 5. 2004Název:
          1. účinné od 1. 5. 2004Koncentrace chemické látky v zásobním roztoku: mg·l-1
          2. účinné od 1. 5. 2004Počáteční koncentrace chemické látky v médiu v čase t0: mg·l-1
      1. účinné od 1. 5. 20044. INOKULUM
        1. účinné od 1. 5. 2004Zdroj:
          1. účinné od 1. 5. 2004Provedená úprava:
            1. účinné od 1. 5. 2004Předběžná úprava, pokud byla provedena:
              1. účinné od 1. 5. 2004Koncentrace suspendovaných látek v reakční směsi: mg·l-1
      1. účinné od 1. 5. 20045. STANOVENÍ UHLÍKU
        1. účinné od 1. 5. 2004Analyzátor uhlíku:
          účinné od 1. 5. 2004
          Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC
          Baňka č.DOC po n dnech (mg·l-1)
          0n1n2n3nx
          Zkušební látka a inokulum1a1
          a2
          a, střední hodnota
          Ca(t)
          2b1
          b2
          b, střední hodnota
          Cb(t)
          Slepá zkouška s inokulem
          bez zkušební látky          		3c1
          c2
          c, střední hodnota
          Cc(t)
          4d1
          d2
          d, střední hodnota
          Cd(t)
      1. účinné od 1. 5. 20046. VYHODNOCENÍ NAMĚŘENÝCH DAT
        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC
        Baňka č.Rozklad v % po n dnech
        0n1n2n3nx
        10
        20
        Střední hodnota*0
      2. účinné od 1. 5. 2004* Hodnoty D1 a D2 by neměly být průměrovány, pokud je mezi nimi významný rozdíl.
      3. účinné od 1. 5. 2004Poznámka: Podobné formuláře lze použít pro referenční chemickou látku a kontrolu toxicity.
      1. účinné od 1. 5. 20047. ABIOTICKÁ KONTROLA (nepovinná)
        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC
        Čas (dny)
        0t
        DOC (mg·l-1) ve sterilní kontroleCs(0)Cs(t)

        účinné od 1. 5. 2004

      1. účinné od 1. 5. 20048. SPECIFICKÁ CHEMICKÁ ANALÝZA (nepovinná)
        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC
        Zbylé množství zkušební
        chemické látky na konci
        zkoušky (mg·l-1)        		Primární rozklad
        v procentech
        Sterilní kontrolaSb
        Inokulované zkušební médiumSa
  1. účinné od 1. 5. 2004IVB. METODA PRO STANOVENÍ „SNADNÉ“ BIOLOGICKÉ ROZLOŽITELNOSTI POMOCÍ ÚBYTKU ROZPUŠTĚNÉHO ORGANICKÉHO UHLÍKU (DOC) - MODIFIKOVANÁ SCREENINGOVÁ ZKOUŠKA OECD – metoda C.4-B podle přílohy směrnice 92/69/EHS
    1. účinné od 1. 5. 2004IVB.1 PODSTATA METODY

      účinné od 1. 5. 2004Odměřený objem minerálního média obsahujícího známou koncentraci zkušební látky (10 – 40 mg DOC na litr) jako jediný zdroj organického uhlíku se inokuluje 0,5 ml odpadní vody na litr média. Směs se provzdušňuje v temnu nebo v difusním světle při 22 ± 2 °C.

      účinné od 1. 5. 2004Rozklad se sleduje v krátkých intervalech během 28denního období prostřednictvím analýzy DOC. Stupeň biologického rozkladu se vypočte vyjádřením koncentrace rozloženého DOC (opravené na koncentraci DOC ve slepé zkoušce s inokulem) v procentech koncentrace, která byla přítomna na začátku. Stupeň primárního biologického rozkladu lze rovněž vypočítat z doplňkové chemické analýzy provedené na začátku a na konci inkubace.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVB.2 POPIS METODY
      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.2.1 Aparatura
        1. účinné od 1. 5. 2004a) Erlenmeyerovy baňky, např. 250 ml až 2 litry, podle objemu potřebného pro analýzu DOC;
        2. účinné od 1. 5. 2004b) Třepačka pro umístění Erlenmeyerových baněk, buď s automatickou regulací teploty nebo používaná v místnosti s konstantní teplotou, a s dostatečným výkonem pro udržení aerobních podmínek ve všech baňkách;
        3. účinné od 1. 5. 2004c) Filtrační aparatura s vhodnými membránami;
        4. účinné od 1. 5. 2004d) Analyzátor DOC;
        5. účinné od 1. 5. 2004e) Přístroj pro stanovení rozpuštěného kyslíku;
        6. účinné od 1. 5. 2004f) Odstředivka.
      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.2.2 Příprava minerálního média

        účinné od 1. 5. 2004Příprava zásobních roztoků je popsaná v bodě I.6.2.

        účinné od 1. 5. 2004Smísí se 10 ml roztoku a) s 800 ml ředicí vody, přidá se po 1 ml roztoků b) až d) a doplní se ředicí vodou na 1 litr.

        1. účinné od 1. 5. 2004V této metodě se používá jako inokulum pouze 0,5 ml odpadní vody na litr, a proto je nutné do média dodat stopové prvky a růstové faktory. Toho se dosáhne přidáním 1 ml každého z dále uvedených roztoků na jeden litr výsledného média:
          1. účinné od 1. 5. 2004Roztok stopových prvků:
            účinné od 1. 5. 2004
            Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC
            Síran manganatý tetrahydrát, MnSO4·4H2O39,9 mg
            Kyselina boritá, H3BO357,2 mg
            Síran zinečnatý heptahydrát, ZnSO4·7H2O42,8 mg
            Heptamolybdenan hexaamonný, (NH4)6Mo7O2434,7 mg
            Chelát Fe (FeCl3 s kyselinou ethylendiaminotetraoctovou)100,0 mg

        účinné od 1. 5. 2004Rozpustí se v ředicí vodě a doplní se touto vodou na 1 000 ml.

        1. účinné od 1. 5. 2004Vitaminový roztok:
          účinné od 1. 5. 2004
          Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC
          Kvasničný extrakt15,0 mg

        účinné od 1. 5. 2004Kvasničný extrakt se rozpustí ve 100 ml vody. Sterilizuje se průchodem membránou 0,2 μm, nebo se připraví čerstvě.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.2.3 Příprava a předběžná úprava inokula

        účinné od 1. 5. 2004Inokulum se získá z výstupu druhého stupně čistírny nebo laboratorní jednotky zpracovávající převážně domovní odpadní vody.

        účinné od 1. 5. 2004Viz I.6.4.2 a I.6.5.

        účinné od 1. 5. 2004Použije se 0,5 ml na litr minerálního média.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.2.4 Příprava baněk

        účinné od 1. 5. 2004Do dvoulitrových Erlenmeyerových baněk se například odměří 800 ml minerálního média a do jednotlivých baněk se přidají dostatečná množství zásobních roztoků zkušební a referenční látky tak, aby se získaly koncentrace látky odpovídající 10 – 40 mg DOC na litr. Zkontrolují se hodnoty pH a popřípadě se upraví na 7,4. Baňky se inokulují odpadní vodou z druhého stupně čištění odpadních vod (viz I.6.4.2) v objemu 0,5 ml na litr. Připraví se rovněž slepé zkoušky s inokulem v minerálním médiu, avšak bez zkušební nebo referenční látky.

        účinné od 1. 5. 2004Podle potřeby se použije jedna nádoba ke kontrole možného inhibičního účinku zkušební látky inokulací roztoku, který obsahuje srovnatelná množství jak zkušební, tak referenční chemické látky v minerálním médiu.

        účinné od 1. 5. 2004Podle potřeby se také použije další, sterilní baňka s roztokem chemické látky bez inokula, a to ke kontrole, zda se zkušební chemická látka rozkládána abioticky (viz I.6.6).

        účinné od 1. 5. 2004Existuje-li dále podezření, že se zkušební látka významně adsorbuje na skle, kalu apod., provede se předběžný odhad pravděpodobného rozsahu adsorpce, a tedy vhodnosti zkoušky pro danou látku (viz tabulka 1). Nasadí se baňka obsahující zkušební látku, inokulum a sterilizační činidlo.

        účinné od 1. 5. 2004Obsah všech baněk se doplní minerálním médiem na 1 litr a po promíchání se z každé baňky odebere vzorek pro stanovení počáteční koncentrace DOC (viz příloha II, bod 4). Ústí baněk se zakryjí např. hliníkovou fólií tak, aby byla umožněna volná výměna vzduchu mezi baňkami a okolní atmosférou. Baňky se poté umístí do třepačky a zahájí se zkouška.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.2.5 Počet baněk v typické zkoušce
        1. účinné od 1. 5. 2004Baňka 1 a 2: Zkušební suspense
        2. účinné od 1. 5. 2004Baňka 3 a 4: Slepá zkouška s inokulem
        3. účinné od 1. 5. 2004Baňka 5: Kontrolní zkouška postupu
        4. účinné od 1. 5. 2004Dále se doporučují se nebo se podle potřeby použijí:
          1. účinné od 1. 5. 2004Baňka 6: Abiotická sterilní kontrola
          2. účinné od 1. 5. 2004Baňka 7: Kontrola adsorpce
          3. účinné od 1. 5. 2004Baňka 8: Kontrola toxicity
          4. účinné od 1. 5. 2004Viz také bod I.6.7.
      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.2.6 Provedení zkoušky

        účinné od 1. 5. 2004Během zkoušky se ve známých časových intervalech duplicitně stanovuje koncentrace DOC v každé baňce, a to dostatečně často, aby bylo možné určit začátek 10denního období rozkladu a úbytek v procentech na konci 10denního období rozkladu. Pro každé stanovení se odebere pouze minimální nezbytné množství zkušební suspense.

        účinné od 1. 5. 2004Před odběrem vzorků se podle potřeby nahradí ztráty odpařováním z baněk přidáním potřebného množství ředicí vody (1.6.1). Před odběrem vzorků se kultivační médium dobře promíchá a zajistí se, aby látky ulpělé na stěnách nádob přešly do roztoku nebo suspense. Vzorky se ihned po odběru zfiltrují přes membránu nebo odstředí (viz příloha II, bod 4). Zfiltrované resp. odstředěné vzorky se analyzují týž den, v opačném případě se uchovávají nejdéle 48 h při 2 – 4 °C nebo delší dobu při teplotě nižší než –18 °C.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVB.3 DATA A ZPRÁVY
      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.3.1 Zpracování výsledků

        účinné od 1. 5. 2004Rozklad v procentech v čase t se vypočte podle bodu I.7.1. (stanovení DOC) nebo podle bodu I.7.2 (specifická analýza).

        účinné od 1. 5. 2004Všechny výsledky se uvedou na příslušných formulářích přehledů dat.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.3.2 Platnost výsledků

        účinné od 1. 5. 2004Viz bod I.5.2.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVB.3.3 Zprávy

        účinné od 1. 5. 2004Viz bod I.8.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVB.4 PŘEHLED DAT

      účinné od 1. 5. 2004Dále je uveden příklad přehledu dat.

      účinné od 1. 5. 2004MODIFIKOVANÁ SCREENINGOVÁ ZKOUŠKA OECD

      1. účinné od 1. 5. 20041. LABORATOŘ
      2. účinné od 1. 5. 20042. DATUM POČÁTKU ZKOUŠKY
      3. účinné od 1. 5. 20043. ZKUŠEBNÍ LÁTKA
        1. účinné od 1. 5. 2004Název:
          1. účinné od 1. 5. 2004Koncentrace chemické látky v zásobním roztoku: mg·l-1
          2. účinné od 1. 5. 2004Počáteční koncentrace chemické látky v médiu v čase t0: mg·l-1
      1. účinné od 1. 5. 20044. INOKULUM
        1. účinné od 1. 5. 2004Zdroj:
          1. účinné od 1. 5. 2004Provedená úprava:
            1. účinné od 1. 5. 2004Předběžná úprava, pokud byla provedena:
              1. účinné od 1. 5. 2004Koncentrace suspendovaných látek v reakční směsi; mg·l-1
      1. účinné od 1. 5. 20045. STANOVENÍ UHLÍKU
        1. účinné od 1. 5. 2004Analyzátor uhlíku:
          účinné od 1. 5. 2004
          Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC MODIFIKOVANÁ SCREENINGOVÁ ZKOUŠKA OECD
          Baňka č.DOC po n dnech (mg·l-1)
          0n1n2n3nx
          Zkušební látka a inokulum1a1
          a2
          a, střední hodnota
          Ca(t)
          2b1
          b2
          b, střední hodnota
          Cb(t)
          Slepá zkouška s inokulem
          bez zkušební látky          		3c1
          c2
          c, střední hodnota
          Cc(t)
          4d1
          d2
          d, střední hodnota
          Cd(t)
      1. účinné od 1. 5. 20046. VYHODNOCENÍ NAMĚŘENÝCH DAT
        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC MODIFIKOVANÁ SCREENINGOVÁ ZKOUŠKA OECD
        Baňka č.Rozklad po n dnech
        0n1n2n3n4
        10
        20
        Střední hodnota*0
      2. účinné od 1. 5. 2004* Hodnoty D1 a D2 by neměly být průměrovány, pokud je mezi nimi významný rozdíl.
      3. účinné od 1. 5. 2004Poznámka: Podobné formuláře lze použít pro referenční chemickou látku a kontrolu toxicity.
      1. účinné od 1. 5. 20047. ABIOTICKÁ KONTROLA (nepovinná)
        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC MODIFIKOVANÁ SCREENINGOVÁ ZKOUŠKA OECD
        Čas (dny)
        0t
        DOC (mg·l-1) ve sterilní kontroleCs(0)Cs(t)

        účinné od 1. 5. 2004

      1. účinné od 1. 5. 20048. SPECIFICKÁ CHEMICKÁ ANALÝZA (nepovinná)
        účinné od 1. 5. 2004
        Tabulka 2: Zkušební podmínky ZKOUŠKA NA ÚBYTEK DOC MODIFIKOVANÁ SCREENINGOVÁ ZKOUŠKA OECD
        Zbylé množství zkušební
        chemické látky na konci
        zkoušky (mg·l-1)        		Primární rozklad
        v procentech
        Sterilní kontrolasb
        Inokulované zkušební médiumsa
  1. účinné od 1. 5. 2004IVC. METODA PRO STANOVENÍ „SNADNÉ“ BIOLOGICKÉ ROZLOŽITELNOSTI POMOCÍ UVOLŇOVÁNÍ OXIDU UHLIČITÉHO (CO2) – MODIFIKOVANÁ STURMOVA ZKOUŠKA – metoda C.4-C podle přílohy směrnice 92/69/EHS
    1. účinné od 1. 5. 2004IVC.1 PODSTATA METODY

      účinné od 1. 5. 2004Odměřený objem inokulovaného minerálního média obsahující známou koncentraci zkušební látky (10 – 20 mg DOC nebo TOC na litr), která je jediným zdrojem uhlíku, se provzdušňuje v temnu nebo v difusním světle regulovaným proudem vzduchu bez CO2. Rozklad se sleduje po dobu 28 dnů prostřednictvím vznikajícího CO2 jímaného v roztoku hydroxidu barnatého nebo sodného, kde se stanoví titrací zbytkového hydroxidu nebo jako anorganický uhlík. Množství CO2 vzniklého ze zkušební látky (po korekci na CO2 pocházející z čistého inokula) se vyjádří v procentech TCO2. Stupeň biologického rozkladu může být také vypočten z doplňkového stanovení DOC na začátku a na konci inkubace.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVC.2 POPIS METODY
      1. účinné od 1. 5. 2004IVC.2.1 Přístroje
        1. účinné od 1. 5. 2004a) Baňky na 2 – 5 l vybavené provzdušňovací trubicí dosahující až ke dnu nádoby a výstupnímo tvorem;
        2. účinné od 1. 5. 2004b) Magnetické míchačky pro zkoušení špatně rozpustných látek;
        3. účinné od 1. 5. 2004c) Absorpční lahv;
        4. účinné od 1. 5. 2004d) Zařízení pro regulaci a měření průtoku vzduchu;
        5. účinné od 1. 5. 2004e) Zařízení pro odstraňování CO2 při přípravě vzduchu bez CO2, popřípadě může být použita směs kyslíku bez CO2 a dusíku bez CO2 ve správném poměru (20 % O2 a 80 % N2) z lahví se stlačenými plyny;
        6. účinné od 1. 5. 2004f) Zařízení na stanovení CO2 buď titračně nebo pomocí analyzátoru anorganického uhlíku;
        7. účinné od 1. 5. 2004g) Zařízení pro membránovou filtraci (podle volby);
        8. účinné od 1. 5. 2004h) Analyzátor DOC (podle volby).
      1. účinné od 1. 5. 2004IVC.2.2 Příprava minerálního média

        účinné od 1. 5. 2004Příprava zásobních roztoků je popsána v části I.6.2.

        účinné od 1. 5. 2004Smísí se 10 ml roztoku a) s 800 ml ředicí vody, přidá se po 1 ml roztoků b) až d) a doplní se ředicí vodou na 1 litr.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVC.2.3 Příprava a předběžná úprava inokula

        účinné od 1. 5. 2004Inokulum lze získat z řady zdrojů: z aktivovaného kalu, ze splaškových vod, z povrchových vod, z půd nebo z jejich směsi.

        účinné od 1. 5. 2004Viz I.6.4, I.6.4.1, I.6.4.2 a I.6.5.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVC.2.4 Příprava baněk

        účinné od 1. 5. 2004Jako příklad jsou uvedeny hodnoty pro baňky na 5 litrů obsahující 3 litry suspense. V případě použití menších objemů se hodnoty úměrně upraví, musí být ovšem zajištěno, aby bylo možné přesně měřit vznikající CO2.

        účinné od 1. 5. 2004Do každé baňky na 5 litrů se přenese 2 400 ml minerálního média. Přidá se vhodné množství připraveného inokula (viz I.6.4.1 a I.65), aby koncentrace suspendovaných látek v konečném objemu 3 l inokulované směsi byla 30 mg·l-1. Eventuálně lze nejdříve zředit připravený kal v minerálním médiu na suspensi o koncentraci 500 – 1 000 mg·l-1 a poté přidat alikvotní části do baňky na 5 litrů, aby byla dosažena koncentrace 30 mg·l-1; zajistí se tím větší přesnost. Mohou být použity i jiné zdroje inokula (viz I.6.4.2).

        účinné od 1. 5. 2004Inokulovaná směs se přes noc provzdušňuje vzduchem bez CO2, aby se ze systému odstranil oxid uhličitý.

        účinné od 1. 5. 2004Odděleně do dvojic baněk se ze zásobních roztoků přidá zkušební látka a referenční látka tak, aby koncentrace pocházející z chemických látek byla v rozmezí 10 až 20 mg DOC nebo TOC na litr; některé lahve se nasadí jako kontrola inokula bez přidání chemických látek. Špatně rozpustné látky se odváží nebo odměří přímo do baněk, nebo se postupuje podle přílohy III.

        účinné od 1. 5. 2004Podle potřeby se jedna baňka použije ke kontrole možného inhibičního účinku zkušební látky, a to přidáním zkušební i referenční látky ve stejných koncentracích jako v ostatních baňkách.

        účinné od 1. 5. 2004Podle potřeby se další baňka použije k ověření, zda se zkušební látka nerozkládá abioticky, přičemž se použije roztok chemické látky bez inokula (viz I.6.6). Sterilizace se provádí přidáním vhodné koncentrace toxické látky.

        účinné od 1. 5. 2004Ve všech baňkách se upraví objem na 3 l přídavkem minerálního média bez CO2. Podle potřeby lze odebrat vzorky pro stanovení DOC (viz příloha II, bod 4) a/nebo pro specifickou analýzu. Poté se na výstup plynů u baněk připojí absorpční lahve.

        účinné od 1. 5. 2004V případě použití hydroxidu barnatého se za každou baňku na 5 litrů zařadí tři absorpční lahve, každá obsahující 100 ml roztoku Ba(OH)2 o koncentraci 0,0125 mol·l-1. Roztok nesmí obsahovat sraženinu síranů a uhličitanu barnatého a jeho koncentrace musí být stanovena bezprostředně před použitím. Je-li použit hydroxid sodný, spojí se 2 absorpční lahve, z nichž druhá slouží jako kontrola, že byl veškerý CO2 zachycen v první absorpční lahvi. K tomuto účelu se hodí absorpční lahve opatřené sérovými uzávěry. Do každé absorpční lahve se přidá po 200 ml roztoku NaOH o koncentraci 0,05 mol·l-1, což postačuje k absorpci veškerého oxidu uhličitého, který by se uvolnil při úplném rozkladu látky. Roztok hydroxidu sodného, i když je čerstvě připraven, obsahuje stopy uhličitanů; korekce se provede odečtením množství uhličitanů ve slepém pokusu.

      1. účinné od 1. 5. 2004IVC.2.5 Počet baněk v typické zkoušce
        1. účinné od 1. 5. 2004Baňka 1 a 2: Zkušební suspense
        2. účinné od 1. 5. 2004Baňka 3 a 4: Slepá zkouška s inokulem
        3. účinné od 1. 5. 2004Baňka 5: Kontrolní zkouška postupu
        4. účinné od 1. 5. 2004Dále se doporučují se nebo se podle potřeby použijí:
          1. účinné od 1. 5. 2004Baňka 6: Abiotická sterilní kontrola
          2. účinné od 1. 5. 2004Baňka 7: Kontrola toxicity
          3. účinné od 1. 5. 2004Viz také bod I.6.7.
      1. účinné od 1. 5. 2004IVC.2.6 Provedení zkoušky

        účinné od 1. 5. 2004Zkouška se zahájí probubláváním vzduchu bez CO2 suspensí při průtoku 30 – 100 ml·min-1. Za účelem analýzy obsahu CO2 se pravidelně odebírají vzorky absorbentu. Doporučuje se, aby se v průběhu prvních 10 dnů prováděly analýzy každý druhý až třetí den a dále pak každý pátý den až do 28. dne, což umožní rozpoznat období 10denního období rozkladu.

        účinné od 1. 5. 200428. den se (nepovinně) odebere vzorek pro stanovení DOC a/nebo pro specifickou analýzu, změří se pH suspensí a poté se do každé baňky přidá 1 ml koncentrované HCl; provzdušňuje se přes noc, aby se odstranil CO2 přítomný v suspensi. Poslední analýza uvolněného CO2 se provede 29. den.

        účinné od 1. 5. 2004Ve dnech, kdy se provádí stanovení CO2, se odpojí absorpční lahev s hydroxidem barnatým bližší zkušební baňce a roztok hydroxidu barnatého se titruje 0,05M HCl za přítomnosti fenolftaleinu jako indikátoru. Zbývající dvě absorpční lahve se posunou k baňce a na konec řady se zařadí nová absorpční lahev se 100 ml čerstvě připraveného 0,0125M hydroxidu barnatého. Titrace se provádějí podle potřeby, např. je-li pozorována v první absorpční lahvi zřetelná sraženina a před tím, než vznikne viditelná sraženina ve druhé absorpční lahvi, nebo alespoň jednou týdně. Jinou možností je provést při použití NaOH jako absorbentu odběr malého vzorku hydroxidu sodného pomocí injekční stříkačky (podle použitého analyzátoru uhlíku) z absorpční lahve, která je nejblíže k baňce. Vzorek se nastříkne přímo do IC-části analyzátoru uhlíku pro analýzu anorganického uhlíku.

        účinné od 1. 5. 2004Obsah druhé absorpční lahve se analyzuje pouze na konci zkoušky s cílem stanovit korekci na možný únik CO2.

    1. účinné od 1. 5. 2004IVC.3 DATA A ZPRÁVY
      1. účinné od 1. 5. 2004IVC.3.1 Zpracování výsledků
        1. účinné od 1. 5. 2004Množství CO2 zachyceného v absorpční lahvi je v případě titračního stanovení dáno vztahem:

          účinné od 1. 5. 2004

          1. účinné od 1. 5. 2004kde
            1. účinné od 1. 5. 2004V = objem HCl spotřebovaný při titraci 100 ml obsahu absorpční lahve (ml),
            2. účinné od 1. 5. 2004CB = koncentrace roztoku hydroxidu barnatého (mol·l-1),
            3. účinné od 1. 5. 2004CA = koncentrace roztoku kyseliny chlorovodíkové (mol·l-1).
        1. účinné od 1. 5. 2004Je-li CB 0,0125 mol·l-1 a CA 0,05 mol·l-1, je spotřeba pro titraci 100 ml roztoku Ba(OH)2 50 ml a hmotnost CO2 je dána vztahem:

          účinné od 1. 5. 2004

        účinné od 1. 5. 2004V tomto případě se tedy k přepočtu objemu HCl spotřebovaného při titraci na hmotnost vzniklého CO2 použije faktor 1,1.

        účinné od 1. 5. 2004S použitím příslušných výsledků titrace se vypočte hmotnost CO2 vzniklého ze samotného inokula a inokula se zkušební látkou a jejich rozdíl je hmotnost CO2 vzniklého ze samotné zkušební látky.

        účinné od 1. 5. 2004Je-li např. výsledkem titrace samotného inokula 48 ml a inokula se zkušební látkou 45 ml, je množství

        účinné od 1. 5. 2004

        účinné od 1. 5. 2004

        účinné od 1. 5. 2004a tedy hmotnost CO2 vzniklého ze zkušební látky 3,3 mg.

        1. účinné od 1. 5. 2004Biologický rozklad v procentech se vypočte podle vztahu:

          účinné od 1. 5. 2004

          1. účinné od 1. 5. 2004nebo

          účinné od 1. 5. 2004

          1. účinné od 1. 5. 2004přičemž 3,67 je převodní faktor (44/12) pro uhlík a oxid uhličitý.

        účinné od 1. 5. 2004Rozklad v procentech se po každém období vypočte dosazením hodnoty TCO2 vypočítané pro každý den až do doby, kdy byl měřen.

        účinné od 1. 5. 2004Při zachytávání do NaOH se vypočte hmotnost vzniklého CO2, vyjádřeného jako anorganický uhlík v mg, vynásobením koncentrace anorganického uhlíku v absorpční lahvi objemem absorpčního roztoku.

        1. účinné od 1. 5. 2004Rozklad v procentech se vypočte podle vztahu:
          účinné od 1. 5. 2004